HPLC同时测定麦冬中3种高异黄酮含量

采用反相高效液相色谱法同时测定麦冬中6-甲酰基沿阶草酮甲、甲基沿阶草酮甲和沿阶草酮甲的含量,选用乙腈-0.5％磷酸溶液(58:42)作为流动相,检测波长为296nm(0～14min),275nm(14～22min).6-甲酰基沿阶草酮甲、甲基沿阶草酮甲和沿阶草酮甲检测的线性范围分别为0.165～0.990(r=0.9999),0.153～0.918(r=0.9999),0.270～1.620μg(r=0.9999),平均加样同收率分别为99.76％(RSD0.95％),99.86％(RSD0.82％),99.41％(RSD1.1％).研究所建立的反相高效液相色谱法法简便快速、准确度高,可用于麦冬药材的质量控制.     

红花组分HSYA对人胃腺癌BGC-823移植瘤裸鼠VEGF蛋白、KDR与缺氧诱导因子表达的影响

目的:研究红花组分羟基红花黄色素A(HSYA)对人胃腺癌皮下移植瘤裸鼠血管内皮生长因子(VEGF)蛋白、含激酶插入区受体(KDR)和缺氧诱导因子(HIF-1α)mRNA与蛋白表达的影响。方法:采用BALB/C nu/nu裸小鼠接种人胃腺癌细胞株BGC-823于右前肢腋部皮下建立裸鼠人癌移植瘤模型,随机分为模型组、对照组、HSYA高、低剂量组(0.056g/L、0.028g/L),观察抑瘤作用,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测瘤组织VEGF与HIF-1α蛋白以及血清VEGF蛋白表达;蛋白印迹(Western blotting)法测定瘤组织KDR磷酸化蛋白的表达;实时荧光定量PCR(RTFQ-PCR)法检测瘤组织KDR及HIF-1αmRNA表达。结果:HSYA低剂量组抑瘤明显,该组瘤组织及血清VEGF蛋白表达降低,瘤组织KDR磷酸化蛋白表达减弱,与模型组比较差异明显(P0.05,P0.01);HIF-1α蛋白表达较模型组瘤组织明显减少(P0.01)。KDR mRNA表达与模型组相比减弱,差异有统计学意义(P0.05)。结论:一定浓度的HSYA抑制肿瘤生长的可能机制与抑制VEGF、HIF-1α蛋白的表达,减弱KDR蛋白磷酸化及其基因表达,从而抑制内皮细胞活化阻碍肿瘤血管新生以及降低肿瘤缺氧微环境对血管生成的诱导有关。     

不同加工方法和成熟阶段对五味子主要化学成分的影响

目的:研究辽宁新宾地区不同加工方法和成熟阶段对五味子质量的影响.方法:采用高效液相色谱法分别测定五味子药材中五味子醇甲和5-羟甲基糠醛的含量,采用电位滴定法测定总有机酸的含量,采用高碘酸钠氧化还原滴定法测定总糖的含量,采用水蒸气蒸馏法测定挥发油的含量.结果:晒干和50℃烘干的样品中五味子醇甲含量较高;随着干燥温度的升高,5-羟甲基糠醛含量明显增加,而挥发油含量逐渐降低;有机酸和总糖含量变化不明显.不同成熟阶段的五味子,果实越成熟,五味子醇甲和挥发油含量越低,5-羟甲基糠醛、有机酸和总糖含量则越高.结论:不同加工方法和成熟阶段对五味子质量有明显影响.     

何首乌中THSG和蒽醌类成分对人孕烷X受体介导的CYP3A4的调控作用

该文探讨何首乌主要化学成分2,3,5,4'-四羟基芪-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene-2-O-β-Dglucopyranoside,THSG)、蒽醌类(大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚)对人孕烷X受体(human pregnant X receptor,PXR)介导的CYP3 A4的转录调控作用。利用前期建立的PXR介导的CYP3 A4药物诱导快速筛选技术,采用MTS细胞检测方法考察何首乌中主要化学成分对细胞活性的影响,计算IC50;利用双荧光素酶报告基因系统,将PXR表达载体和含CYP3 A4转录调控区的报告基因载体共转染Hep G2细胞,10μmol·L~(-1)利福平(RIF)为阳性对照,10μmol·L–1酮康唑(TKZ)为阴性对照,用THSG(2.5,5,10μmol·L~(-1))和蒽醌类成分(2.5,5,10μmol·L~(-1))分别处理24 h,进行双荧光素酶活性检测。结果表明,空载质粒pc DNA3.1与p GL4.17-CYP3A4共转染时,THSG、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄素对CYP3A4的调控多为抑制效应,大黄素对CYP3A4产生诱导作用;pc DNA3.14-PXR与p GL4.17-CYP3A4共转染时,THSG、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄素均产生诱导效应。综上,THSG和蒽醌类成分均可对CYP3A4产生抑制或激活效应,PXR参与后,上述成分对CYP3A4均产生诱导效应,提示何首乌中主要成分对CYP3A4的诱导作用是通过PXR实现的。以上结果提示在与何首乌联合用药时应注意潜在的药物相互作用,提高中药的安全性和有效性。     

