Notch胞内域1对高糖诱导小鼠肾小球足细胞凋亡的影响

目的通过体外高糖培养小鼠肾小球足细胞,检测Notch胞内域1（NICDl）的表达与肾小球足细胞凋亡的关系并了解其他信号通路是否介导高糖对Notch通路的激活,以探讨治疗糖尿病肾病的潜在方向。方法高糖培养小鼠足细胞,于刺激0、12、24、48、72h后收集细胞,检测NICDl蛋白表达情况。将细胞分为7组：正糖组、高糖组、高糖＋1分泌酶抑制剂（GSI,抑制NICDl活化）组、高糖＋p38细胞分裂素活化蛋白激酶抑制剂组、高糖＋Janus激酶2抑制剂组、高糖＋转化生长因子B,I型受体抑制剂组和高糖＋磷酸肌醇3激酉每／蛋白激酶B抑制剂组。分别采用免疫细胞化学和Westernblotting法检测NICDl的表达,流式细胞术和原位缺口末端标记法（TUNEL）观察足细胞凋亡情况。两组间数据比较采用t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析。结果高糖培养足细胞NICDl蛋白较正糖组（0．079±0．010）增加,12h开始增加（0．443±0．075）,48h达峰（0．746±0．034）,72h略下降（0．658±0．056,F=6．235,P〈0．01）。流式细胞术及TUNEL显示48h时足细胞凋亡率升高,给予GSI后抑制NICDl的活化及足细胞凋亡（P〈0．01）;给予Janus激酶2（0．193±0．096）和转化生长因子B,I型受体抑制剂（0．225±0．067）可抑制高糖对NICDl蛋白的活化（t=6．781、4．287,均P〈0．叭）。结论高糖通过Notch通路诱导足细胞凋亡,高糖对Notch通路的激活可能通过Janus激酶／转录激活因子和转化生长因子β1／Smad通路。     

艾塞那肽对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的保护作用及机制研究

目的探讨艾塞那肽对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的作用及相关机制。方法将足细胞系MPC5细胞按照不同葡萄糖培养浓度和干预因素分为以下5组:正糖对照组(5.5 mmol/L葡萄糖,n=3)、甘露醇高渗对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇,n=3)、高糖组(25.0 mmol/L葡萄糖,n=3)、高糖+艾塞那肽组(25.0 mmol/L葡萄糖+100 nmol/L艾塞那肽,n=3)和高糖+艾塞那肽+LY294002组(25.0 mmol/L葡萄糖+100 nmol/L艾塞那肽+50μmol/L磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂LY294002,n=3)。采用原位缺口末端标记法荧光染色观察细胞凋亡,膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞内裂孔膜肾病蛋白(nephrin)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)以及磷酸化Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动子(p-BAD)水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用最小显著性差异t检验。结果与正糖对照组和甘露醇高渗对照组比较,高糖组足细胞凋亡率显著增加[分别为(28.60±2.65)%、(4.50±0.75)%和(4.55±0.65)%,t=-19.19、-19.15,均P<0.01],细胞内nephrin蛋白表达降低(分别为0.22±0.03、0.72±0.06和0.73±0.08,t=11.43、11.52,均P<0.01),p-AKT和p-BAD蛋白表达下调(分别为0.14±0.03、0.83±0.06和0.86±0.04,0.16±0.03、0.66±0.06和0.68±0.04,均P<0.01)。与高糖组比较,高糖+艾塞那肽组足细胞凋亡率显著下降,细胞内nephrin表达升高,p-AKT和p-BAD蛋白表达上调(均P<0.01)。而高糖+艾塞那肽+LY294002组较高糖+艾塞那肽组足细胞凋亡率增加,细胞内nephrin蛋白表达降低,p-AKT和p-BAD蛋白表达下调(均P<0.05)。结论艾塞那肽通过上调足细胞中nephrin蛋白表达和减少足细胞凋亡从而保护高糖诱导的足细胞,其机制可能与激活AKT/BAD信号途径有关。     

Modulation of glutathione peroxidase activity by age-dependent carbonylation in glomeruli of diabetic mice

Aims

Low levels of reactive oxygen species and resulting oxidative protein modifications may play a beneficial role in cellular function under stress conditions. Here we studied the influence of age-dependent protein carbonylation on expression and activity of the anti-oxidative selenoenzyme glutathione peroxidase (GPx) in insulin-deficient Ins2^Akita mice and type 2 diabetic obese db/db mice in context of diabetic nephropathy.