三日龄大鼠缺氧缺血性脑损伤对大脑MRI影像和学习记忆能力的远期影响

Objective To investigate the activation of apoptotic genes of the brain with hypoxia- ischemia (HI) in newborn SD rats, and MRI changes and memory and learning ability in adulthood. Methods HI was induced by right carotid artery ligation followed by 2.5 h of hypoxia (6% O2) on 3-day-old SD rats (n=36). Control pups were sham-operated (n = 27). Right brain hemisphere was collected at 12 h and 7 d after HI and subjected to an apoptosis Oligo GEArrayR. MRI and Morris water maze test were performed on both groups at 42 and 44 days old, respectively. Results Comparing to 12 h after HI, up-regulated apoptotic genes included TNF, Caspase and pro-apoptotit genes of Bcl2 families, whereas the anti-apoptotic genes of Bcl2 family were down-regulated at 7 d after HI. The MRI assessment of the rats in HI group demonstrated that the area of the right cerebra l cortex was significantly smaller than the left side and control [periventricular layer: (23.5±3.6) mm2 vs (33.0±4.3) mm2, (34.5±3.9) mm2; hippocampus layer: (18.9±4.4) mm2 vs (29.1±5.0) mm2,(30.8±4.5) mm2, both P<0.01]. During the navigation trial, the HI rats demonstrated longer escape latency (4th day: (52.7±35.9) vs (17.8±8. 9) s, P<0.01). HI rats passed the platform less times than the control ones (T= 292.5, P<0.05) in space probe trial. Conclusions The activation of apoptotic genes induced by HI brain injury remains until 7 days later, involving intrinsic and extrinsic apoptotic pathway. The apoptosis of neural cells may lead to poor development of the cortex and impair the memory and learning ability in the adult rats after neonatal hypoxia- ischemia injury.     

头部亚低温不同治疗时间对新生儿中重度缺氧缺血性脑病的疗效观察

目的 探讨选择性头部亚低温治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)不同持续时间对神经系统保护的影响.方法 选择2006年4月至2010年10月佛山市南海区黄岐医院新生儿科收治的中重度HIE患儿,随机分为选择性头部亚低温治疗48 h组、72 h组、96 h组及对照组.对各组患儿生后28天行新生儿20项行为神经测定(NBNA)评分、18月龄时采用贝利婴儿发育量表进行神经行为发育评价,同时监测治疗不良反应、严重伤残例数及死亡例数.结果 共105例患儿完成了治疗和随访,亚低温治疗48 h组、72 h组、96 h组及对照组完成治疗的例数分别为27、26、26及26例.72 h组和96 h组患儿生后28天NBNA评分和18月龄时贝利评分均显著高于48 h组和对照组[NBNA评分:(38.2±5.5)、(37.6±5.7)比(32.5±3.7)、(31.1±3.8),神经发育指数:(98.4±12.5)、(100.1±13.7)比(88.7 ±13.3)、(85.1±10.9),心理运动发育指数:(101.7±15.8)、(99.6±14.1)比(89.2±11.9)、(87.0±13.3),P＜0.05],严重伤残发生率和病死率均低于48 h组和对照组[严重伤残:7.7％、11.5％比22.2％、23.0％,病死率:0、0比11.1％、7.7％,P＜0.05];而72 h组和96 h组之间、48 h组和对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05).96 h组血小板减少、电解质紊乱及血糖异常的发生率高于48 h组和72 h组(P＜0.05),48 h组和72 h组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 选择性头部亚低温治疗持续72 h对新生儿神经系统近期和远期功能恢复都有明显疗效,明显优于48 h;而延长低温持续时间可能会增加不良反应的发生.     

