R1315C de novo突变导致一例2M型血管性血友病

目的对一例可疑血管性血友病患者进行鉴定和研究，以阐明其发病分子机制。方法采用vWF：Ag、vWF：CB、vWF：RCo和多聚体分析等实验对患者进行表型鉴定。PCR扩增患者vWF基因外显子28，并进行测序。结果患者vWF：Ag、vwF：CB、vWF：RCo均降低，vWF：AS／vWF：CB〉2，多聚体分析显示存在大分子量段。患者vWF基因外显子28存在一杂合性de novo 4253C〉T（R1315C）突变。结论我们首次在华人中鉴定到一例遗传性2M型vWD患者。R1315C de novo突变是该患者发病的分子机制。     

P-gp基因突变与乳腺癌多药耐药分子机制的研究

目的 探讨P-糖蛋白（P-gp）基因突变与乳腺癌多药耐药的关系。方法 本组自2004年3月至2006年4月采用MTT法检测52例乳腺癌标本对四种化疗药物的敏感性,PCR扩增P-gp基因中最常发生突变的250个碱基进行单链构象多态性（SSCP）分析,将其核苷酸序列与野生型P-gp基因进行比较。结果 52例乳腺癌组织中8例对四种抗癌药物均敏感,无P-gp基因突变;19例对一种抗癌药物耐受,其中仅一例P-gp基因发生点突变;16例对两种抗癌药物耐受,其中两例发生P-gp基因点突变;7例和2例分别对三种抗癌药物耐受和四种抗癌药物耐受,它们的P-gp基因都发生了点突变。P-gp基因突变位点分别为891gly位（GGC→GAC）asp和1145位his（CAC→TAC）tyr。结论 P-gp基因突变介导乳腺癌多药耐药,P-gp基因产物891位gly（GGC→GAC）asp和1145位his（CAC→TAC）tyr的突变与乳腺癌多药耐药密切相关。     

p53基因甲基化和突变与燃煤污染型砷中毒关系研究

目的 探讨燃煤砷污染对人体p53基因甲基化(启动子区及第5外显子)和突变(第5外显子)的影响,分析其与燃煤型砷中毒的关系.方法 在贵州省兴仁县燃煤型砷中毒病区选择112例砷中毒患者,根据病情将其分为轻度中毒组(38例)、中度中毒组(43例)和重度中毒组(31例);根据有皮肤病理学诊断患者(43例)的病理结果,将其分为非癌变组(24例)和癌变组(19例).选择条件相似的非砷暴露村90名居民作为对照组.在知情同意原则下,采集上述观察对象的外周血,应用限制性内切酶-PCR法检测p53基因启动子区及第5外显子甲基化情况,应用PCR-单链构象多态性技术及PCR产物克隆测序技术检测p53基因第5外显子突变情况.结果 p53基因启动子区甲基化阳性率在轻、中、重度组分别为13.16%(5/38)、27.91%(12/43)、45.16%(14/31),与对照组[1.11%(1/90)]比较差异均有统计学意义(χ2值分别为8.679、23.690、41.199,P值均＜0.017);在非癌变组和癌变组分别为25.00%(6/24)和63.16%(12/19),与对照组[1.11%(1/90)]比较差异均有统计学意义(χ2值分别为18.762、57.497,P值均＜0.025).p53基因第5外显子甲基化阳性率在轻、中、重度组分别为55.26%(21/38)、51.16%(22/43)、48.39%(15/31),与对照组[88.88%(80/90)]比较差异有统计学意义(χ2值分别为18.151、23.168、22.420,P值均＜0.017);在非癌变组和癌变组分别为54.17%(13/24)和42.11%(8/19),与对照组[88.88%(80/90)]比较差异有统计学意义(χ2值分别为15.201、22.075,P值均＜0.025).p53基因第5外显子突变率在轻、中、重度组分别为5.26%(2/38)、16.28%(7/43)、25.81%(8/31),中、重度组与对照组(0.00%)比较差异均有统计学意义(χ2值分别为15.465、24.870,P值均＜0.017);在非癌变组和癌变组分别为16.67%(4/24)、31.58%(6/19),与对照组(0.00%)比较差异均有统计学意义(χ2值分别为15.545、30.077,P值均＜0.025).启动子区高甲基化与第5外显子突变相关(列联系数为0.294,P＜0.05);第5外显子低甲基化与第5外显子突变相关(列联系数为0.410,P＜0.05).结论 燃煤砷污染可致人体p53基因启动子区高甲基化、第5外显子低甲基化和突变,上述甲基化改变均与p53基因突变相关联;p53基因甲基化改变可能是砷致p53基因突变以及砷致病或致癌的重要原因之一.

