耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对替加环素不同体外药敏试验方法学评估

目的 比较不同药敏试验方法检测替加环素对耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的敏感性。初步了解辽宁地区CRKP对替加环素的耐药情况，为临床合理用药提供依据。方法 回顾性收集辽宁省内多家大型三甲医院2011年1月-2016年12月分离的CRKP共269株，采用微量肉汤稀释法、KB纸片扩散法、Vitek-2仪器法及E试验法检测替加环素对CRKP的敏感性。结果 微量肉汤稀释法、E试验法、Vitek-2仪器法测定替加环素MIC50和MIC90分别为(0.5/1)、(0.25/0.5)和(0.5/4)μg/mL。按美国食品与药品监督管理局(FDA)和欧洲药敏试验委员会(EUCAST)判读标准，微量肉汤稀释法测得CRKP对替加环素的敏感率为97.4%/93.3%，中介率为2.2%/4.1%，耐药率为0.4%/2.6%。E试验法敏感率最高，为100%/98.9%，Vitek-2法耐药率最高，为8.6%/13.4%，纸片扩散法的中介率最高，为11.9%/46.5%。与微量肉汤稀释法比较，E试验法的基本一致率(EA)和分类一致率(CA)均≥90%，但存在重大误差(VME)，分别为0.4%/1.9%；Vitek-2法EA仅为61.7%，CA为87.4%/72.1%，且大误差(ME)为6.3%/7.4%，无VME；纸片扩散法CA仅为85.9%/46.5%，小误差(mE)为1.9%/2.6%，ME为0.7%/5.6%。结论 辽宁地区绝大多数CRKP对替加环素仍保持较高的敏感性。对于CRKP、E-试验法、Vitek-2仪器法和纸片扩散法均不适合单独检测替加环素敏感性，可考虑联合检测，若结果不一致，均应参考微量肉汤稀释法。     

熄风通脑胶囊微生物限度检查方法的验证

目的:建立熄风通脑胶囊的微生物限度检查方法。方法:按照《中国药典》2010年版的规定,进行该品种微生物限度检查方法的验证。结果:常规方法显示,细菌计数、霉菌及酵母菌计数,试验菌的回收率均达70%以上;控制菌试验组呈阳性,阴性菌对照组呈阴性。结论:细菌、霉菌、酵母菌检查可按常规平皿法;控制菌检查分别按大肠埃希菌和沙门菌常规检查法。处方中某些药味虽然有一定的抗菌作用,但组成制剂后,在验证试验中并不体现出抑菌活性。     

茵栀黄软胶囊微生物限度检查方法学验证

目的：对茵栀黄软胶囊的微生物限度检查方法进行方法学验证。方法：参考《中国药典》2010版一部的方法对茵栀黄软胶囊进行微生物限度检查并对其进行方法学考察。结果：茵栀黄软胶囊对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠茵有一定的抑制作用,可以通过培养基稀释法和薄膜过滤法予以消除。结论：建立了茵栀黄软胶囊的微生物限度检查方法,该法有效可靠。     

空气中流感病毒富集于采样介质中的存活情况与监测应用

目的 建立流感病毒气溶胶富集方法,检测富集病毒气溶胶存活情况并评价空气微生物采样器的采样效率.方法 通过气溶胶发生器模拟空气中流感病毒,使用30μm孔径超细静电纤维膜、0.2μm孔径Teflon静电膜和AGI-30大气采样器分别对流感病毒进行富集监测,运用荧光定量PCR和MDCK细胞培养方法,分析探讨不同采样介质中流感病毒存活情况与采样效率. 结果 在一定的条件下富集空气中的流感病毒,超细静电纤维膜和Teflon膜收集到的病毒存活率低,而使用7％胎牛血清处理过的超细静电纤维膜和Teflon膜采样,则病毒存活率高;使用静电膜富集空气中的流感病毒,疫点和医院发热门诊流感病毒RNA阳性检出率分别为100％和20％,而使用AGI-30采样病毒RNA检测全为阴性. 结论 监测空气中流感病毒的活性是有效预防流感的关键,空气中流感病毒气溶胶的富集,采用较大孔径和小孔径的静电膜都具有较高的富集效能,可应用于空气环境监测.     

胎盘口服液微生物限度检查方法的建立及验证

目的：建立胎盘口服液微生物限度检查方法。方法：按《中国药典））2010年版一部微生物限度检查方法的要求进行验证试验。结果：胎盘口服液微生物限度检查细菌数、霉菌和酵母菌数测定方法取原液采用常规法（1mL／皿）进行验证试验,试验组的菌回收率（％）均不低于70％;控制菌（大肠埃希菌、沙门菌）检查方法用大肠埃希菌取10-1供试液采用常规法（100mL／瓶）,沙门菌取原液采用常规法（200mL／瓶）进行验证试验,试验组、阳性对照组检出大肠埃希菌、沙门菌,阴性对照组无菌生长。结论：胎盘口服液微生物限度检查细菌数、霉菌和酵母菌数测定方法可用常规法（1mL／皿）测定,控制菌（大肠埃希菌、沙门菌）检查方法可用常规法（100mI。／瓶、200mL／瓶）进行检查。     

