国人常染色体显性先天性白内障家系致病基因的突变分析

目的 分析国人6个常染色体显性先天性白内障(ADCC)家系的基因突变,确定其致病基因及突变形式.设计实验性研究.研究对象6个ADCC家系.方法 应用聚合酶链反应(PCR)和DNA直接测序方法,对家系进行ADCC常见致病基因突变分析.主要指标基因序列.结果 对12个ADCC常见致病基因(CRYAA, CRYAB, CRYBB1, CRYBB2, CRYBA1, CRYGS ,CRYGC, CRYGD, GJA8, GJA3, MIP, BESP2)外显子及外显子内含子连接区进行DNA直接测序,发现7种碱基序列改变,并导致相应编码氨基酸变化,分别是位于CRYBB2基因cDNA序列445位C→T(R145W),452位A→G(0147R),461位C→T(T150M)和388位G→T碱基改变(D126Y);GJA8基因cDNA序列1055位A→G碱基替代(E352G);BFSP2基因cDNA序列1295位C→A(A407D)及MIP基因cDNA序列96位T→A碱基改变(Y23N).其中前3种序列改变已报道为单核苷酸多态性(SNP),经过对相应家系其他成员的分析发现后4种序列改变也为SNP.结论 先天性白内障的临床表型与基因型均有明显的遗传异质性,本试验在12个基因外显子及外显子内含子连接区内未发现导致这6个ADCC家系疾病表型的致病基因突变,但是发现了7种SNP改变,其中4种为本研究首次发现.     

Kennedy病一例及文献复习

Kennedy病又称为X-连锁隐性脊髓延髓型肌萎缩,是迟发的缓慢进展的运动神经元疾病。本病1968年由Kennedy等首先描述,1991年由La Spada等将致病基因定位于X染色体长臂近端Xq11-12区域。本病的致病原因是X染色体上雄激素受体基因第1个外显子的三     

小鼠Pkd2基因条件性敲除打靶载体的构建

[目的]构建小鼠Pkd2条件性基因敲除打靶载体,为建立Pkd2基因条件性敲除小鼠模型奠定基础.[方法]以正常小鼠(129×1/SvJ)基因组DNA为模板,扩增小鼠Pkd2基因一段包括第9号外显子的长为9.3kb的序列,通过引入LoxP和Neo基因等步骤,建立条件性敲除Pkd2第9号外显子的条件性基因打靶载体.[结果]经多个限制性核酸酶酶切鉴定和测序证实,所构建的Pkd2基因条件性敲除打靶载体符合设计要求.[结论]成功构建小鼠条件性Pkd2基因敲除打靶载体,为建立Pkd2基因条件性敲除小鼠模型奠定基础.     

DNA连接酶基因LIG1多态性与肺癌易感性研究

背景与目的: 肺癌是由环境和遗传两大类因素联合作用导致的复杂疾病,其中DNA损伤是肺癌遗传病因中的重要组分.作为参与多条DNA损伤修复通路的关键因子,DNA连接酶与肺癌发生可能存在联系.本文旨在研究DNA连接酶基因LIG1外显子6多态性与肺痛易感性的关系,并探索其与吸烟可能的交互作用.方法: 采用病例-对照研究,收集原发性肺癌患者396例为病例组,同时随机抽取465名当地健康居民作为对照组,进行流行病学调查.运用PCR-RFLP方法分析LIG1基因外显子6的多态性.应用Logistic回归模型分析该位点多态性与肺癌易感性的关系.结果: 突变等位基因C在病例组和对照组中的频率分别为28.41%和26.02%,两组间差异无显著性(P=0.2667).相对于野生型A/A,携带A/C基因型者患肺癌的危险度为1.20(95%CI:0.90～1.62);而患肺腺癌和肺鳞癌的危险度分别达到1.45(95%CI:0.93～2.26)和1.57(95%CI:0.93～2.65).在肺腺癌的发病中,LIGI多态的突变基因型与吸烟之间存在临界显著的负交互作用(OR=0.44,95%CI=0.18～1.06).结论: DNA连接酶基因LIG1外显子6多态性可能与肺腺癌和肺鳞癌的易感性有关.     

