自组装多肽用于药物递送的研究进展

近年来,自组装多肽（SAP）因具有良好的生物相容性、灵敏的响应性及特定的生物功能而备受关注。SAP在特定情况下能形成规则有序的纳米结构,表现出不同于单分子的优势和特性,已广泛应用于细胞培养、组织工程和药物递送等领域。该文主要对多肽自组装形成的纳米类型及其在药物递送方面的应用进行综述,包括化学小分子及核酸、多肽、蛋白质等生物大分子,总结了SAP作为药物递送载体所面临的挑战,并展望其发展前景。     

高致病性禽流感H5N1NP蛋白与NIK蛋白相互作用初步研究

目的 研究高致病性禽流感H5N1(A/goose/Jilin/hb/2003)核蛋白(NP)与NF-κB 诱导激酶(NIK)是否存在蛋白质相互作用,探讨H5N1 NP对NIK诱导的NF-κB转录活性的影响.方法 从人宫颈癌细胞系HeLa细胞的总RNA中经逆转录和PCR获得NIK的全长cDNA双链片段,分别以其和pcDNA3-Flag-NP载体为模板,pCMV-Myc-N和pGEX-4T-1为载体,构建真核表达载体pCMV-Myc-NIK和原核表达载体pGEX-4T-1-NP (GST-NP),并通过免疫共沉淀及GST pull-down实验检测H5N1 NP和NIK之间是否存在相互作用,利用双荧光素酶报告基因系统检测H5N1 NP对NIK诱导的NF-κB转录活性的影响.结果 免疫共沉淀及GST pull-down实验表明,构建的真核表达载体pCMV-Myc-NIK和原核表达载体pGEX-4T-1-NP(GST-NP)均能正确表达,H5N1 NP与NIK之间存在相互作用;报告基因结果显示,H5N1 NP蛋白能明显抑制NIK诱导的NF-κB转录活性.结论 H5N1 NP与NIK之间存在蛋白质相互作用,并抑制NIK诱导的NF-κB转录活性,为进一步研究H5N1的致病机制打下基础.     

脑血管内皮细胞中转化生长因子β以Smad4依赖方式上调Notch4

目的 研究内皮细胞中NOTCH受体是否作为转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)/Smad4信号通路下游靶分子而被TGF-β/Smad4直接调节.方法 利用实时荧光定量PCR、Western印迹实验研究TGF-β对notch1、notch4基因表达的调节,利用荧光素酶报告基因实验研究TGF-β对notch1、notch4基因启动子活性的调节,利用染色质免疫共沉淀实验研究notch1、notch4基因启动子与SMAD蛋白之间的相互作用.结果 TGF-β1和骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4, BMP4)的刺激在转录水平上促进notch1和notch4表达.它们还促进SMAD4与notch4基因启动子上SMAD结合位点的结合.在敲低SMAD4或notch4基因启动子SMAD结合位点突变的情况下,notch4的表达失去对TGF-β1和BMP4的反应性.结论 脑血管内皮细胞中SMAD4介导的TGF-β/BMP信号直接上调NOTCH受体表达.     

人源胞红蛋白转基因秀丽线虫的制备与鉴定

目的：为了以秀丽线虫为模式生物研究人源胞红蛋白（human cytoglobin,hCGB）的生理功能,构建hCGB的秀丽线虫表达载体,并通过显微注射的方法制备转基因线虫。方法：将通过RT-PCR获得的hCGB的cDNA序列亚克隆到pFX-unc-119表达载体中,通过显微注射的方法获取染色体外转基因线虫,采用紫外线（UV）照射的方法,筛选获得整合到染色体中的株系,并采取Western印迹和免疫组织化学法鉴定外源基因的表达。结果与结论：成功地构建了hCGB基因的表达载体并获得了3个hCGB的转基因线虫株系,同时获得了3个作为功能对照研究的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）转基因线虫株系,为深入开展胞红蛋白的功能研究奠定了基础。     

卵巢肿瘤干细胞耐药机制研究进展

卵巢癌治疗中的主要问题是高复发率和产生耐药性.肿瘤干细胞具有无限增殖的能力,对药物的耐受性增加,提示肿瘤干细胞与化疗耐药的关系密切.从耐药卵巢癌细胞中可分选出具有特定表面标志的肿瘤干细胞,其为肿瘤形成提供可自我更新并在传代中保持肿瘤特性不变,是卵巢癌耐药性产生和复发的根本因为.利用卵巢癌干细胞表面标志分子的特异性,使化...     

