SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化的机制研究

［摘要］　目的　探究SNHG3调控miR-186-5p/E盒结合锌指蛋白1（ZEB1）促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化（EMT）的机制。方法　在HepG2细胞中转染siRNA干扰片段敲除SNHG3、转染pcDNA3.1(+)/SNHG3使SNHG3过表达,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）检测是否转染成功。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖,细胞划痕实验检测HepG2细胞迁移率,Transwell小室实验检测HepG2细胞侵袭数量,双荧光素酶活性检测验证SNHG3与miR-186-5p、miR-186-5p与ZEB1的靶向关系,FQ-PCR和Western blot法检测SNHG3、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9、Snail的表达水平。结果　肝癌组织中SNHG3表达量高于正常组织,SNHG3表达量低/中的肝癌患者的生存预后优于SNHG3表达量高的肝癌患者,差异有统计学意义（P<0.05）。克隆形成实验结果显示,与pcDNA3.1(+)组相比,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞增殖数量显著增加（P<0.05）。细胞划痕实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞迁移率显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。Transwell小室实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞侵袭数量显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。双荧光素酶活性检测结果显示,miR-186-5p mimic和pGL6-SNHG3-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,miR-186-5p mimic和pGL6-ZEB1-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,差异有统计学意义（P<0.05）。FQ-PCR和Western blot检测结果显示,当SNHG3过表达时,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著下调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著上调;当SNHG3敲除后,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著上调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著下调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论　SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1可促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,表明SNHG3是肝癌潜在的治疗靶点。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂与眼部疾病

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一类金属依赖的水解酶家族,是细胞外基质(extracelluarmatrix,ECM)降解的主要介质,其主要功能是降解细胞外基质,在细胞迁移、组织重建和修复等病理生理过程中发挥作用.     

长链非编码RNA PGM5-AS1在结直肠癌中的临床意义及功能研究

目的 探讨长链非编码RNA PGM5-AS1在结直肠癌组织中的表达情况及其对结直肠癌细胞增殖、迁移的影响.方法 通过实时荧光定量PCR检测24例结直肠癌组及癌旁组、正常人结直肠上皮细胞系NCM460及结直肠癌细胞系SW480、HCT116、Lovo中PGM5-AS1 mRNA的表达.体外构建PGM5-AS1过表达载体,...     

芒柄花黄素对体外卵巢癌细胞活力、迁移与侵袭的影响

目的:观察芒柄花黄素对卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响,并初步探讨其机制。方法:体外培养人卵巢浆液性囊腺癌SKOV-3细胞,采用不同浓度(0、25、50和100μmol/L)芒柄花黄素处理细胞48 h,用MTS法检测细胞活力,并筛选出半数抑制浓度。通过划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测芒柄花黄素对SKOV-3细胞迁移与侵袭能力的影响。RT-qPCR法和Western blot法检测细胞中的上皮钙黏素(E-cadherin)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA及蛋白表达的变化。结果:与对照组比较,SKOV-3细胞的活力随着芒柄花黄素浓度增加而下降(P<0.01)。50μmol/L芒柄花黄素组细胞迁移距离少于对照组(P<0.01)。50μmol/L芒柄花黄素组侵袭穿过Transwell小室底膜的细胞数量显著减少(P<0.01)。此外,50μmol/L芒柄花黄素组E-cadherin的mRNA及蛋白水平显著高于对照组(P<0.01),而MMP-9的mRNA及蛋白水平显著低于对照组(P<0.01)。结论:芒柄花黄素可能通过增加E-cadherin和降...     

miR-556-3p通过靶基因SASH1调控子宫内膜癌细胞的活力、迁移和侵袭

目的:研究微小RNA-556-3p(miR-556-3p)是否通过靶向SASH1基因调控子宫内膜癌细胞的活力、迁移和侵袭。方法:采用RT-qPCR和Western blot检测miR-556-3p和SASH1的mRNA和蛋白在子宫内膜癌组织中的表达。向子宫内膜癌Ishikawa细胞转染anti-miR-556-3p或pcDNA-SASH1,采用MTT法检测细胞活力,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达。StarBase预测和双萤光素酶报告实验分析miR-556-3p和SASH1的靶向关系。将anti-miR-556-3p和si-SASH1共转染Ishikawa细胞,采用上述方法检测其对细胞活力、迁移和侵袭能力的影响。结果:与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-556-3p的表达量显著增加,SASH1的mRNA和蛋白表达量显著减少(P<0.05)。抑制miR-556-3p表达或使SASH1过表达显著降低Ishikawa细胞活力、迁移细胞数、侵...     