精神分裂症患者口咽部定植菌谱和耐药性的研究

目的研究住院精神分裂症患者口咽部病原菌的定植和耐药情况.方法对311份住院精神分裂症患者的咽拭子进行细菌培养和药敏试验并对结果进行统计分析.结果共分离出59株病原菌,其中G-菌占55.93%,G＋占44.07%;克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、乙型溶血性链球菌、肠球菌居分离菌前5位,分别占35.6%、27.1%、13.6%、8.5%、5.1%;G＋球菌（除部分肠球菌外）对万古霉素仍保持100%敏感,G-杆菌对亚胺培南、阿米卡星保持较高敏感率外,其他抗生素耐药率均呈上升趋势.结论住院精神分裂症患者口咽部定植菌以肠杆菌科和金黄色葡萄球菌等外源性细菌定植为主且耐药情况严重,临床应根据药敏结果合理选用抗生素以减少或延缓耐药菌的出现.     

微生物次级代谢产物生物合成基因簇与药物创新

微生物产生众多结构和生物活性多样的次级代谢产物，其生物合成基因簇的克隆是药物创新和产量提高的必要前提。迄今为止已有超过150种生物合成基因簇通过各种方式被克隆，并被用于组合生物合成、体外糖类随机化、代谢工程的定向改造。我们研究室已经克隆并测定了氨基糖苷类井冈霉索／有效霉索、多烯类抗生素FR-008／克念菌索、聚醚类南昌霉索、聚酮类梅岭霉索、杂合聚酮一多肽类略唑霉索等生物合成基因簇。深入的基因功能分析揭示了他们独特的生物合成途径和调节机理，为正在进行的组合生物合成结构改造和代谢工程产量提高奠定了基础。     

三种西药制剂微生物限度检查方法适用性试验的研究

目的建立复方氨酚烷胺胶囊、复方盐酸普鲁卡因胶囊和诺氟沙星胶囊三种制剂的微生物限度检查方法。方法按照2015年版《中国药典》四部的规定测定三种制剂对5个试验菌株的回收比值,并进行控制菌检查的方法适用性试验。结果复方氨酚烷胺胶囊与复方盐酸普鲁卡因胶囊均采用稀释法(1∶100)+薄膜过滤法(500mL/膜)进行需氧菌总数的测定,诺氟沙星胶囊采用稀释法(1∶100)+中和剂法+薄膜过滤法(500mL/膜)进行需氧菌总数的测定;三种制剂均采用平皿法(1∶10)进行霉菌和酵母菌总数的测定;复方氨酚烷胺胶囊采用薄膜过滤法(1∶20,冲洗500mL)、复方盐酸普鲁卡因胶囊采用常规法、诺氟沙星胶囊采用中和剂法+薄膜过滤法(1∶20,冲洗800mL)进行控制菌大肠埃希菌的检查。结论上述方法可作为三种制剂的微生物限度检查方法。     

16S rDNA序列分析法在注射剂微生物污染鉴定及溯源分析中的应用

目的 对一次注射剂无菌检查阳性结果进行溯源。方法 采用16S rDNA序列分析法对污染菌A1和污染调查中采集的16株葡萄球菌进行鉴定和同源性分析,并将分析结果用脉冲场凝胶电泳进行验证。结果 A1的鉴定结果为科氏葡萄球菌;科氏葡萄球菌科氏亚种菌株的核糖体16S亚基序列完全相同;结合PFGE分析显示A1来自无菌检查使用的隔离器污染。结论 制药企业可以使用16S rDNA序列分析法进行生产和检验中污染菌的鉴定和溯源,但对于与如科氏葡萄球菌科氏亚种一样核糖体16S亚基序列完全相同的菌株,需要结合其他同源性分析方法进行最终的判定。     

小儿呼吸道感染痰液培养细菌构成及药敏分析

目的 了解某院儿科呼吸道感染的患儿痰液培养细菌构成及药敏的耐药情况.方法 对2011年1月到2012年5月儿科呼吸道感染的1 451例患儿进行深部吸痰并进行细菌培养,对培养出的致病菌株进行药敏实验.结果 从1 451份痰标本中分离出273株致病菌,阳性率为18.8%,其中革兰阳性菌52株（19.0%）,革兰阴性菌198株（72.5%）,其他26株（9.5%）,培养分离的细菌排前列是大肠埃希氏菌58株（21.2%）、流感嗜血杆菌51株（18.7%）、金黄色葡萄球菌42株（15.4%）、肺炎克雷伯氏菌34株（12.5%）、阴沟肠杆菌16株（5.9%）、产酸克雷伯菌14株（5.1%）、铜绿假单胞菌9株（3.3%）、肺炎链球菌7株（2.6%）.体外药敏试验表明阴性杆菌对亚胺培南、阿米卡星,哌拉西林/他唑巴坦较为敏感,阳性球菌对万古霉素、利福平、复方新诺明较为敏感.结论 了解小儿呼吸道感染的细菌分布及细菌的耐药状况,可以指导临床合理运用抗生素,减少细菌耐药菌株的增多.