类风湿关节炎滑膜细胞信号转导机制研究进展

滑膜细胞因子IL 1、TNF α、EGF、TGF β、PDGF、IGF 1在RA发病过程中可活化细胞内两条重要的信号通路 :受体蛋白酪氨酸蛋白激酶 Ras MAPK途径和非受体蛋白酪氨酸蛋白激酶 JAK STAT途径 ,其中受体蛋白酪氨酸蛋白激酶 Ras MAPKs信号转导路径异常是RA慢性滑膜炎的典型特征。研究G蛋白 AC cAMP信号转导通路及该通路与酶偶联受体 Ras MAPKs信号转导通路间的交互联系将具有十分重要的意义。     

纤维连接蛋白诱导人胚肺成纤维细胞增殖的信号转导通路研究

目的探讨纤维连接蛋白(FN)诱导人胚肺成纤维细胞(HFL-1)增殖的信号转导通路。方法采用不同浓度FN刺激HFL-1并观察磷酸酰基醇-3-激酶(PI3K)信号转导通路抑制剂wortmannin(WMN)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)信号转导通路抑制剂PD98059和P38蛋白激酶信号转导通路抑制剂SB203580对FN诱导HFL-1增殖作用的影响。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况。结果FN对HFL-1诱导增殖作用呈剂量依赖性升高趋势,在50ng/mL时作用显著;WMN,PD98059和SB203580均可抑制FN诱导的HFL-1细胞增殖。结论FN诱导HFL-1的细胞增殖可以通过PI3K和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导途径实现。     

基于STAT3通路探讨补肾活血方抑制骨细胞凋亡

目的探讨补肾活血方通过信号转导与转录激活子3(STAT3)通路抑制骨细胞的凋亡对骨质疏松的治疗作用。方法选取SPF级健康雌性C57BL/6小鼠75只,随机分为正常对照组11只及造模组64只。造模组采用去势法建立骨质疏松症模型,正常对照组仅暴露双侧卵巢而不切除。将造模成功的小鼠随机分为模型组、补肾活血方低、中、高剂量组及阳性对照组,各12只。模型组和正常对照组分别灌胃给予蒸馏水5 mL·kg^-1,1次/d;补肾活血方低、中、高剂量组分别灌胃给予1.79、3.57、7.14 g·mL^-1补肾活血方药液5 mL·kg^-1,1次/d;阳性对照组灌胃给予0.14 mg·mL^-1尼尔雌醇混悬液5 mL·kg^-1,1次/d。各组小鼠均治疗12周。检测比较各组骨形态参数,骨细胞凋亡指数(AI),以及骨组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Janus激酶2(JAK2)、STAT3表达水平。结果与模型组比较,各组小鼠骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、...     

Akt、Bad在大鼠肝缺血再灌注中的变化及作用

目的:研究PI3K-Akt信号转导系统成员Akt1、Bad在大鼠肝缺血再灌注(IR)后的激活规律,探讨该通路在IR损伤中的作用.方法:将60只SD雄性大鼠随机分成4组:空白对照组(Sham)、缺血再灌注组(IR)、溶剂对照组(DMSO)、阻断剂组(LY),于复灌0、0.5、1、2、4 h各不同时间点取材,应用免疫组化和免疫印迹法测定肝组织中Akt1、p-Akt1等信号蛋白的表达;H-E染色观察肝组织显微结构;同时测定血清肝功酶水平.结果:IR组大鼠在各复灌时间点上都显示明显肝细胞损伤,并随复灌时间延长加重;肝细胞胞质内有p-Akt1(Thr-308)表达,并在复灌0.5 h达到高峰.应用PI3K特异性阻断剂LY294002后,大鼠p-Akt1(Thr-308)表达在复灌0.5 h较IR组明显减少(P<0.01),但血清肝功酶指标在复灌4 h才明显升高(P<0.01);同时,LY294002使Akt1下游底物Bad(Ser-136)磷酸化水平降低、细胞损伤加重.结论:在缺血再灌注过程中 PI3K-Akt信号转导通路的激活对肝脏起到了一定的保护作用.     