Abstract：

Objective To explore the influence of arsenic pollution caused by coal-burning on methylation(promoter and exon 5 ) and mutation (exon 5 ) of human p53 gene, and to analyze the relationship between methylation, mutation and arsenism. Methods According to the diagnostic criteria of endemic arsenism, 112 patients with arsenism (including 38 mild cases,43 moderate cases and 31 severe cases) were selected in the areas with endemic arsenism from Xingren, Guizhou province. Among the subjects ,43 cases were diagnosed by dermatopathological methods, and they were divided into non-cancerous group (24 cases) and cancerous group ( 19 cases ). 90 controls were selected from the non-arsenic polluted areas. Under the principle of informed consent, blood samples were collected from individuals. The methylation of p53 gene in promoter region and exon 5 were detected by extinction enzyme-PCR,the mutation of p53 gene (exon 5 ) was detected by PCR-SSCP,PCR products cloning and sequencing technology. Results The positive rates of methylation of p53 gene in promoter region were 13. 16% ( 5/38 ), 27.91% ( 12/43 )and 45. 16% (14/31) respectively among mild, moderate and severe arsenism group, which were obviously higher than the rates in the control group (1.11% (1/90), χ2 values were 8.679,23.690, 41. 199,respectively,both P values ＜ 0. 017 ). The positive rates of methylation of p53 gene were 25.00% (6/24)and 63. 16% (12/19)in non-cancerous and cancerous group respectively, which were obviously higher than those in the control group ( 1. 11% (1/90) ,χ2 values were 18. 762,57. 497,respectively,both P values ＜0. 025 ). The positive rates of methylation of p53 gene ( exon 5 ) were 55.26% ( 21/38 ), 51. 16% ( 22/43 )and 48. 39% (15/31)respectively among mild, moderate and severe arsenism group,which were obviously lower than the rates in the control group ( 88. 88% ( 80/90 ), χ2 values were 18. 151 , 23. 168,22. 420,respectively, both P values ＜ 0. 017 ). The positive rates of methylation of p53 gene (exon 5 ) were 54. 17%(13/24) and 42. 11% (8/19) in non-cancerous and cancerous group respectively, which were obviously lower than those in the control group ( 88. 88% (80/90), χ2 values were 15. 201,22. 075, respectively, both P values ＜ 0. 025 ). The mutation rates of p53 gene ( exon 5 ) were respectively 5. 26% ( 2/38 ), 16. 28%(7/43) and 25.81% (8/31 )among mild, moderate and severe arsenism group; while the results in moderate and severe arsenism group were obviously higher than in the control group (0. 00% ,χ2 values were 15.465,24. 870,respectively,both P values ＜ 0. 017). The positive rate of mutation of p53 gene ( exon 5 ) were respectively 16. 67% (4/24) and 31.58% ( 6/19 ) in non-cancerous and cancerous group, which were obviously higher than it in the control group (0. 00%, χ2 values were 15. 545,30. 077, both P values ＜0. 025). The hypermethylation of p53 gene in promoter region was related with the mutation of p53 gene ( exon 5) ( coefficient of association was 0. 294, P value ＜ 0. 05 ); and the hypomethylation of p53 gene (exon 5 ) was related with the its mutation ( coefficient of association was 0. 410, P value ＜ 0. 05 ).Conclusion Arsenic pollution caused by coal-burning can cause the hypermethylation of p53 gene in promoter region, hypomethylation and mutation of p53 gene ( exon 5 ), and the changes of methylation of p53 gene are related with its mutation and might be one of the important etiological factors of arsenic pathogenicity or carcinogenesis.     

脊髓小脑性共济失调3型、7型患者三家系的临床表现和基因突变

目的 探讨脊髓小脑性共济失调3型、7型的基因突变特点及临床表现.方法 总结3个家系中13例患者的临床表现,对13例患者、4例＂健康＂成员和4例普通成员,采用PCR法、琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物、基因测序等技术分析SCA3、7型基因内CAG三核苷酸重复序列的长度和扩增数.结果 1个家系中4例患者存在SCA3/MJD（CAG）n扩增突变,CAG重复数为65～74次;2个家系中9例患者存在SCA7（CAG）n扩增突变,CAG重复数为40～52次.两亚型在神经系统受累部位等方面存在差异.结论 SCA3/MJD和SCA7型患者临床表现存在一定的差异,有利于鉴别及分型,但是基因检测是SCA患者确诊的唯一有效的诊断方法.     

高分辨率熔解曲线分析在耐药菌检测中的应用研究

目的 高分辨率熔解（HighResolutionMelting,HRM）曲线分析是近几年来在国际上刚兴起的单核苷酸多态性及突变研究工具。这种检测方法因其高通量、低成本、结果准确、不受检测位点的局限,并且实现了真正的闭管操作而受到普遍的关注。现对HRM技术的原理和在耐药菌检测中的应用进展作一综述。     

