实时荧光聚合酶链反应定量检测LASIK术后兔角膜纤维连接蛋白1的表达

目的　定量检测纤维连接蛋白 1(fibronectin 1,FN1)在LASIK术后不同时段角膜中的表达水平 ,探讨FN1与LASIK术后早期伤口愈合的关系。方法　 2 0只新西兰白兔 ,左眼按近视 4D行LASIK术 ,右眼作对照组。分别于术后 4、4 8h ,1、2周取角膜 ,荧光半定量PCR方法检测中央手术区及周边非手术区角膜FN1mRNA的表达。结果　LASIK术后 4h左眼手术区FN1的mRNA表达水平比右眼相应对照区明显升高 ,4 8h降低至对照组水平 ,其后随时间的延长无明显改变。结论　实时荧光定量PCR定量检测FN1在角膜中的表达结果提示 ,FN1参与LASIK术后角膜瓣与基质床的粘附过程     

乙型流行性感冒病毒的基因快速检测

〔目的〕建立乙型流行性感冒病毒的核酸快速诊断技术。〔方法〕采用RT -PCR方法对乙型流感病毒的HA基因进行检测 ,我们对乙型流感病毒的HA基因保守区域设计相关引物 ,进行扩增 ,并作了特异性与灵敏度比较。〔结果〕该引物只能扩增乙型流感病毒的特异性片段 ,而对其它型别的流感病毒以及麻疹、风疹、腮腺炎病毒无交叉反应。检测的灵敏度一次PCR可达 1TCID50 ,二次PCR反应可达 0 .1TCID50 。〔结论〕采用该方法从临床患者含漱液标本中的检出率 ,比采用MDCK细胞分离的阳性率更高 ,可达到迅速、正确地诊断乙型流感的实用目的。     

POLO-LIKE KINASE1 GENE EXPRESSION AND ITS CLINICOPATHOLOGICAL SIGNIFICANCE IN GASTRIC CARCINOMA

Objective To clarify the polo-like kinasel （PLK1） expression in human gastric cancer tissue and its clinicopathological significance in gastric carcinoma. Methods PLK1 expression in 60 cancer tissues and their corresponding noncancerous tissues from gastric cancer patients was measured by both real-time quantitative RT-PCR and western blot assay, lmmunohistochemistry was used to detect PLK1 protein expression in eighty-nine paraffin-embedded samples. Results The PLK1 mRNA and protein expression level in the 60 fresh cancer tissues was significantly higher than that in noncancerous tissues （ P 〈 0. 0001, P = 0. 031 respectively）. In paraffin-embedded samples, apart from its increased expression level, PLK1 was found to be in both cytoplasm and nucleus, double-site location only occurred in poor-differentiated cancer, PLKI expression intensity was associated with tumor dif- ferentiation （ P = 0. 03）, invasion （ P = 0. 032 ）, TNM stage （ P = 0. 019） , ki67 expression （ P = 0. 011 ）. The patients with negative PLK1 expression had better survival rate than that with positive PLK1 expression （ P =0. 0292 ）. Conclusion PLK1 may have clinicopathological value in tumor diagnosis, and may become another new biomarker and therapeutic target for gastric cancer.     

溴氰菊酯对大鼠脑组织某些抗氧化酶、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和NF-E2相关因子2基因表达的影响

目的 研究溴氰菊酯（DM）对大鼠大脑皮层和海马组织铜锌超氧化物歧化酶（CuZn-SOD）、谷胱苷肽还原酶（GR）、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）轻亚单位（GCSl）重亚单位（GCSh）基因和红系核因子2（NF-E2）相关因子2（Nrf2）基因表达的影响.方法 将18只大鼠随机分为3组,每组6只,对照组腹腔注射橄榄油,低剂量DM染毒组（3.125 mg/kg体重）和高剂量DM染毒组（12.500mg/kg体重）大鼠染毒5 d.分别用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定CuZn-SOD、GR、GCSl、GCSh和Nrf2基因mRNA表达的相对量.12只大鼠随机分为3组,用免疫组织化学方法检测海马和大脑皮层中γ-GCS重亚单位蛋白（GCS-HS）和Nrf2蛋白水平.结果 DM染毒大鼠大脑皮层和海马组织中的CuZn-SOD、GR、GCSh和Nrf2基因mRNA水平均未见明显改变;12.500mg/kg组大脑皮层、3.125 mg/kg组大脑皮层和海马组织中的GCSl基因mRNA水平低于对照组中各相应组织的水平,分别降低至对照组mRNA水平的71.1%、63.6%和75.2%,差异均有统计学意义（P＜0.01）;DM染毒的大鼠海马CA1、CA2、CA3、齿状回和大脑皮层中的GCS-HS和Nrf2蛋白水平均未见明显改变.结论 DM对GR及CuZn-SOD基因mRNA表达未见影响;DM抑制大鼠海马和脑皮层中GCSl基因mRNA表达,而未见影响GCSh基因mRNA的表达;本实验条件下DM对大脑皮层和海马组织中的Nrf2表达无明显影响.     

