新生儿隐球菌白化突变化分子机制的初步研究

目的：研究新生儿隐球菌白化突变分子机制,方法：采用聚合酶链反应（PCR）技术对新生隐球菌产黑素株与白化突变株进行比较研究,并进行PCR产物的克隆,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌。结果：发现白化突变株酚氧化酶结构基因（CNLAC1）在1715－2617bp之间大片段缺失（约450bp),而产黑色素株却无此缺失片菌病的预后和基因治疗提供可能的靶基因。     

PCR-SSCP检测胃癌中p53基因突变

目的　研究p5 3基因表达及突变在胃癌发生中的地位。方法　采用链霉菌抗生物素蛋白 -过氧化酶 (S -P)法与聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)分析技术分别检测胃癌p5 3基因表达及突变。结果　p5 3蛋白表达在正常胃粘膜均为阴性 (0 / 2 0 ) ,在不典型增生为 18% (11/ 6 0 ) ,其中轻度全为阴性(0 / 2 0 ) ,中度 2 5 % (5 / 2 0 ) ,重度 30 % (6 / 2 0 ) ,明显低于胃癌的 5 8% (70 / 12 0 ) (P <0 .0 5 ) ,而中度、重度不典型增生高于正常胃粘膜及轻度不典型增生 (P <0 .0 5 )。胃癌中p5 3基因第 5外显子突变率高达 2 5 % (5 / 2 0 ) ,显著高于无突变的正常胃粘膜 0 % (0 / 2 0 ) (P <0 .0 5 )。结论　p5 3基因突变可出现于中度、重度不典型增生 ,是胃癌发生的一个早期事件。在胃癌发生中p5 3基因第 5外显子突变频繁     

HBV 基因T1862突变真核表达载体的构建及在Cos7细胞中的表达

目的研究HBV T1862变异的生物学意义。方法采用分子生物学方法,构建HBV前C/C基因EB病毒真核表达载体,利用体外定点突变技术诱导前C/C基因T1862变异,经PCR-RFLP初筛并经测序终鉴定出阳性克隆后,以脂质体介导方法将突变前后的重组质粒转染Cos7细胞, 以ELISA 检测HBeAg的表达量。结果未突变的重组质粒可稳定表达HBeAg,突变后的重组质粒未能检测到HBeAg表达。结论 HBV前C/C基因1862点突变的真核表达载体的构建,为体外研究该点突变引起HBV的一系列生物学改变奠定基础。     

四川省艾滋病抗病毒治疗6~12个月病毒学失败患者耐药性分析

目的 分析四川省接受艾滋病抗病毒治疗6~12个月病毒学失败患者的耐药影响因素和耐药特征。方法 对2016—2019年接受治疗6~12个月且病毒学失败患者进行HIV-1基因型耐药检测,采用统计学logistic回归和卡方检验分析病毒学失败患者耐药发生的影响因素,以及不同地区和亚型毒株间耐药突变特征。结果 3626例患者符合调查标准,成功获得序列2915例（80.39%）,其中1246（42.74%）例耐药,多因素logistic回归分析发现,注射吸毒者的耐药突变是异性性传播患者的1.90倍;艾滋病的耐药突变是HIV感染者的1.75倍;基线CD4+T淋巴细胞计数≥350个/μl和200~349个/μl的耐药突变是CD4+T淋巴细胞计数＜200个μl的0.76和0.64倍;初始治疗方案含洛匹那韦/利托那韦（LPV/r）的二线治疗方案的耐药突变是是含齐多夫定的0.37倍;感染CRF01_AE亚型毒株的耐药突变是感染CRF07_BC亚型毒株的1.34倍。成都平原、川东北、川西北、川南和攀西地区耐药率分别为45.41%、37.47%、54.84%、43.38和34.34%,卡方检验有统计学意义（P＜0.05）;主要流行亚型CRF07_BC、CRF01_E、CRF08_BC和CRF85_BC耐药率分别为39.60%、48.55%、34.17%和44.27%,卡方检验有统计学意义（P＜0.05）。结论 四川治疗6~12个月艾滋病患者病毒学失败的耐药率较高,耐药突变状况复杂多样,感染途径、基线CD4+T淋巴细胞计数、病程、感染毒株亚型、初始治疗方案是治疗6~12个月病毒学失败患者发生耐药的影响因素,且各地区耐药发生和各亚型耐药突变特征不同。     

细针穿刺检测BRAFV600E突变丰度与甲状腺乳头状癌临床病理特征的相关性

目的：探讨术前细针穿刺基因检测BRAF^V600E突变丰度与甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)临床病理特征的关系。方法：回顾性统计2021年1月30日至2022年2月28日就诊于南京中医药大学附属中西医结合医院的301例患者临床资料,术前细针穿刺基因检测示BRAF^V600E突变(含突变丰度检测),所有患者完成甲状腺癌根治术,术后病理证实为甲状腺乳头状癌,分析BRAF^V600E基因突变丰度与临床病理特征的关系。结果：纳入301例患者,男91例,女210例,年龄42(33～51)岁,范围18～69岁。肿瘤直径>1 cm的患者BRAF^V600E基因突变丰度高于肿瘤直径≤1 cm者[29.05(18.03～37.56) vs.18.35(6.74～29.61),P<0.001],颈部淋巴结转移患者BRAF^V600E基因突变丰度高于无颈部淋巴结转移者[24.72(8.08～34.32) vs.18(8.68～28.54),P=0.040]...     

