基因重组毕赤酵母表达瑞替普酶过程中的酶活性分析

目的 研究毕赤酵母诱导表达瑞替普酶过程中的关键酶活性.方法 以摇瓶培养为研究对象,在用甲醇诱导后,连续取样,破碎菌体制成无细胞悬液,检测乙醇氧化酶、甲醛脱氢酶、PDC、G-6-PD、ID、α-KGD和SD的活性.结果 乙醇氧化酶比活在0～6 h逐渐增加,在第6h达到最大44.5 U/mg蛋白.随后迅速下降.在第24～48 h有所回升,然后又逐渐降低.FAD比活在第0～48h逐渐增加.在第48h达到最大值6.72U/mg蛋白,随后逐渐降低.直至放瓶.G-6-PD比活在第2h～6h逐渐增加,在第6～24h逐渐降低,在第24～48h逐渐升高,48h后又逐渐降低直至放瓶.PDC比活在第0～6h逐渐降低,随后略有升高的趋势.ID、α-KGD、SD的活性变化有相似趋势.在前6 h酶活均迅速下降,在第6～24 h缓慢下降,随后ID活性继续缓慢下降,而α-KGD和SD活性在第2～48 h逐渐升高,在第48 h均达到最高值,然后又逐渐降低,直至放瓶.结论 根据酶活变化规律,可将整个诱导期分为4个阶段:第1阶段为诱导0～6 h,是甲醇适应期;第Ⅱ阶段为诱导6～24h,是快速生长期;第Ⅲ阶段为诱导24～48h,是产物积累期;第Ⅳ阶段为诱导48～72h,是代谢缓慢期.在甲醇适应期,甲醇完全氧化代谢流占主导地位.在快速生长期和产物积累期,代谢流逐渐向糖酵解途径和TCA循环途径迁移.     

不同病期白血病骨髓细胞端粒酶活性的检测

端粒是真核生物染色体末端的一种特殊结构,由一富含鸟嘌呤的重复ＤＮＡ序列及其相关蛋白组成［１,２］。端粒是保护染色体末端稳定必不可少的结构。端粒长度的维持需要端粒酶活性的存在［３］。永生细胞和肿瘤细胞能够长期生存,端粒酶起到了重要的作用。我们用端粒重复扩增银染法检测了原代白血病细胞和白血病细胞系的端粒酶活性,以研究端粒酶活性在急性白血病不同病期和被诱导分化的白血病细胞系中的改变,初步探讨端粒酶活性的调节机制及其在急性白血病中的临床意义。材料和方法１　细胞来源　ＨＬ６０细胞株来自本校预防医学院放射…     

内毒素休克大鼠肝线粒体H+-ATP酶活性变化的研究

目的：研究内毒素休克时线粒体呼吸功能的变化及其与 Ｈ＋ Ａ Ｔ Ｐ酶活性变化的关系。方法：测定内毒素休克大鼠肝线粒体呼吸控制率（ Ｒ Ｃ Ｒ）、磷氧比（ Ｐ／ Ｏ）和 Ｈ＋ Ａ Ｔ Ｐ酶活性的变化;并通过体外孵育实验研究离体情况下不同浓度梯度细菌内毒素（ Ｌ Ｐ Ｓ）对线粒体 Ｒ Ｃ Ｒ、 Ｐ／ Ｏ 和 Ｈ＋ Ａ Ｔ Ｐ酶活性的影响。结果：内毒素休克早期,大鼠肝线粒体 Ｒ Ｃ Ｒ、 Ｐ／ Ｏ 及 Ｈ＋ Ａ Ｔ Ｐ酶活性显著增强,晚期则显著减弱。而 Ｌ Ｐ Ｓ与线粒体共同孵育导致线粒体 Ｒ Ｃ Ｒ、 Ｐ／ Ｏ 和 Ｈ＋ Ａ Ｔ Ｐ酶活性下降。线粒体 Ｈ＋ Ａ Ｔ Ｐ酶活性的变化和 Ｒ Ｃ Ｒ、 Ｐ／ Ｏ 的变化有较好的一致性。结论： Ｈ＋ Ａ Ｔ Ｐ酶活性的变化可能是内毒素休克线粒体功能变化的重要原因之一;提出了内毒素休克时线粒体功能早期增强晚期减弱的观点。     

白血病和骨髓增生异常综合征患者红细胞酶及同工酶谱的改变

目的：调查白血病和骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）患者红细胞酶和同工酶谱改变的患病率，并研究其临床意义。方法：采用ＩＣＳＨ介绍的方法及ＰＡＧＥ电泳测定红细胞酶活性及ＰＫ和ＡＤＡ同工酶，采用ＦＰＬＣ系统纯化ＡＤＡ同工酶，分析酶蛋白的生化性质。结果：患病率：在２２９例白血病和ＭＤＳ患者中，Ｇ６ＰＤ缺乏为４３．１％，ＰＫ缺乏为２７．８％。ＭＤＳ患者中的酶缺乏患病率：ＰＫ缺乏为５０．０％，Ｇ６ＰＤ缺乏为４８．０％，ＰＮＰ缺乏为３９．１％；酶过多患病率：ＡＤＡ过多为６９．６％，ＥＮＯＬ过多为４０．０％，ＡＬＤ过多为３０．４％。慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）的ＰＫ活性增高，而ＰＫ同工酶型均正常。急性白血病患者采用抗肿瘤抗生素后Ｇ６ＰＤ和６ＰＧＤ活性减低（Ｐ＜０．０５）。ＭＤＳ红细胞酶缺陷显著多于ＡＤＡ２同工酶表达见于ＡＭＬ（Ｍ４和Ｍ５）的单个核细胞及慢性粒－单核细胞白血病（ＣＭＭＬ）的红细胞，但ＡＬＬ不表达（Ｐ＜０．００１）。ＡＤＡ同工酶纯化分析示正常结构。结论：红细胞酶的检测可作为ＣＭＬ的预后参数，作为急性白血病抗肿瘤药物耐药预示指标，有助于ＭＤＳ－ＲＡ和再障、ＣＭＬ与ＣＭＭＬ的鉴别诊断。     