核酸序列水平定位DNA损伤的实验研究

目的 研究在核酸序列水平定位DNA损伤的方法.方法 培养TK6细胞,抽提基因组DNA,制备k-ras基因外显子2的单链探针.酶切基因组DNA构建损伤模型,应用依赖随机化末端连接物PCR(RDPCR)进行Southern blot,对产物进行测序.结果 酶切DNA的RDPCR产物在相应位置出现杂交条带,测序证实损伤位于HinfⅠ在k-ras外显子2的酶切位点.结论 将RDPCR和测序技术结合在一起,可在核酸水平上准确定位DNA损伤的碱基位置.     

X-连锁隐性视网膜色素变性的分子遗传学分析

目的探讨1个X-连锁隐性视网膜色素变性(X-linkedrecessiveretinitispigmentosa,XLRRP)家系先证者分子遗传学基础。方法应用聚合酶链反应-直接测序,检测与XLRP相关基因视网膜GTP酶调节因子(retinitispigmentosaGTPaseregulator,RPGR)基因的所有外显子和突变热区15号外显子开放阅读框(exonopenreadingframe15,ORF15)及其与内含子交界处序列。结果检测到2种新的同义突变,c.2166A>G(Glu722)和c.3396C>T(Asp1132),都位于ORF15;以及4种已知多态c.29-15G>A,c.469 63C>T,c.1227 67A>G和c.1675-101A>T。结论尚不能确定此XLRP家系的疾病相关基因。     

PCR-SSCP技术检测中国人肝豆状核变性基因第18、14外显子突变

目的 了解中国人肝豆状核变性（WD）患者基因第18、第14外显子的突变情况，为掌握该痛的突变特点并进行基因诊断提供依据。方法 聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR—SSCP）检测中国人WD基因第18、14外显子突变，并对异常带型进行直接DNA测序。结果 45例患者和20例正常人的18外显子PCR—SSCP出现两种泳动带型，异常带型测序证实无突变存在。14号外显子PCR—SSCP出现的带型均一致，结论 14外显子和18外显子可能不是中国人WD基因突变的热区。     

子宫内膜癌中雌激素受体亚型α第五外显子变异体的表达

目的:探讨雌激素受体亚型α的第5外显子野生型及变异体在内膜癌中的表达以及在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法:选取1999年10月至2003年1月行手术治疗的子宫内膜癌患者41例,以2001年11月至2003年3月接受手术的正常子宫内膜癌患者29例做为对照,进行逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR),半定量研究雌激素受体亚型第5外显子变异体的表达。结果:内膜癌组织中雌激素受体α第5外显子变异体的表达高于正常内膜组织(P<0.05),而二者之间野生型及野生型与变异体的比值差异无显著性(P>0.05)。结论:雌激素受体α第5外显子缺失型变异体可能在内膜癌的发生和发展中起重要作用。     

儿童良性癫痫伴中央颞区棘波ELP4基因改变分析

目的　研究儿童良性癫痫伴中央颞区棘波（BECT）与ELP4基因的关系。方法　采用聚合酶链反应（PCR）对2015年1—12月自黑龙江省佳木斯市中心医院癫痫科就诊的明确诊断为BECT的患儿18例，进行ELP4基因检测，并分析临床特点与基因检测结果。结果　18例明确诊断为BECT的患儿中有15例患儿出现11p13上ELP4基因第1个外显子 -3 del A，比例高达83.3%。结论　11p13上ELP4基因第1个外显子 -3 del A可能与BECT的发生有关。     

中国北方先天性白内障家系中缝隙连接蛋白基因突变的筛查

目的：在一中国人先天性白内障家系中进行缝隙连接蛋白基因（GJA3、GJA8）突变筛查.方法：通过聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）对一先天性白内障家系中的全部患者进行GJA3基因及GJA8基因外显子的扩增,扩增产物进行直接测序.结果：该家系GJA8基因的外显子及其邻近的内含子未发现任何突变.先证者GJA3基因外显子非编码区发现碱基CA的缺失.结论：缝隙连接蛋白基因为该先天性白内障家系的非致病性基因.