升板方对SD大鼠CYP3A1酶活性的影响

目的:研究升板方对于SD大鼠肝微粒体CYP3A1酶活性的影响,为临床化疗联合用药方案提供参考。方法:将25只SD雄性大鼠随机分为升板方高(8.645 g/kg)、中(4.322 g/kg)、低(2.161 g/kg)地塞米松诱导组(灌胃100 mg/kg,1次/d,连续3 d),及空白对照组(灌胃给予生理盐水,10 mL/kg,2次/d,连续14 d)。升板方各剂量组均灌胃给药,2次/d,连续14 d。以睾酮为底物探针,建立稳定、可靠的检测大鼠CYP3A1酶代谢活性的HPLC方法,考察体外代谢体系最佳的孵育时间、最佳蛋白浓度、最佳底物浓度,在最佳孵育条件下根据大鼠肝微粒体转化生成6β-羟基睾酮的速率,评价各组大鼠肝药酶的活性。结果:在大鼠肝微粒体孵育体系,睾酮代谢为6β羟基睾酮反应的最佳孵育时间是10 min,最佳酶蛋白浓度是0.25 mg/mL,最佳底物浓度为200μmol/L。在最佳孵育条件下,升板方高、中、低剂量组及空白对照组、地塞米松诱导组6β-羟基睾酮生成速率分别是:(55.82±5.97)、(65.10±6.83)、(60.89±6.53)、(62.17±6.55)、(126.73±15.40)μmol/(L.mg pro.min)。经统计学检验,升板方高中低剂量组与地塞米松组反应速率的差异有统计学意义(P0.05),与生理盐水组无统计学差异。而升板方各剂量组间均无统计学差异。结论:升板方对大鼠肝药酶CYP3A1酶活性无诱导作用。     

了哥王抗肿瘤活性部位筛选

目的:研究了哥王95%、75%、50%乙醇提取物、水提物及95%乙醇提取物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取部位对肿瘤细胞的增殖抑制作用,确定了哥王抗肿瘤活性部位。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法考察了哥王不同提取物及95%乙醇提取物的不同溶剂萃取部位对Hela、SGC-7901、Bel-7402细胞的抗肿瘤活性。结果:了哥王95%乙醇提物对Hela、SGC-7901细胞有良好的抗肿瘤活性,其石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取部位对Hela、SGC-7901细胞均有不同程度的抗肿瘤活性。结论:石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取部位有较强的抗肿瘤活性,初步确定为了哥王抗肿瘤活性部位。     

D101大孔吸附树脂纯化苦玄参总皂苷的研究

目的 研究D101大孔吸附树脂纯化苦玄参总皂苷的工艺条件，建立苦玄参总皂苷的分析方法。方法 以TLC为检测手段，考察D101大孔吸附树脂对苦玄参总皂苷的吸附和洗脱条件，并采用分光光度法测定提取物中苦玄参皂苷的含量。结果 D101大孔吸附树脂可以将苦玄参总皂苷含量由浸膏中的8．7％提高至27．3％，增加20％乙醇洗脱操作可进一步提高至52．1％；苦玄参总皂苷的最大吸收波长为261nm，与苦玄参苷IA一致。苦玄参苷IA在4．56～91．2μg／mL与吸光度呈良好的线性关系，平均回收率为96.3％。结论 D101大孔吸附树脂能有效富集并纯化苦玄参总皂苷；分光光度法测定苦玄参总皂苷含量具有快捷、准确的特点。     

苦参碱通过抑制microRNA-192调控顺铂耐受肺腺癌A549细胞对顺铂的敏感性

目的探讨苦参碱通过调控microRNA影响顺铂耐受A549(A549/DDP)细胞对顺铂的敏感性。方法采用生物信息学手段对GEO数据库中的相关microRNA芯片数据(访问编号GSE43249)进行数据挖掘,筛选出与A549细胞顺铂敏感性相关的microRNA。体外培养对顺铂敏感的A549细胞及A549/DDP,使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法在体外培养的细胞中验证生物信息学的结果,并考察苦参碱对A549/DDP细胞中microRNA水平的影响。通过转染micro RNA-192(mi R-192)模拟序列上调A549/DDP细胞的mi R-192水平。CCK-8细胞活力实验考察苦参碱处理及(或)mi R-192上调对A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响。结果芯片数据挖掘显示与顺铂敏感的A549细胞相比,A549/DDP细胞中共有11个microRNA存在显著变化(P0.05),其中mi R-192及mi R-194变化在体外培养的细胞中得到了验证。与未经处理的A549/DDP细胞相比,苦参碱处理后的A549/DDP细胞中mi R-192水平显著降低(P0.05)。苦参碱处理可以增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,miR-192的上调可以消除这种效果。上调miR-192水平可诱导A549细胞的顺铂耐受。结论苦参碱可能通过抑制mi R-192调控A549对顺铂的敏感性。     

名医学术传承研究新思路

名老中医代表了一个时期中医药学术和临床发展的最高水平。他们的学术思想和临证经验是名老中医一生或几代人的智慧结晶。他们鲜活生动、理论与实践紧密结合的学术思想,易于我们原汁原味地学习和继承。中医药学术只有不断积累、整理、总结、升华和传承才能向前发展,而传承和创新是中医学不断提高     

可疑翼手参皂苷Colochiroside A体外抑制多种瘤细胞株增殖的研究

目的:研究可疑翼手参体内三萜皂苷Colochiroside A(CA)的体外抗肿瘤活性。方法:用稻瘟霉分生孢子模型对CA进行生物活性初筛,分别用MTT、SRB法检测CA对5种体外培养肿瘤细胞(BEL-7402、HO-8910、MDA-MB-435、MDA-MB-468、A431)和2种体外培养人血管内皮细胞(HMEC、HUVEC)的增殖抑制活性。结果:CA对稻瘟霉显示较强的抑制活性,最小活性浓度(MMDC)<7.9μg/ml;对5种体外培养人肿瘤细胞显示显著抑制增殖活性,IC50为1.75μg/ml-3.66μg/ml;对2种体外培养人血管内皮细胞均显示显著抑制增殖活性,IC50值分别为2.55μg/ml和5.63μg/ml。结论:CA体外对多种肿瘤细胞具有抑制活性,有进一步研究开发的前景。