TSH的快速免疫检测在微流控芯片系统中的应用

目的建立一种可将免疫反应原理与化学发光技术相结合的微流控芯片系统。方法采用激光直接加工法制备微流控芯片,用双抗夹心法测定TSH。结果芯片系统可以在25min内完成TSH的检测流程,所需的标本和抗体试剂量为10μl,线性范围为0-50μIU/ml,批内CV平均为4.7%,批间CV平均为4.6%,平均回收率为95.3%。结论用于检测TSH的微流控芯片系统灵敏、快速、操作简便、可重复使用。     

叶酸对突发性耳聋患者血浆同型半胱氨酸水平的影响

目的探讨叶酸降低突发性耳聋(SSHL)患者血浆同型半胱氨酸(tHcy)水平的作用及其使用的最适剂量。方法以10次随机抽样获得的210例SSHL患者作为研究对象。除采用相同的常规治疗外,患者每天口服不同剂量的叶酸(0.2、0.4、0.8、2.0、5.0、10.0、15.0 mg,A~G组)及相同剂量的维生素B6、B12。采用荧光偏振法分别检测治疗前和治疗后3个月的血浆tHcy水平。另以210例有血浆tHcy检测资料的非SSHL者作为对照组。就SSHL组与对照组以及SSHL组中A~G组的tHcy水平进行统计学分析。结果SSHL组血浆tHcy水平为(18.07±1.58)μmol/L,显著高于对照组的(13.63±1.33)μmol/L(P<0.001)。A~G组的tHcy水平分别较治疗前下降12%、19%、22%、23%、24%、29%和26%;A~G组在听力恢复方面的组间比较无显著性差异(P>0.05)。结论SSHL患者血浆tHcy水平明显升高。叶酸在降低SSHL患者tHcy水平方面可能起重要作用,10 mg/d是值得推荐的口服最适剂量。     

多腺苷二磷酸核糖基化修饰与神经退行性变性疾病

神经退行性疾病的发病率越来越高,但其治疗手段有限。多腺苷二磷酸核糖基化修饰（PARylation）是由多腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）催化的蛋白质翻译后修饰。PARylation通过影响蛋白质在细胞内的移位、聚集、蛋白质活性和细胞死亡,参与脑卒中、帕金森病、阿尔茨海默病、运动神经元病等神经退行性变性疾病的发生和发展。PARP抑制剂通过抑制蛋白PARylation,在药物临床前试验和临床试验Ⅰ期都展现了明显的神经保护作用。然而,寻找作用更特异的、符合神经退行性变性疾病治疗药动学特点的新型PARP抑制剂,将是抗神经退行性药物研发的新方向。本文就PARylation与神经退行性变性疾病的研究进展作一综述。     

血清戊型肝炎抗体检测的比较研究

目的评价戊型肝炎抗HEV E2 IgM、IgG酶联免疫试剂(捕获法)在戊型肝炎诊断中的意义。方法对226例肝病患者及50例健康体检者进行抗HEV E2 IgM、IgG检测,同时对226例患者进行上海科华抗HEV IgM、IgG试剂平行检测。结果抗HEV E2 IgM ELISA试剂在226例肝病患者中检出43例阳性,阳性率为19.0%。上海科华试剂在226例肝病患者中检出45例抗HEV-IgM阳性和/或抗HEV-IgG阳性,阳性率为19.9%,与抗HEV E2 IgM ELISA试剂检测结果相符,差异无统计学意义(P>0.05)。抗HEVE2IgM阴性、抗HEV IgG阳性的99例临床诊断考虑戊型肝炎既往感染病例中,上海科华试剂检出16例抗HEV IgG阳性,占16.2%。结论抗HEV E2 IgM ELISA试剂用于戊型肝炎急性感染的检测灵敏准确,是一个较好的HEV近期感染指标。万泰抗HEVIgG试剂在戊型肝炎既往感染的诊断上具有准确、敏感的优势。     

不同吸收促进剂及酶抑制剂对胰岛素体内及体外口腔黏膜渗透性的影响

目的：研究不同的吸收促进剂及酶抑制剂对胰岛素透过口腔黏膜的影响。方法：体外实验中,在不同吸收促进剂及酶抑制剂作用下,测定胰岛素透过仓鼠和家兔口腔黏膜的渗透系数;体内实验中,在胰岛素口腔喷雾剂中加入不同的吸收促进剂及酶抑制剂,考察大鼠经口腔喷入胰岛素后的血糖降低情况。结果：SDCh, Brij78, SLS以及lecithin可以显著增加胰岛素透过口腔黏膜的渗透系数,而aprotinin,bacitracin, 1-menth ol 以及 poloxamer的作用相对较小。胰岛素溶液中加入SDCh, Brij78, SLS以及lecithin 后,正常大鼠口腔喷雾给药,药理生物利用度都有显著的提高,而aprotinin ,b acitracin, 1-menthol 以及 poloxamer对血糖的影响较小。结论：对于考察吸收促进剂及酶抑制剂对胰岛素的促进吸收作用来说,体外实验与体内实验结果是一致的,可以通过体外实验来粗略地筛选吸收促进剂及酶抑制剂,为体内实验结果提供更多的线索和思路。     