嗜铬颗粒蛋白B-GST融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建小鼠嗜铬颗粒蛋白B(chromogranin B,CgB)重组原核表达载体。方法先用RT-PCR方法从小鼠脑基因组中扩增出CgB基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pMD-T vector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1中进行表达。结果表达产物经Western Blot分析,在140处有一明显特异带,与预期结果相符。结论构建重组融合表达载体pGEX-CgB,在原核细胞中成功表达出小鼠CgB-GST融合蛋白。     

人T-bet基因的克隆及序列分析

目的：克隆人T-bet基因全长编码区的cDNA，并进行豁定和测序分析，为从转录水平研究Th1／Th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法：采用RT-PCR方法，从人外周血淋巴细胞获得T-bet基因的cDNA；连接至pGEM-Teasy载体，导入大肠杆菌DH5α并选择阳性克隆；应用M13F／R通用引物进行双向反应测序，以作序列鉴定。结果：扩增得到的T-bet基因cDNA全长1670 bp，包括编码区1607 bp，编码530个氨摹酸残基，与Genbank中发表的序列完全一致。结论：获得了人T-bet基网的克隆，为进一步研究其生物学功能构建了基础平台，为寻找多种免疫性疾病的有效治疗提供新思路。     

补锌糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢相关基因表达

目的探讨补锌对糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢相关基因蛋白磷酸酶2A(PP2A)和磷脂酶D(PLD)表达的调控。方法对补锌糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序及同源性分析;设计基因序列引物,RT-PCR检测观察各组大鼠肝脏中基因表达的变化。结果结果显示,片段Zn-4、Zn-8的碱基序列分别与PLD、PP2A同源性为100%,99%。糖尿病对照组PP2A mRNA表达量(0.5072±0.0574)低于正常对照组(1.3303±0.1855),P<0.05;糖尿病补锌组PP2A mRNA的表达量(0.7005±0.1563)与糖尿病对照组比较有所恢复(P<0.05)。糖尿病对照组PLD mRNA表达量(1.0754±0.0312)和糖尿病补锌组PLD mRNA的表达量(1.0130±0.0992)均高于正常对照组(0.7995±0.1040),P<0.05;糖尿病补锌组PLD mRNA的表达量与糖尿病对照组比较无变化(P>0.05)。结论补锌对糖尿病大鼠肝脏PP2A mRNA表达有上调作用,这可能是锌改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。     

The expression of TRPA1 mRNA in the rat brain

Objective： To investigate the distribution of TRPA1 （one kind of the TRP-like ion channel family） channel in the hippocampus and cerebral cortex of rat. Methods： RT-PCR was used to amplify the fragment of TRPA1 in the DRG （dorsal root ganglion）, hippocampus and cerebral cortex of adult SD rat. In situ hybridization staining was used to show the distribution of TRPA1 mRNA in the hippocampus and cerebral cortex of adult rat brain. Results： Both RT-PCR and in situ hybridization staining showed that TRPA1 mRNA was expressed in hippocampus and cerebral cortex of the adult rat brain. Conclusion： Our results suggest that there is expression of TRPA1 mRNA both in the hippocampus and cerebral cortex of the adult rat brain.     

绒毛及合体滋养层细胞吲哚胺2,3-二氧化酶表达与流产的关系

目的:探讨人早孕绒毛组织吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)的表达与流产的关系。方法:RT-PCR测正常妊娠和难免流产绒毛组织及JAR细胞株IDOmRNA表达;免疫组化分析两组绒毛组织IDO蛋白质表达;Westernblot检测体外培养的合体滋养层细胞IDO蛋白质表达;高效液相色谱法检测细胞培养上清液中有无犬尿氨酸。结果:难免流产组绒毛组织IDOmRNA及蛋白质表达均低于正常组;JAR细胞株不表达IDOmRNA;合体滋养层细胞表达IDO蛋白质;合体滋养层细胞培养上清中有犬尿氨酸。结论:绒毛组织IDO正常表达是维持妊娠所必需;体外培养的人早孕绒毛合体滋养层细胞表达的IDO具有活性。