中国人Wolfram综合征WFS1基因的新突变

目的研究一个中国人Wolfram综合征患者家系中的WFS1基因突变情况。方法应用PCR-DNA直接测序对一个Wolfram综合征患者及家系成员的WFS1基因8个外显子及其侧翼内含子进行突变筛查;采用生物信息学方法对突变蛋白的结构与功能进行估测。结果发现外显子8第417位密码子发生缺失突变,即F417del。先证者为突变纯合子,其父母为姑表亲近亲结婚,均为突变杂合子。F417del突变位于跨膜区,失去了一个非极性氨基酸。生物信息学分析提示该突变可引起跨膜区二级结构改变并使突变蛋白疏水性下降。结论本研究发现的F417del突变是一个尚未报道过的Wolfram综合征新突变。     

h-Spry2基因在部分人类肿瘤中的表达和突变研究

目的 探讨h-Spry2基因在136例肿瘤发生中的作用。方法 分别采用逆转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）、聚合酶链式反应（PCR）、单链构象多态性分析（SSCP）和DNA测序技术检测h-Spry2基因在部分人类肿瘤及肿瘤细胞系中的表达、缺失和突变。结果 h-Spry2基因在71例癌肿瘤及瘤旁正常组织中均有表达，表达差异无显著性无定量分析，故无统计学处理。该基因在65例骨及软组织肿瘤中无纯合性缺失。在MKN45细胞系cDNA中存在15处同义突变；在DLD－1细胞系cDNA和基因组DNA中存在1处相同的同义突变。h-Spry2基因与果蝇Sprouty同源序列的扩增片段等长于用相同引物扩增的cDNA片段长度。结论 h-Spry2基因在上述肿瘤的发生中不起作用；h-Spry2基因与果蝇Sprouty同源序列中不含有内含子。     

散发性肾透明细胞癌组织中希佩尔-林道基因突变与缺氧诱导因子1α、2α的测定

目的探讨散发性肾透明细胞癌(CCRCC)组织中希佩尔-林道(VHL)基因突变、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和HIF-2α的表达及其关系,对肿瘤分期、分级的影响.方法应用聚合酶链反应(PCR)、PCR产物直接测序和免疫组化等方法,分析77例散发性CCRCC患者癌组织中VHL基因突变、HIF-1α和HIF-2α的表达.其中T1期 55例(71%),T2期7例(9%),T3期14例(18%),T4期1例(1%);病理分级,G115例(19%),G256例(73%),G36例(8%).结果在正常肾组织中无VHL基因突变.散发性CCRCC中VHL基因突变率为52%(40/77),HIF-2α阳性率81% (62/77),高于HIF-1α阳性率66%(51/77)(χ2 =23.310, P<0.01);VHL基因突变者中HIF-1α和HIF-2α的阳性率(98%和93%)均高于无突变者的阳性率(32% 和68%,χ2值分别为36.386,7.617,P均<0.01);HIF-1α和HIF-2α的表达均与VHL基因突变相关(偏回归系数分别为4.481,2.027,P均<0.01);未发现VHL基因突变、HIF-1α和HIF-2α表达与肿瘤病理分级、分期有关(P均>0.05).结论在散发性CCRCC患者中VHL基因突变较广泛,在突变组织中HIF-1α和2α高表达,但VHL基因突变、HIF-1α和2α的表达与患者病理分级、分期不相关.     

腰椎关节突关节炎的研究进展

腰椎关节突关节炎（lumbar facet arthritis,LFA）是一种腰椎常见的退行性疾病,近年发病率呈上升趋势,症状严重时影响着患者的工作与生活质量。据最新报道,大约有15%~45%腰痛是属于关节突关节源性的[1]。1911年,Goldthwait最先认为部分腰痛可能由关节突关节病变引起。Ghormley则将源于关节突关节的腰腿痛命名为“小关节综合征”[2]。Badglay从病理方面证实关节突关节存在骨性关节炎,其病理特征是软骨下骨和关节边缘反应性增生,关节突关节软骨退变[3]。此后,大量学者从流行病学、解剖学和生物力学等方面,对腰椎关节突关节（lumbar facet joint,LFJ）骨性关节炎进行了深入研究[4~6]。现对LFA的研究进展综述如下。     

伊马替尼在进展期胃肠间质瘤的应用分析

目的探讨伊马替尼治疗进展期胃肠间质瘤（GIST）患者的临床疗效及其影响因素。方法回顾性分析2004年4月至2010年1月间在中山大学附属第一医院接受伊马替尼治疗的73例成人进展期GIST患者的临床资料。分析其治疗效果和影响疗效的因素。结果73例GIST患者接受伊马替尼治疗后完全缓解1例,部分缓解53例,疾病稳定14例,疾病进展5例。全组均获随访,随访时间12～76（中位随访32）个月,中位无进展生存期45．0个月（95％CI：34．2～55．8个月）,1、3、5年无进展生存率（PFS）分别为87．7％、63．6％和39．6％。多因素分析显示,基因突变情况和治疗前体力状态评分是伊马替尼治疗疗效的独立影响因素：c-kit外显子11突变患者PFS优于外显子9突变者;治疗前体力状态低评分者优于高评分者（均P〈0．01）。结论伊马替尼治疗进展期GIST疗效肯定,c-kit外显子9突变和体力状态不良的患者接受伊马替尼治疗效果不佳。