端粒酶活性与肿瘤相关性研究

本研究采用TRAP－银染色法和（或）PR－ELISA技术进行端粒酶活性研究。1997－1999年对肝癌、胃癌、急性淋巴细胞白血病、子宫颈癌、鼻窦部浆细胞肉瘤、恶性甲状腺瘤、精原细胞癌、阴茎癌等22种肿瘤共115份肿瘤组织标本检测，端粒酶阳性率为80％（92／115），同时检测这些肿瘤的临近正常组织共96份，端粒酶阳性率为5．2％（5／96）；34份子宫平滑肌瘤和8份非肿瘤病变组织端粒酶阳性率为7．1％（3／42），它们的临近正常组织阳性率为2．4％（1／42）；肿瘤细胞克隆株3例均为阳性。结果表明，恶性肿瘤组织细胞中端粒酶活性明显高于良性肿瘤和正常细胞（P＜0．01）；1999－2000年对胃癌组织进行研究，得出同样结果，因此端粒酶活性的检测有望成为一种新的肿瘤标志物用于临床诊断研究。端粒酶活性的增高与恶性肿瘤高度相关，对试图通过调控端粒酶活性来达到对恶性肿瘤的治疗研究提供了一个新的靶点和可靠依据。     

人类端粒酶逆转录酶基因反义核苷酸对白血病细胞端粒酶活性的影响

为了探讨人类端粒酶逆转录酶（hTERT)基因反义寡核苷酸（ASODN）对原代培养的急性髓性白血病（AML）和慢性髓性白血病（CML）细胞端粒酶活性的影响。采用间接免疫荧光标记方法，通过流式细胞术检测hTERT基因ASODN作用于AML和CML细胞后hTERT蛋白表达含量的变化。采用端粒酶聚合酶链反应-酶子弟免疫测定（PCR-ELISA0法检测白血病细胞端粒酶活性的改变。结果显示：hTERT ASODN作用于AML和CML细胞24，48和72小时后，hTERT蛋白表达水平不断降低；同时，AML和CML细胞端粒酶活性均逐渐受到抑制。结论：hTERT基因ASODN可以通过特异性地抑制AML和CML细胞hTERT蛋白的表达，抑制AML和CML细胞端粒酶的活性。     

短跑训练对人体血乳酸代谢和血清酶活性的影响

目的 为了探讨业余短跑训练对大学生在不同功能状态下血乳酸（LD）代谢和乳酸脱氢酶（LDH）、酸性磷酸酶（ACP）碱性磷酸酶（ALP）、乙酰胆碱脂酶（TCHE）活性的影响。方法 对12名业余短跑男大学生和12名普通大学生进行了不同功能状态下有关指标的测试。结果 安静状态时，短跑组血清LD含量，LDH、ACP、ALP活性低于对照组，TCHE活性高于对照组，但均无明显差异（P＞0．05）；定量负荷运动后，运动组LDH活性明显高于对照组（P＜0．05）；LDH含量、ALP活性低于对照组，ACP、TCHE活性高于对照组（P＞0．05）.力竭性运动后，短跑组LD含量和LDH活性低于对照组，TCHE活性高于对照组，ACP、ALP活性无组间差异（P＞0．05）。结论 业余短跑训练对机体血乳酸代谢和LDH、ACP、TCHE活性有一定影响，但效果不够明显。     

不同治则代表方药对胃癌BGC细胞株细胞凋亡及端粒酶活性的影响

目的:初步探讨不同治则代表方药对人胃癌BGC细胞株细胞凋亡和端粒酶活性的影响。方法:不同治则代表方药含药血清作用于BGC细胞48 h,以流式细胞术检测细胞凋亡率及端粒酶活性。结果:各含药血清作用于BGC细胞48 h后,凋亡率均有不同程度增加、端粒酶活性均有不同程度降低。但凋亡率、端粒酶活性与含药血清浓度不完全成正比。结论:促进BGC细胞凋亡并抑制端粒酶活性,可能是不同治则代表方药抑制BGC细胞增殖的共同作用机制之一。     

新生儿窒息时血清酶水平的临床价值

目的 探讨新生儿窒息时血清酶水平的变化情况.方法 测定新生儿血中AST、CK、CKMB、α-HBDH、LD含量.结果 对照组、轻度窒息组、重度窒息组三组血清心肌酶均值间有显著差别(P＜0.01).结论 随着窒息程度的加重,血清心肌酶值增加明显.临床上可以根据酶变化程度来指导对窒息新生儿的诊断、治疗及判断预后,减少病死率和后遗症.     

精神分裂症患者血清心肌酶活性的改变及其临床意义

目的研究精神分裂症患者心肌酶活性改变的机制,并深入探讨心肌酶与精神分裂症的发病机制及病情的关系。方法对65例首发精神分裂症患者入院及治疗4周后的心肌酶(CK、LDH、AST)进行检测并与对照组进行比较分析。结果研究组血清心肌酶活性明显高于对照组,治疗4周后,研究组心肌酶活性均比较治疗前明显下降,与对照组比较差异显著。结论精神分裂症患者血清心肌酶活性出现异常,并与精神分裂症的发病机制和病情有关。