叶酸-蒜酶缀合物的合成及联合蒜氨酸原位抑制肿瘤细胞增殖作用

合成叶酸-蒜酶缀合物(FA-Alliinase),采用宫颈癌HeLa细胞考察其对肿瘤细胞的靶向性和抑制肿瘤生长活性。采用两种方法合成叶酸-蒜酶缀合物FA-AlliinaseⅠ和FA-AlliinaseⅡ,测得两种缀合物的偶联比分别为12和31,选择高偶联比的FA-AlliinaseⅡ,对其结构进行初步的表征。高效液相色谱法测得FA-AlliinaseⅡ有约50%的蒜酶活力;激光共聚焦及流式细胞仪观察到FA-AlliinaseⅡ对HeLa细胞具有一定的靶向性,MTT法测得FA-AlliinaseⅡ联合蒜氨酸后对HeLa细胞增殖有抑制作用,以蒜氨酸计IC₅₀为(127.6±2.3)μmol/L。该研究为类前药叶酸-蒜酶缀合物的合成优化提供了较为直接的评价方法。     

Hcy、叶酸水平和凝血功能在预测先兆流产及其妊娠结局的价值分析

目的:探讨Hcy、叶酸水平和凝血功能在预测先兆流产及其妊娠结局的价值。方法:选取先兆流产孕妇74例为研究组;同期正常产检的孕妇60例为对照组。收集两组研究对象的空腹静脉血,酶循环法检测Hcy水平,凝固法检测纤维蛋白原水平,免疫比浊法检测D-二聚体水平,电阻抗法检测血小板含量,全自动化学发光仪检测叶酸水平。对先兆流产孕妇进行随访至妊娠结束,记录其妊娠结局,并进一步分为顺利分娩组(54例)、难免流产组(14例)和过期流产组(6例)。比较各组研究对象的Hcy、叶酸和凝血功能水平。结果:研究组孕妇的叶酸水平明显低于对照组(P<0.05);研究组患者的Hcy、纤维蛋白原、D-二聚体、血小板水平明显高于对照组(P<0.05)。血清Hcy水平与纤维蛋白原、D-二聚体、血小板呈正相关(P<0.05);叶酸水平与纤维蛋白原、D-二聚体、血小板呈负相关(P<0.05);叶酸水平与Hcy呈负相关(P<0.05)。顺利分娩组产妇的叶酸水平明显高于难免流产组和过期流产组(P<0.05);顺利分娩组产妇的纤维蛋白原、D-二聚体、Hcy明显低于难免流产组和过期流产组(P<0.05);过期流产组孕妇的叶酸水平明显低于难免流产组,纤维蛋白原、D-二聚体、Hcy明显高于难免流产组(P<0.05)。结论:先兆流产孕妇的Hcy、叶酸、纤维蛋白原、D-二聚体水平与其妊娠结局密切相关,其机制可能为高Hcy水平,低叶酸水平导致孕妇体内处于高凝状态。     

胆固醇酯转运蛋白TaqIB和亚甲基四氢叶酸还原酶MTHFR C667T基因多态性与视网膜中央静脉阻塞的关系

目的:探讨胆固醇酯转运蛋白(CETP)基因TaqIB和N5 N10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因MTHFR C667T多态性与视网膜中央静脉阻塞的关系。方法:采用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测60例经视网膜荧光造影诊断的视网膜中央静脉阻塞患者和120例对照者的CETP和MTHFR基因多态性。结果:视网膜中央静脉阻塞组B1/B1基因型频率(33.3%)明显高于对照组(12.5%)(P<0.05),B1等位基因频率(51.8%)也明显高于对照组(31.8%)(P<0.05);视网膜中央静脉阻塞组T/T基因频率(30.0%)明显高于对照组(15.0%)(P<0.05),T等位基因频率(50.6%)也明显高于对照组(34.6%)(P<0.05);TaqIB基因的B1等位基因与MTHFR基因的T等位基因之间有协同作用(rs=0.954)。结论:CETP与MTHFR基因和视网膜中央静脉阻塞的发病有关,CETP和MTHFR基因之间有协同作用。     

靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体的制备及其体外抗肿瘤活性

目的 制备具有靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体,并对其进行表征,再进一步考察其体外抗肿瘤活性.方法 合成叶酸-聚乙二醇单硬脂酸酯并用红外光谱和质谱进行表征,采用薄膜分散法制备靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体,用透射电镜、激光粒度仪、高速离心法分别测定脂质体的形状、粒径、电位、包封率,MTT法考察脂质体对肿瘤细胞的抑制作用.结果 经红外光谱及质谱分析证实,成功合成了靶向材料叶酸-聚乙二醇单硬脂酸酯;制备的靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体在透射电镜视野中粒径大小均一,约160 nm,Zeta电位约4.0 mV,包封率达90%以上;体外细胞毒性显示,叶酸修饰的蟾酥提取物长循环脂质体的IC50值为0.46μg/mL,普通长循环脂质体的IC50值为0.76μg/mL.结论 成功合成叶酸-聚乙二醇单硬脂酸酯靶向材料并构建了靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体,可靶向性抑制肿瘤细胞生长.     

MTHFR基因C677T多态性与缺血性脑卒中关系的研究

目的：了解亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T多态性与中国人群缺血性脑卒中发病之间的关系。方法：利用PCR和分子杂交技术对北京地区294例缺血性脑卒中患者及280例无脑血管病对照者进行MTHFR基因C667T多态性检测和分析。结果：C677T多态性位点在两组人群中的分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,但该位点基因型频率及等位基因频率在两组中分布无差异。结论：MTHFR基因C677T多态性不是中国人群缺血性脑卒中发病的遗传学危险因素。     

儿童5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶C677T多态性与神经管畸形易感性关系的研究

目的采用Meta分析的方法,探索5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)和神经管畸形(NTDs)之间的关系。方法在中国知网和Pubmed等国内外数据库中,根据检索标准,收集儿童MTHFR C677T多态性与NTDs相关的文献,应用Stata 11.0软件对各文献进行数据分析。结果共9篇文献符合纳入标准。分析后发现,在TT/CC、CT+TT/CC和TT/CT+TT遗传模式下,OR值分别为1.78(95%CI1.12,2.81)、1.28(95%CI1.07,1.55)和1.73(95%CI 1.07,2.78)。结论 MTHFRC677T多态性与NTDs之间存在显著关联。儿童MTHFR基因C677T多态性是神经管畸形发病的一个危险因素。     

山东省济源市汉族女性MTHFR与MTRR基因多态性分布研究

目的探讨山东省济源市汉族女性MTHFR、MTRR基因多态性的频率特征,为孕妇增补叶酸和神经管畸形一级预防提供依据。方法以济源市564例孕前及孕早期的汉族女性为研究对象,检测MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G的基因分型。统计分析基因多态性的频率特征,并与已报道的其他地区汉族女性的数据进行比较。结果济源市汉族女性的MTHFR C677T基因型和等位基因频率,与烟台、镇江、松滋、德阳、昆明、广州、琼海等地比较差异有统计学意义(P0.05)。MTHFR A1298C基因型和等位基因频率,与镇江、松滋、德阳、昆明、广州、琼海等地比较差异有统计学意义。MTRR A66G等位基因频率,与德阳、广州、琼海等地比较差异有统计学意义。结论济源市汉族女性MTHFR和MTRR基因多态性频率不同于其他地区,具有地域特异性。     