脑衰蛋白调节蛋白2对新生大鼠缺氧缺血后轴突及树突损伤的调控作用

目的 探讨在体内缺氧缺血（hypoxia-ischemia, HI）条件下,脑衰蛋白调节蛋白2（collapsin response mediator protein 2, CRMP-2）与轴突及树突损伤的关系。方法 以10日龄新生SD大鼠为研究对象,行右侧颈总动脉结扎手术,8%氧氮混合气缺氧2.5 h制作HI模型。Western blot法检测HI后大鼠皮层及海马脑组织CRMP-2总蛋白和磷酸化蛋白、淀粉样前蛋白（amyloid precursor protein, APP）表达变化;使用蛋白激酶B（Akt）抑制剂渥曼青霉素（wortmannin）和LY294002后,Western blot和免疫组化染色法检测CRMP-2总蛋白和磷酸化蛋白在HI后4 h、24 h改变;HI后72 h,Western blot 和免疫组化检测渥曼青霉素 对APP表达的影响,电镜检测轴突及树突损伤。结果 HI后CRMP-2总蛋白表达无明显变化;磷酸化CRMP-2（p-CRMP-2）蛋白表达在0.5 h短暂上升,此后一直处于低水平;HI后APP蛋白表达在2 h开始上升,此后2~24 h一直处于稳定增高水平,48~72 h表达量再次增高。HI后4 h和24 h,渥曼青霉素或LY294002干预未改变CRMP-2总蛋白表达量,但p-CRMP-2的表达量增加。HI后72 h,渥曼青霉素预处理增加APP的表达量,加重轴突及树突损伤。 结论 CRMP-2 作为Akt信号通路下游蛋白,参与调控新生大鼠HI后神经元轴突和树突损伤。     

IGF-1对大鼠局灶性脑损伤HSP_(70)表达的影响

目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后热休克蛋白70(HSP70)表达的影响及与缺血的关系,探讨IGF-1对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:制作SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。将55只SD雄性大鼠随机分为假手术组(n=5)、对照组(n=25)、IGF-1治疗组(n=25),其中后两组按缺血再灌时间(6h、12h、1d、3d、7d)不同可分为5个亚组,每组5只,治疗组于缺血2h再灌注1h后经腹腔注入40μg/kg稀释为1ml的IGF-1,假手术组及对照组同时腹腔注入生理盐水1ml。以上动物均在再灌注后规定时间点用4%多聚甲醛经心脏灌注固定,取大鼠脑组织,应用免疫组化S-P法和HE染色检测HSP70蛋白表达及脑组织结构病理变化。结果:与对照组相比,治疗组大鼠脑组织HSP70表达明显增加(P<0.05),其神经细胞坏死程度明显减轻(P<0.05)。结论:IGF-1在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中起保护作用,其作用机制包括增加HSP70蛋白的表达,发挥其神经保护作用。     

64排动态CT脑灌注成像在脑梗死缺血半暗带中的临床应用

目的应用64排动态CT脑灌注成像技术探讨脑梗死缺血半暗带情况。方法观察测量43例存在缺血半暗带脑梗死患者的梗死核心区、缺血半暗带区及其镜像对侧各灌注参数值。结果 43例缺血半暗带区表现为平均通过时间(MTT)、达峰时间(TTP)均延长,脑血流量(CBF)下降,而脑血容量(CBV)表现为轻度升高、正常或轻度降低。缺血半暗带区与梗死核心区比较,CBV、CBF、MTT及TTP值差异均有统计学意义(P<0.05)。缺血半暗带与健侧对应区比较,CBF、MTT、TTP值差异有统计学意义,CBV差异无统计学意义。结论应用64排动态CT脑灌注成像,对脑梗死患者可明确病变部位、范围以及有无缺血半暗带的存在。     

人骨髓基质细胞脑移植改善大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的观察人骨髓基质细胞(BMSCs)移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用,探讨BMSCs脑移植治疗HIBD的可行性。方法36只新生大鼠随机分为对照组、HIBD组和移植组(均n=12)。HIBD组和移植组大鼠7日龄时结扎左侧颈总动脉后吸入8%氧气2h制成HIBD模型。对照组仅分离左颈总动脉,不予结扎和缺氧。分离培养人BMSCs,损伤后3d将BMSCs立体定位脑移植到移植组大鼠左侧感觉运动皮层。3～4周龄时,观察大鼠行为学和组织学的改变,并用免疫荧光检测移植细胞的存活情况。结果缺氧缺血后3周,HIBD组海马DG区和皮层单位面积内神经元数目较正常组减少[海马DG区:(39.2±5.6)个vs(51.1±3.9)个,P<0.001;皮层:(12.3±3.0)个vs(17.8±3.0)个,P<0.001]。BMSCs移植后海马DG区和皮层单位面积内神经元数目[海马:(44.9±3.1)个,皮层:(17.5±3.1)个]较HIBD组增加(P<0.01)。与对照组比较,HIBD组在T迷宫、感觉运动功能测试中表现出明显的不足。BMSCs脑移植组各项行为学测试成绩较HIBD组均有明显改善。免疫荧光显示移植后3周,BMSCs在脑内存活。结论BMSCs脑移植可以改善新生鼠HIBD。     