舒筋活络方对骨关节炎患者滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：测定舒筋活络方（SHC）对骨关节炎（OA）患者滑膜成纤维细胞（FLS）增殖、迁移、侵袭的影响,明确其作用机制。方法：对胶原酶法分离培养的FLS进行形态学观察,通过MTT比色法、划痕实验、Transwell实验、ELISA法等技术测定SHC对FLS增殖、迁移、侵袭等的影响。结果：体外分离的FLS生长状态良好,具备成纤维细胞形态特性;所选药物浓度范围对FLS增殖影响较小,与空白组比较,较高浓度和低浓度的SHC对FLS增殖的影响差异均有统计学意义（P<005）,FLS的增殖与SHC呈浓度依赖性;镜下观察到OA-FLS的迁移现象,其中,模型组48 h、72 h的迁移率与0 h时比较,差异有统计学意义（P<005）,SHC组72 h的迁移率与0 h时比较差异有统计学意义（P<005）,与模型组比较,48 h、72 h时,SHC组FLS迁移能力比较,差异有统计学意义（P<005）;SHC组FLS侵袭穿过小室膜的细胞个数较空白组明显减少（P<005）;SHC各浓度组均对MMP3的释放有不同程度的抑制作用（P<005）。结论：SHC调节FLS增殖、抑制FLS的迁移和侵袭,维护和修复OA患者关节内组织完整性,为OA的关节保护提供新的预防和治疗策略。     

miR-138靶向SYT13对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及机制研究

目的 探究microRNA-138(miR-138)对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响并探讨其相关机制.方法 RT-PCR检测胃癌和癌旁组织中miR-138的表达及miR-138与上皮标志物E-Cadherin及间质标志物Vimentin表达的相关性;使用TargetScan 7.2预测miR-138的可能结合靶点,荧光素...     

miR-433-3p靶向MAPK8对肝癌细胞MHCC97H增殖、凋亡和迁移的调控作用

目的:探究miR-433-3p对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK8)的靶向调控作用及其对肝癌细胞MHCC97H增殖、凋亡和迁移的调控作用。方法:RT-PCR检测了SMMC-7721、HepG2、MHCC97H、Hep3B肝癌细胞株和HL-7702人正常肝细胞株中miR-433-3p的表达。荧光素酶报告实验检测miR-433-3p和MAPK8的相互作用。将MHCC97H细胞分为空白对照(Control)组、阴性对照(NC)组、miR-433-3p组、pc-MAPK8组和miR-433-3p+pc-MAPK8组,按照分组分别转染miR-433-3p mimic或pc-MAPK8,RT-PCR检测miR-433-3p和MAPK8转录水平,CCK8法检测细胞增殖,Hoechst法检测细胞凋亡,划痕愈合法检测细胞迁移,Transwell法检测细胞侵袭,Western blot检测MAPK8、增殖细胞核抗原(PCNA)、活化半胱天冬酶3(cl-CASP3)、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)蛋白表达。结果:与正常肝细胞株HL-7702比较,肝癌细胞株...     

趋化因子CXCL7通过血管形成途径促进结直肠癌增殖、迁移及侵袭的机制研究

目的 探究趋化因子CXCL7对结直肠癌（CRC）细胞增殖、转移及侵袭的影响与血管生成的关系,阐明CXCL7促进CRC发展的分子机制。方法 采用qPCR及ELISA法筛选出高、低表达CRC细胞株为研究对象,采用CCK-8、EdU染色以及平板克隆形成实验测定CXCL7对结直肠癌细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测周期和细胞凋亡情况;细胞划痕实验测定CXCL7对结直肠癌细胞迁移能力的作用;Transwell实验测定CXCL7对结直肠癌细胞侵袭能力的影响。ELISA试剂盒测量培养血清VEGF水平,Western blot检测血管内皮生长因子受体（VEGF-R）表达水平。结果 细胞增殖实验48 h、72 h时各组吸光度比较：CXCL7干扰组>NC组>空白对照组,差异有统计学意义（F=7.567,17.475,P<0.05）;Transwell实验中迁移与侵袭细胞数比较：CXCL7干扰组>空白对照组>NC组,差异有统计学意义（P<0.05）;处理CRC细胞6 h后,结果显示空白对照组和NC组仅有少量小管形成,而CXCL7干扰组却形成了大量网状结构的小管。管腔形成数...