人胎盘叶酸受体蛋白的提取、纯化及鉴定

目的 建立人胎盘叶酸受体蛋白的提取及纯化方法,并对其进行定性定量检测. 方法 采集医院分娩的正常人的胎盘样品.将胎盘剪碎,组织匀浆,酸化及中和,过柱提纯,组分鉴定,除杂并用分子筛进一步纯化.利用Bradford检测蛋白浓度,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染方法进行蛋白分子量检测,用Western Blot对提取蛋白进行定性鉴定. 结果 用于本实验的胎盘湿重370 g.在经过亲和层析柱抽提后的8个留样组分中,组分2～5含有目的蛋白的粗提物.经过分子筛等方法除杂后,Bradford蛋白检测显示本次共提取蛋白总量345 μg.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染方法结果证实此蛋白分子量大约为35 ～40 KDa.Western Blot方法显示此蛋白与叶酸受体抗体特异结合. 结论 使用本研究方法能够从人胎盘中成功提取并纯化人源的叶酸受体蛋白,每100 g胎盘可提取叶酸受体蛋白93 μg.本研究为以后的叶酸受体抗体检测奠定了基础.     

亚甲基四氢叶酸还原酶A1298C多态性与胃癌易感性的关系

[目的]探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与胃癌易感性的关系及与环境因素的交互作用。[方法]收集南京市原发性胃癌患者169例,采用1:1病例-对照研究方法随机选取非消化系统疾病、非肿瘤病人为对照,进行流行病学调查,取外周血,采用限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)分析研究对象MTHFR1298位点的多态性,并分析MTHFR1298基因多态性与烟酒嗜好在胃癌发生中的交互作用。[结果]MTHFR1298C等位基因在病例组与对照组中的频率分别为21.6%和13.0%,差异具有显著性(χ2=8.693,P=0.003,OR=1.841,95%CI=1.223~2.772)。携带MTHFR1298A/C基因型者患胃癌危险性增高(χ2=10.994,P=0.001,OR=2.160,95%CI=1.365~3.419),携带A/C基因型同时又吸烟者患胃癌的危险性是A/A型不吸烟者的3.289倍(χ2=10.002,P=0.002,95%CI=1.573~6.880),携带A/C基因型不饮酒者患胃癌的危险性是携带A/A基因型不饮酒者的2.726倍(χ2=12.459,P<0.001,95%CI=1.562~4.758),同时携带A/C基因型、吸烟、饮酒者患胃癌的危险性是携带A/A基因型、不吸烟、不饮酒者的2.394倍(χ2=3.933,P=0.047,95%CI=1.010~5.672)。[结论]MTHFR1298A/C基因型可增加胃癌易感性,并与吸烟、饮酒间存在交互作用。     

叶酸缺乏对胚胎停育患者绒毛印记基因甲基化的影响

目的 探讨叶酸缺乏对胚胎停育患者绒毛印记基因甲基化的影响.方法 选取2015年4月至2017年4月在陆军总医院263临床部妇科门诊224例胚胎停育患者(研究组)以及同期同比例自愿来陆军总医院263临床部人工流产孕妇(对照组),按照是否叶酸缺乏分为叶酸正常亚组和叶酸缺乏亚组,分析不同组别胰岛素生长因子2、父系表达基因3以及生长因子受体结合蛋白10甲基化状态.结果 对照组叶酸正常亚组IGF2、GRB10的甲基化指数均低于研究组叶酸缺乏亚组、叶酸正常亚组(t值分别为8.21、7.54、6.12、5.29,均P<0.05).对照组与研究组IGF2、GRB10异常甲基化率比较,差异有统计学意义(χ2值分别为6.11、6.34,均P<0.05).研究组组内叶酸缺乏亚组IGF2、GRB10异常甲基化率显著高于叶酸正常亚组(χ2值分别为5.02、5.44,均P<0.05);对照组叶酸正常亚组IGF2、GRB10异常甲基化率均显著低于研究组叶酸缺乏亚组(χ2值分别为6.17、6.43,均P<0.05).结论 叶酸缺乏可能导致IGF2、PEG3基因甲基化程度以及异常甲基化率增高,从而引起胚胎停育.