丁型肝炎病毒中国SZ株的cDNA克隆及基因变异分析

以四川地区１例无症状携带丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）患者的外周血为标本，采用逆转录－ＰＣＲ技术，获得了ＨＤＶ全基因组的ｃＤＮＡ克隆（ＨＤＶＳＺ９３株），全长１６８４ｂｐ。与世界其他七个地区株相比，其核酸同源性为８１．８％～９５．４％；丁肝病毒抗原蛋白编码区核酸同源性为８８．９％～９６．１％，氨基酸同源性为８６，４％～９３．０％。另从１例慢性重型肝炎患者血清内克隆了丁肝病毒抗原蛋白（ＨＤＡｇ）编码基因（ＨＤＶ－ＳＺ９２株），与ＳＺ９３株相比，亦存在若干变异。对这些不同地区、不同病情ＨＤＶ株变异的可能意义进行了讨论。     

使用C6／36细胞培养结合RT-PCR方法来提高IgM阳性血清样本中DEN-1病毒的检测效率[英]／DePaula SO，Lima DM，Clotteau M，et al／／Intervirology

巴西圣保罗大学DePaula等用登革热感染恢复期血清样本接种C6／36细胞，比较了逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和间接免疫荧光(IFA)测定1型登革(DEN-1)病毒的效率。     

两种DNA抽提方法的操作过程及影响因素分析

DNA是存在于细胞核和线粒体内，携带遗传信息，决定着细胞和个体遗传型的生物信息大分子。随着现代分子生物学研究的不断深入，聚合酶链反应、基因芯片、DNA分子杂交等分子生物新技术的发展，以DNA为材料的分子生物学实验广泛地应用于移植组织配型、法医学、基因诊断、基因克隆等医学领域。而DNA的提取质量直接影响后继的研究与应用，目前常见的方法有盐析法和吸附柱法。尽管各种商品化DNA抽提试剂盒步骤简单、操作方便，易于推广应用，但抽提过程中技术人员的正确操作、专业知识及实践经验对抽提质量有着至关重要的影响。我们实验室自2002年以来，对14000多名中华骨髓库造血干细胞志愿者捐献的血样进行了DNA水平的HLA分型，     

TLR4 Asp299Gly、Thr399Ile基因多态性对变应性哮喘的发病及IgE水平的影响

目的　探讨TLR4 (toll likereceptor 4 )Asp2 99Gly、Thr399Ile基因多态性对变应性哮喘的发病和血浆IgE水平的影响。方法　利用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析技术 (PCR RFLP) ,对 1 97例变应性哮喘患者和 1 5 6例健康人进行TLR4的Asp2 99Gly、Thr399Ile两位点的基因型检测。同时利用免疫发光法检测血浆IgE的水平。结果　 1 97例变应性哮喘患者TLR4基因Asp2 99Gly位点Asp Asp、Asp Gly和Gly Gly的基因型频率为 0 .81 7、0 .1 4 7和 0 .0 36 ,与正常对照组相比差异无统计学意义 (χ2 =0 .0 32 ,P =0 .984 ) ;但变应性哮喘患者Gly Gly、Asp Gly基因型血浆总IgE对数值 ( x±s:2 .6 1 5± 0 .6 0 0 1 ,n =36 )与Asp Asp基因型血浆总IgE对数值 ( x±s:2 .2 4 0± 0 .6 894 ,n =1 6 1 )相比较高 ,差异有统计学意义 (P =0 .0 0 2 )。TLR4基因Thr399Ile位点Thr Thr、Thr Ile和Ile Ile的基因型频率为 0 .970、0 .0 2 0和 0 .0 1 0 ,与正常对照组相比差异无统计学意义 (χ2 =0 .6 2 0 ,P =0 .733) ;变应性哮喘患者Ile Ile、Thr Ile基因型血浆总IgE对数值 ( x±s:2 .4 1 7± 0 .4 4 2 3,n =6 )与Thr Thr基因型血浆总IgE对数值 ( x±s:2 .30 5± 0 .6 94 9,n =1 91 )相比差异无统计学意义 (P =0 .5 71 )。     

聚合酶链反应和噬菌体裂解试验监测鼠疫菌的应用比较研究

应用聚合酶链反应 (PL-PCR)技术和噬菌体裂解试验同时对 80株鼠疫菌 ,1株假结核株、 1株大肠杆菌埃希氏菌进行检测并作比较。结果显示经噬菌体裂解试验 82株菌均在 18～ 2 0 h显示出噬菌斑 ,而其中 2株聚合酶链反应为阴性 ,另 80株全部为鼠疫菌特异性扩增带 ,比较清晰、典型、稳定 ,它有助于鼠疫菌快速特异诊断     

聚合酶链反应单链构象多态性检测乳腺癌中P53基因突变

应用聚合酶链反应单链构象多态性方法，对２４例原发性乳腺癌肿瘤组织基因组ＤＮＡ进行了分析，结果表明：其中７例存在Ｐ５３基因的突变，突变频率约为３０％。同时对其中１０例进行Ｓｏｕｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，有２例在ｃｈｒ１７Ｐ上存在等位基因的缺失，而其另一等位基因上均存在基因突变。     

真菌病

系统性尖端赛多孢子菌感染小鼠白细胞介素10表达的研究，检测常见酵母菌耐药的纸片法和微量稀释法比较，二步法聚合酶链反应检测血液恶性肿瘤患曲霉菌感染的研究，酶联免疫吸附试验检测侵袭性曲霉病,临床常见皮肤癣菌的分子生物学鉴定,重症监护病房真菌感染的检出率和耐药性趋势……     

HBV前C/C基因与绿色荧光蛋白基因融合表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

目的 :构建含HBV前C C基因与绿色荧光蛋白基因的融合表达载体 ,并在真核细胞中表达。方法 :用PCR法扩增含 1.3倍HBVayw型全基因组真核表达载体pHBV1.3的前C C基因片断 ,应用含绿色荧光蛋白基因的真核表达质粒构建融合表达载体 ,采用脂质体介导方法将其转染到HEK2 93细胞 ,并用荧光显微镜及ELISA法检测融合蛋白的表达。结果 :经PCR及酶切鉴定 ,证实成功构建了含HBV前C C基因的真核表达重组体pEGFP -HB VC ,显微镜下观察及ELISA法证实在HEK2 93细胞中表达了相应融合蛋白。结论 :构建的重组表达载体能在真核细胞中表达目的蛋白与GFP的双功能融合蛋白 ,适合于针对HBV前C C区的相关研究。     

β-catenin基因第3外显子突变及蛋白异常表达与胰腺实性-假乳头状瘤发生的关系

目的研究Wnt信号中β-catenin基因第3外显子突变及蛋白异常表达在胰腺实性-假乳头状瘤（SPTs）发生中的作用。方法①对15例SPTs石蜡包埋组织进行DNA提取，PCR扩增，PCR产物纯化、测序，对β-catenin基因第3外显子进行突变分析。②采用免疫组化PV6000法检测SPTs组织中β-catenin蛋白的表达。结果①β-catenin基因第3外显子在15例SPTs组织中有12例发生了一个碱基的错义突变，突变率为80．0％，表现在密码子32位（5例）、33位（3例）和37位（4例）。②15例SPTs组织中有13例β-catenin蛋白呈细胞核表达，异常表达率为86．7％。结论Wnt信号中β-catenin基因突变及蛋白核内聚集在SPTs发生中起重要作用。