JNK信号传导通路在赭曲毒素A体外诱导人肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的探讨赭曲毒素A(OA)诱导人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的作用机制。方法体外培养HKC,随机分为空白对照组、溶剂(0.04%乙醇)对照组、OA 1μmol·L-1处理组及c-Jun氨基端激酶(JNK)阻断剂SP600125 0.5μmol·L-1预处理+OA组。细胞处理24h后,分别采用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,免疫细胞化学染色和Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶(caspase)3蛋白的表达以及JNK的磷酸化水平(p-JNK)。结果OA组细胞凋亡率明显高于溶剂对照组〔(4.24±0.17)%vs(1.06±0.14)%〕,SP600125预处理+OA组HKC凋亡率〔(2.44±0.38)%〕明显低于OA组。OA组caspase 3蛋白的表达和p-JNK水平明显升高,SP600125预处理+OA组caspase 3蛋白的表达和p-JNK水平较OA组明显降低。结论OA可能通过激活JNK,上调caspase 3蛋白的表达而诱导HKC凋亡。     

细胞因子信号负调控因子3基因转染对高糖刺激下肾小球系膜细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨细胞因子信号负调控因子(SOCS)3基因对高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMCs)增殖、凋亡的影响。方法以脂质体为载体将PCR3.1 SOCS3转染至体外培养的HMCs,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学法鉴定转染前后细胞中SOCS3 mRNA和蛋白表达;高糖培养HMCs 12、24、48 h,采用蛋白印迹法分别检测正常对照组(CG)、高糖组(HG)、高糖+空质粒转染(HG+PV)组、高糖+SOCS3基因转染(HG+PS)组蛋白酪氨酸磷酸激酶(JAK)2、信号转导及转录活化因子(STAT)1蛋白酪氨酸磷酸化水平变化;免疫细胞化学法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)法检测转染前后细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI)。结果经鉴定,转染后HMCs中有SOCS3 mRNA和蛋白稳定表达;与CG组和HG+PV组相比,HG+PS组细胞中JAK2、STAT1蛋白酪氨酸磷酸化水平显著下降(P<0.05),PI显著减少(P<0.01),AI无明显差异。结论 SOCS3蛋白可能通过降低JAK2、STAT1酪氨酸磷酸化水平抑制HMCs增殖。     

细胞穿透肽YARA介导增强型绿色荧光蛋白转导入人结直肠癌细胞的实验研究

目的 构建原核表达载体pET15b-YARA EGFP,表达并纯化出融合蛋白YARA-EGFP,观察其穿透人结直肠癌细胞的情况.方法 用分子克隆技术构建出表达型载体pET15b-YARA-EGFP,在E.coli BL21(DE3)中表达融合蛋白YARA-EGFP,将鉴定和纯化后的融合蛋白加入体外培养的人结直肠癌细胞.结果 得到纯化的融合蛋白YARA-EGFP,能高效地转导入体外培养的人结直肠癌细胞,并表现出剂量和时间依赖性,MTT法检测在其高浓度时仍对细胞无毒性.结论 YARA-EGFP融合蛋白能高效地转导入体外培养的人结直肠癌细胞.     

黑色素瘤相关抗原A3基因在肿瘤中的表达、机制调控及相关应用

黑色素瘤相关抗原A3（melanoma-associated antigen A3,MAGE-A3）表达于多种恶性肿瘤,而在正常组织中不表达（除睾丸和胎盘外）,具有肿瘤特异性,也是肿瘤特异性免疫治疗的理想靶点。在恶性肿瘤中MAGE-A3表达调控机制尚不明确,通过基因甲基化/脱甲基化、抑制抑癌基因p53的转录活性、调控caspase作用、作为靶基因接受成纤维细胞生长因子受体2信号通路的作用等,使其发挥生物学功能。未来,利用其制备多基因联合修饰的肿瘤基因工程疫苗,精确地诊断、判断预后,并且在肿瘤疾病中做功能性靶向治疗等值得期待。本文就黑色素瘤相关抗原A3基因在肿瘤中的表达、机制调控及相关应用进行综述。     

痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌Rho/Rho激酶通路的影响

目的 观察痰瘀同治方对高脂大鼠心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemic-reperfusion injury,MI/RI）Rho/Rho激酶信号转导通路的影响.方法 采用随机数字表法将60只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、西药对照组及痰瘀同治方高、低剂量组.可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min 再灌注2h复制MI/RI模型,应用RT-PCR及Western blotting法检测各组大鼠心肌RhoA、ROCK Ⅱ mRNA 表达及ROCK下游底物肌球蛋白轻链（MLC）磷酸化水平.结果 与模型组比较,痰瘀同治方低剂量组可降低心肌RhoA、ROCKⅡmRNA及磷酸化MLC （p-MLC）水平（P值分别为0.045、0.042、0.023,P均＜ 0.05）.结论 痰瘀同治方可通过抑制RhoA、ROCKⅡ激活及p-MLC蛋白过度表达而调控Rho/Rho激酶信号转导通路,发挥其对缺血再灌注损伤心肌的保护作用.