基于Bayes法的C-12蛋白芯片联合检测判别函数的建立及临床意义分析

目的 结合C-12蛋白芯片检测结果 ,采用Bayes法建立多肿瘤标志物判别函数,以明确肿瘤类型,提高肿瘤诊断准确率;比较多肿瘤标志物判别函数与C-12多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统的差异及对肿瘤诊断的临床意义.方法 用C-12蛋白芯片法检测2 177例恶性肿瘤患者(肺癌836例,肝癌318例,胰腺癌84例,胃癌123例,肠癌338例,乳腺癌206例,卵巢癌47例,子宫内膜癌28例,食管癌197例)和2 111例正常及患良性疾病的非肿瘤患者的12项常见肿瘤标志物,并结合临床资料进行回顾性研究.应用Bayes法建立肿瘤判别诊断函数,比较12种肿瘤标志物和判别诊断函数对肿瘤诊断的准确率差异.结果 成功建立了多肿瘤标志物的三级诊断判别函数.一级判别函数诊断的特异度为82.11%,灵敏度为71.28%,准确率为83.97%,而C-12蛋白芯片法检测12项肿瘤标志物的特异度为70.11%,灵敏度为66.10%,准确率为68.07%.二级判别甬数能显著提高10种常规肿瘤诊断的灵敏度、特异度和准确率.三级诊断判别函数对确定部分肿瘤的类型有意义.结论 基于Bayes法建立的C-12蛋白芯片联合检测判别甬数具有较高的灵敏度、特异度和准确率,对肿瘤的诊断具有重要临床价值.     

血清超敏C反应蛋白、尿酸及同型半胱氨酸与帕金森 患者疲劳程度和认知功能的关系

目的 分析血清超敏C 反应蛋白（hs-CRP）、尿酸及同型半胱氨酸（Hcy）与帕金森病患者疲 劳程度和认知功能的关系。方法 选取2016 年1 月—2017 年10 月在邯郸市中心医院就诊的帕金森病 患者120 例作为研究组,并选取同期参与体检的健康人50 名作为对照组,比较两组的血清hs-CRP、尿酸 和Hcy值。研究组按认知功能评分分为亚组A［简易智力状态检查量表（MMSE）≤20分］和亚组B（MMSE＞ 20 分）,按疲劳量表-14（FS-14）评分分为亚组C（FS-14 ＞ 8 分）和亚组D（FS-14 ≤ 8 分）。分析研究组患 者的血清hs-CRP、尿酸和Hcy 值与FS-14 和MMSE 评分的相关性。结果 研究组患者的血清hs-CRP、 Hcy 值和FS-14 评分较对照组明显高,血尿酸值和MMSE 评分较对照组明显低,差异均有统计学意义 （P＜ 0.05）;亚组A 患者的血清hs-CRP 和Hcy 值比高于亚组B,血尿酸值、MMSE 评分和FS-14 评分低于 亚组B,差异均有统计学意义（P＜ 0.05）;亚组C 患者的血尿酸值和FS-14 评分低于亚组D,差异均有统 计学意义（P ＜ 0.05）;研究组患者的血清hs-CRP 和Hcy 值与MMSE 评分呈负相关（r=-0.303、-0.327,均 P＜ 0.05）,血尿酸值与MMSE 评分呈正相关（r=0.294,P ＜ 0.05）,血尿酸、hs-CRP 和Hcy 值与FS-14 评分 没有相关性（P ＞ 0.05）。结论 血清hs-CRP、尿酸和同型半胱氨酸水平与帕金森患者的认知功能有关, 与疲劳程度没有明显的相关性。     