内源性激活素A水平与新生儿窒息及其预后的关系

目的研究内源性激活素A（ACT A）的水平变化及其与新生儿窒息后缺氧缺血性脑病（HIE）的发生、严重程度以及预后的相关性。方法用ELISA方法动态监测58例窒息足月新生儿（轻、重度窒息39、19例）和30例正常足月新生儿血清ACT A及成纤维细胞生长因子（FGF）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度（脐血、7d）,同时观察意识状态、肌张力、原始反射、有无惊厥及瞳孔改变、呼吸、心率、囟门张力等临床指标,结合颅脑CT进行临床诊断与分度。结果窒息新生儿脐血血清ACT A,FGF和TNF-α水平明显升高（P均＜0.01）。ACT A水平与生后1min Apgar评分呈负相关（r＝-0.948, P＜0.01）。生后7?d窒息组患儿血清ACT A、FGF水平仍高于对照组(P均＜0.01), TNF-α水平差异无统计学意义(P＞0.05)。各项临床指标按照新生儿HIE的临床分度标准量化赋分,与血清ACT A水平进行相关性分析,结果显示ACT A水平与HIE的严重程度呈正相关（r＝0.962,P＜0.01）。结论内源性ACT A参与窒息后新生儿HIE的发病过程,动态检测内源性ACT A水平对判断窒息所致新生儿HIE的严重程度及估计预后可能具有重要价值。     

11C-雷氯必利的自动化制备及其在新生猪脑PET/CT显像的应用

目的自动化制备D2受体显像剂11 C-雷氯必利(11 C-raclopride),并应用于正常新生猪脑D2受体PET/CT显像。方法气相循环法合成11 C-碘甲烷(CH3I)为中间体制备11 C-raclopride,应用于正常新生猪脑PET/CT动态显像,绘制双侧基底节时间—活性动态曲线。结果制备11 C-raclopride最终产物14.6±3.6(8.8～15.0)mci,比活度68.8±20.9(39.0～86.8)GBq/μmol,放化纯度>99%。PET/CT显像示:3～5min基底节区放射性达高峰,双基底节显示清晰,放射性分布明显高于脑内其它部位;随后,基底节区放射性缓慢降低,30min达稳定水平。结论自动化制备11 C-raclopride的方法简便,过程容易控制,可应用于新生猪D2受体PET/CT显像,为缺氧缺血脑损伤D2受体功能状态的研究奠定基础。     

《实验动物与比较医学》第25卷第1～4期总目次

·主编寄语· 抚前瞻后，大力发展我国比较医学—写于本刊更名之际··························，····································……刘瑞三(67) ·学者论坛· 对中闺实验动物科学事业儿个问题的浅见(续).·································································……徐兆光，刘瑞三(3) 如何开展外科比较医学研究·····，····························…     

Calpain抑制剂-3对新生大鼠脑缺氧缺血后海马CA1区Caspase-3表达和神经元凋亡的影响

目的：钙依赖中性蛋白酶Calpain的活化可引起神经元凋亡,其抑制剂3(MDL28170)对成年动物脑缺血有治疗作用,但尚不清楚MDL28170对新生动物缺氧缺血性脑损伤(HIBD)是否也有治疗作用。本研究观察了MDL28170对新生大鼠HIBD后海马CA1区Caspase3表达及细胞凋亡的影响,探讨其神经保护作用机制。方法：将7日龄新生SD大鼠随机分为HIBD模型组(n=40)、干预组(n=40)及对照组(n=8),干预组在HI后0h、2h、4h予腹腔注射MDL2817050mg/kg,模型组和对照组同时予腹腔注射生理盐水。干预组和模型组大鼠在HI后6h、12h、24h、48h、72h各处死8只,用免疫组化染色和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分别检测海马CA1区Caspase3的表达和神经凋亡。结果：HIBD组大鼠损伤侧海马CA1区Caspase3阳性细胞在HI后6h时较对照组增多(13.4±3.5/HPvs2.6±0.6/HP,P=0.028),于48h(27.1±4.1/HP)达到高峰,72h仍高于对照组(22.6±4.8/HP,P<0.001);TUNEL阳性细胞于HI后6h开始增多,12h时与对照组比较差别有显著性(25.0±1.7/HPvs2.3±1.5/HP,P<0.001),48h(67.8±2.6/HP)到达高峰,72h仍处于较高水平(44.3±6.8/HP)。MDL28170干预可明显减少Caspase3及TUNEL阳性细胞数量,与模型组比较48h内差异有显著性,72h以后作用不明显。结论：MDL28170可通过抑制海马CA1区Caspase3的表达,减少脑细胞凋亡,起到脑保护作用。