酶联荧光分析法在血清催乳素测定中的应用及其价值

①目的探讨酶联荧光分析法(ELFA)测定血清催乳素及其临床应用价值。②方法采用ELFA法测定不同浓度血清催乳素(PRL)的精密度、灵敏度、线性范围、回收率、标准曲线的稳定性及干扰因素。③结果ELFA法测定PRL的总CV值为3.2%~4.3%;分析灵敏度为0.5ng/mL,线性范围为0.5~200ng/mL,回收率为102.2%,标准曲线的稳定性为12天,高浓度的胆红素、血红蛋白和甘油三酯对对测定结果无显著性影响(P>0.05)。④结论ELFA法测定血清PRL操作简便,结果准确可靠,自动化程度高,且检测速度快,有较宽的线性范围和较高的精密度。     

对苯二甲酸接触工人尿酶及微球蛋白的变化

选择１２７名ＴＰＡ作业工人进行动式个体采样,并留取１２７名ＴＰＡ作业工人当日工前工后尿样和７０名对照工人的工前尿。对尿样中γ谷氨酰转肽酶（ＧＧＴ）、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、Ｎ乙酰βＤ氨基葡糖苷酶（ＮＡＧ）活性以及尿ＴＰＡ、α１微球蛋白（α１ＭＧ）、β２微球蛋白（β２ＭＧ）水平进行分析。结果显示,ＴＰＡ接触组尿ＧＧＴ、ＡＬＰ、ＬＤＨ、ＮＡＧ活性以及尿α１ＭＧ、β２ＭＧ水平与对照组相比无显著差别,而５～ｍｍｏｌ／ｍｏｌ．Ｃｒ尿ＴＰＡ负荷组工人尿β２ＭＧ与对照组相比有明显升高（Ｐ＜００５）,尿β２ＭＧ与尿ＴＰＡ负荷量呈现一定的剂量依赖关系。尿ＴＰＡ水平对尿酶活性、α１ＭＧ均未产生明显影响。不同累积接尘量和不同工龄的工人尿酶和微球蛋白无明显差异。提示ＴＰＡ对肾实质可造成一过性可逆性影响,尚不能说明肾实质受到器质性损伤。     

化学发光定量测定HPL在孕产妇监护中的意义

目的用连续测定HPL的方法判断产妇胎盘功能，诊断胎儿在宫内的生长发育情况。方法通过HPL单克隆抗体作为固相包被，HPL多克隆抗体与辣根过氧化物酶偶联制成酶标抗体，以鲁米诺作为发光底物方式建立的双抗体夹心法人血清HPL化学发光免疫定量分析法。结果孕妇携有先兆流产、异常妊娠等症时，HPL值将连续下降。当HPL〈4mg／L时，流产不可避免。结论采用化学发光免疫分析法定量检测孕妇血清中HPL含量，对快速诊断胎盘功能及胎儿发育迟缓等疾病有一定的临床意义。     

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的原核表达、纯化及酶活检测

目的：以人类多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶2（ppGalNAc-12）为研究对象，利用载体pGEX-5X-3在大肠杆菌（E．Coli）BL21中原核表达其编码序列，并对表达产物进行纯化、复性及酶活检测。方法：首先利用PCR技术从克隆载体pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列，将其亚克隆至原核表达载体pGEX-5X-3，形成重组表达质粒pGEX-5X-3／T2。重组质粒转化大肠杆菌DH5α，测序鉴定后转化BL21，异丙基硫代半乳糖（IPTG）诱导后，表达产物为主要以包涵体形式存在的融合蛋白。对其复性后用谷胱甘肽-琼脂糖（Glutathione-Sepharose）4B亲和层析柱进行纯化。然后根据ppGalNAc-T2的催化功能，设计底物，建立酶促反应体系，利用高效液相色谱（HPLC）进行酶活分析。结果：成功构建了原核表达重组载体pGEX-5X-3／T2，通过蛋白质电泳检测到分子量约为90 kD的融合蛋白的表达，利用亲和层析得到纯化的酶蛋白，并经Western印迹得以验证。反应后体系上柱洗脱后出现酶促反应的产物洗脱峰。结论：成功构建了重组表达载体pGEX-5X-3／T2，ppGalNAc-T2伞长编码序列被成功表达、纯化及复性，检测到具有酶活性。     

猪肾碱性磷酸酶的提纯及性质研究

目的：从猪肾中提取碱性磷酸酶(ALP)，并对其能否作为参考品进行研究。方法：从猪肾皮质中分离刷状缘微绒毛膜，用正丁醇溶解膜结合的酶，经硫酸铵沉淀，DEAE-Sephacel、ConA-Sepharose、Sephadex G-200及抗γ-谷酰基转移酶(GGT)免疫亲和层析提纯ALP。结果：提纯的ALP比活达402kU／g蛋白，几乎不含杂酶(未检出ALT、AST、ChE、AMY、CK、LDH，GGT仅含2U／780U ALP)。其对底物4-硝基磷酸酚(4-NPP)的Km值为1．35mmol／L，最适pH值为10．40。结论：提纯的猪肾ALP与人血清中的ALP酶动力学特性非常相似，为进一步研制ALP参考品奠定了基础。