高脂饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠海马CA_3区形态学变化及mortalin蛋白表达的影响

目的 观察载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除(knock-out,KO)及高脂饮食后小鼠海马CA_3区形态学及mortalin蛋白表达的变化,以探讨这些因素与记忆损伤及阿尔茨海默病的关系.方法 10只野生型小鼠予普通饲料喂养作为对照(C)组,10只ApoE KO小鼠予普通饲料喂养作为KO组,10只ApoE KO小鼠予高脂饲料喂养作为KO-HF组.小鼠3个月龄成模后,称重;取血检测血脂;取小鼠脑组织分别进行HE染色、尼氏染色、神经原纤维银染、免疫组织化学染色和计算机图像分析.结果 KO组体质鼍、总胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白胆固醇含量与C组相比明显升高,KO-HF组升高更明显;KO组(0.301±0.031)及KO-HF组(0.261±0.020)尼氏体较C组(0.341±0.035)减少(F=18.068,P<0.05);KO组(0.322±0.060)及KO-HF组(0.391±0.041)mortalin表达较C组(0.256±0.061)升高(F=15.230,P<0.05);KO组及KO-HF组未见明显神经原纤维缠结.结论 ApoE KO及高脂饮食可致小鼠海马CA,区锥体细胞内尼氏体减少,mortalin表达升高,该蛋白的异常表达可能与阿尔茨海默病的发病相关.     

转突变型淀粉样蛋白前体双荧光融合基因阿尔茨海默病小鼠模型的建立及初步鉴定

目的 探索建立转突变型淀粉样蛋白前体(APP)双荧光融合基因(CFP-54 bp-YFP-C99)转基因小鼠模型的可行性和基因整合效率.方法 采用显微注射法,将构建的突变型APP双荧光融合基因注入昆明小白鼠的受精卵,获取子代鼠,通过聚合酶链反应(PCR)方法初步鉴定基因的整合情况,以获得阳性鼠.结果 注射昆明小白鼠受精卵共2202枚,移植1806枚.受体鼠56只,怀孕鼠13只,共生产52只子代鼠,其中存活32只.PCR初步检查整合有突变型APP双荧光融合基因的阳性鼠2只,均为活鼠.移植鼠的总怀孕率为23.2%(13/56),突变型APP双荧光融合基因的整合效率为3.9%(2/52).结论 显微注射法建立转突变型APP双荧光融合基因的阿尔茨海默病小鼠模型是可行的,但转基因效率较低.     

蛇毒型神经生长因子通过影响候选可塑性相关基因15和核转录因子κB的表达促进脑缺血再灌注损伤后神经重塑

Objective To investigate the significance and mechanism of intracerebroventricular injection viper venom nerve growth factor (Vngf) in rat neural plasticity after cerebral ischemia reperfusion injury.Methods Ninety Wistar male rats were randomly assigned into Vngf-25 U group (n = 18), Vngf-50 U group (n = 18), Vngf-100 U group (n = 18), ischemia reperfusion group (n = 18) and sham operated group.The expression of candidate plasticity-related gene 15(cpg-15) Mrna and nuclear factor of kappa B ( NF-Κb ) Mrna in rat brain tissues which were collection at 2,7,14 days after surgery were evaluated by the real time PCR.Results The expression of cpg-15 Mrna and NF-Κb Mrna began to increase after surgery( the F value of cpg-15:70.43, 34.11, 31.89, the F value of NF-Κb: 27.47, 34.56, 31.89,P＜0.01).At the same time, expression of cpg-15 Mrna and NF-Κb Mrna in the Vngf groups was significantly different from the I/R group and the sham operated group (the F value of cpg-15:48.18, 55.93, 78.43, the F value of NF-Κb: 45.92, 55.72, 50.49, P ＜0.01).The more Vngf were injected, the more cpg-15 Mrna and NF-Κb Mrna were expressed in Vngf groups.Conclusions The Vngf could accelerate neural plasticity and restore neurofunctional defect through up-regulated the expression of cpg-15 and NF-Κb.