A novel mis-sense mutation (G1381A) in the G6PD gene identified in a Chinese man

Objective　To detect new mutations among 29 glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficient individuals from Yunnan province. Methods　The nitroblue tetrazolium (NBT) method was used to screen G6PD deficient individuals. Mutation was identified by single strand conformation polymorphism (SSCP), amplification created restriction site (ACRS), amplification refractory mutation system (ARMS) and DNA sequencing. Results　Among 29 cases, 18 cases of G1388A, 1 case of C1004A, and 1 case of G1381A were identified. Nine cases remained to be defined. The G1381A mutation is a novel mis-sense mutation, with a substitution of threonine for alanine (A461T). The resultant G6PD had reduced enzymatic activity. In addition, G1381A caused a restriction site of Stu I to disappear, providing a rapid method for the detection of this mutation. Conclusion　A novel mis-sense mutation G1381A was found. This mutation results in a substitution of threonine for alanine, producing enzyme with reduced activity. The loss of the Stu I restriction site offers a rapid method for the detection of this mutation.     

利用PCR技术构建GM-CSF/Fcγ2-融合蛋白真核表达载体

目的对融合基因GM-CSF/Fcγ2进行定点突变,去除其补体结合位点,构建GM-CSF/Fcγ2-融合蛋白真核表达载体.方法通过设计突变引物,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM-CSF/Fcγ2-.并通过T-A克隆策略,把突变后的融合基因GM-CSF/Fcγ2-重组到真核表达载体pRc/CMV2中,构建真核表达质粒pRc/CMV2/GM-CSF/Fcγ2-并经过酶切和测序确证.结果成功对融合基因GM-CSF/Fcγ2-进行了突变,构建了真核表达载体pRc/CMV.2/GM-CSF/Fcγ2-.结论利用该PCR方法进行基因定点突变可行.     

利用PCR技术构建GM-CSF/Fc_(γ2)~-融合蛋白真核表达载体

目的　对融合基因GM -CSF Fcγ2 进行定点突变 ,去除其补体结合位点 ,构建GM -CSF Fcγ2-融合蛋白真核表达载体。方法　通过设计突变引物 ,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM -CSF Fcγ2-。并通过T -A克隆策略 ,把突变后的融合基因GM -CSF Fcγ2-重组到真核表达载体pRc CMV2中 ,构建真核表达质粒pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-并经过酶切和测序确证。结果　成功对融合基因GM -CSF Fcγ2-进行了突变 ,构建了真核表达载体pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-。结论　利用该PCR方法进行基因定点突变可行     

应用非同位素PCR—SSCP方法检测乳腺癌p53基因点突变

目的 探讨乳腺癌组织中p53基因点突变。方法 应用非同位素PCR－SSCP技术检测48例石蜡包埋乳癌组织中,p53基因点突变。结果 48例乳腺癌中20例出现异常电泳,表明这些病例相应DNA片段中发生了点突变,其中8例位于第5－6外显子,9例位于第7外显子,3例位于第8外显子。免疫组化检测突变p53蛋白的表达25例为阳性（52％）,其中5例SSCP未发现基因突变,突变可能发生在所检测的基因片点以外。结论 非同位素PCR－SSCP是一简便、快速、有效的检测基因点突点的方法,特别适用于大量标本基因点突变的筛选;p53基因点突变与突变型蛋白表达呈相关关系。     

利用PCR技术构建GM—CSF／Feγ2^—融合蛋白真核表达载体

目的 对融合基因GM－CSF／Feγ2^-进行定点突变,去除其补体结合位点,构建GM－CSF／Feγ2^-融合蛋白真核表达载体。方法 通过设计突变引物,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM－CSF／Feγ2^-。并通过T－A克隆策略,把突变后的融合基因GM－CSF／Feγ2^-重组到真核表达载体pRc/CMV2中,构建真核表达质粒pRc/CMV2/GM－CSF／Feγ2^-并经过酶切和测序确证。结果 成功对融合基因GM－CSF／Feγ2^-进行突变,构建了真核表达载体pRc/CMV2/GM－CSF／Feγ2^-。结论 利用该PCR方法进行基因定点突变可行。