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71.
目的构建PAI-2ΔCD突变体基因,实现在大肠杆菌中的表达并建立重组人PAI-2ΔCD的分离纯化方法。方法用PCR扩增PAI-2ΔCD基因,经限制性内切酶片段分析及核苷酸序列分析后,突变体基因与原核表达载体pLY-4重组并转化蛋白酶缺陷型菌株JF1125。经温度诱导表达,表达产物用SDS-PAGE,Western印迹法和纤溶抑制活性测定等方法鉴定。工程菌发酵后,经高压匀浆破菌,用离子交换、疏水性色谱和分子筛进行分离。结果经温度诱导表达,SDS-PAGE证实在相应相对分子质量处出现表达条带,约占全菌总蛋白的15%。Western印迹法证实表达产物具有PAI-2免疫原性,溶圈抑制法及翻转板法证实表达产物具有纤溶抑制活性。5L发酵菌液可得湿菌约100g,经多步纯化后,每升发酵菌液可得纯度达97%的PAI-2ΔCD约36mg,比活性为28640AIU/mg。结论成功构建了PAI-2ΔCD突变体,实现了在大肠杆菌中的表达,并成功地分离纯化了重组人PAI-2ΔCD蛋白。 相似文献
72.
图像细胞分析与癌基因检测辅助诊断直肠癌 总被引:2,自引:0,他引:2
目的提高直肠癌术前活检的诊断率。方法对17例术前活检未证实为直肠癌的患者的活检标本(实验组)和15例正常肠粘膜活检标本(对照组)的石蜡包埋块进行常规病理检查、细胞图像分析(ICM)、p53与ras癌基因产物检测。结果实验组ICM结果53%为异倍体,癌基因检测结果p53与ras基因表达阳性率分别为71%、47%。对照组的ICM与癌基因检测结果均阴性。实验组中,常规病理检查11例为不典型增生,5例为慢性炎症。常规病理检查为不典型增生的病例中经ICM、癌基因检测8例为异倍体,p53与ras基因表达阳性分别为11和7例;慢性炎症病例中则既无异倍体,又无p53与ras基因表达,二者之间,异倍体和两种基因表达阳性率差异均有显著意义(P<005)。ICM与癌基因检测结果有较好的一致性。结论ICM与癌基因检测,可以作为常规病理的补充,提高直肠良恶性病变的鉴别力。 相似文献
73.
急性非淋巴细胞白血病中MGMT与p53基因突变的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨肿瘤抑制基因p53、MGMT在急性非淋巴细胞白血病(ANLL)中的改变。方法 用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术对31例ANLL患者、22例正常人p53基因第5、6、7、8外显子和MGMT基因第1、4外显子进行突变分析。结果 31例ANLL中5例存在p53基因突变、4例存在MGMT基因突变,其中2例p53与MGMT同时发生突变。结论 p53基因突变在白血病发生中起一定 相似文献
74.
目的:为获得与天然鲑鱼生长激素一致的基因工程产物,对已构建的鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒pOsGH153进行改造,删除所编码表达产物氨基端多余的9个碱基,方法:采用PALTER系统进行寡聚核苷酸指导下的基因定点缺失突变。突变质粒pOsGH158经限制性酶切图谱及Southern印迹杂交分析加以证,结果:含有表达质粒pOsGH158的大肠杆菌株经IPTG诱导后提取周质帽白,经SDS-PAGE及免疫 相似文献
75.
采用体外培养人淋巴细胞微核检测法,探讨复方云芝胶囊抗突变作用。结果表明,复方云芝胶囊(10mg/L~50mg/L)可显著抑制丝裂霉素C(MMC)诱发的微核形成,并可拮抗老年人自发微核,增加细胞增殖活性。 相似文献
76.
目的 探讨p16和p15基因第二外显子HapⅡ位点在成人急性髓性白血病 (AML)中的突变。方法 用甲基敏感和甲基非敏感限制性内切酶切消化基因组DNA后 ,经PCR扩增和琼脂糖电泳研究 3 1例AML中无p16/p15基因第二外显子缺失的患者中HapⅡ位点的突变情况。结果 在 3 1例成人AML样本中 ,p16E2 的 4个HapⅡ位点和p15E2 的 6个HapⅡ位点均未发生突变。结论 本研究提示p16和p15基因第二外显子中因甲基化而引起的CCGG位点的突变在成人AML患者中不是主要失活方式。 相似文献
77.
中药抗突变实验研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
张世敏 《中国中医药信息杂志》2003,10(8):83-85
自然界存在大量致突变物,人类长期接触致突变物可引起肿瘤、致畸、遗传缺陷等疾病。一方面人们努力降低环境污染,减少或避免致突变物/致癌物;另一方面在抗突变和抗癌研究中寻找一些有效抗突变/抗癌物质,并试图阐明其抗突变与抗癌作用机理。中药抗突变研究进展很快,前景非常广阔。笔者将近年来最新研究现状综述如下。 1 单味中药的抗突变研究 刘氏等[1]采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验,探讨五加皮的体内抗诱变作用。结果五加皮对丝裂霉素(MMC)诱发的微核率和精子畸形率均有明显的拮抗作用,微核抑制率达50.5%~73.… 相似文献
78.
南沙参多糖对亚慢性受照小鼠的抗突变作用研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:研究南沙参多糖对亚慢性受照小鼠抗突变作用。方法:用^60Cγ射线全身低剂量均匀间断照射小鼠106d,累计吸收剂量为3.25Gy,检测外周血白细胞数、血小板数、睾丸精原细胞染色体畸变率、精子畸形率和骨髓嗜多染红细胞微核率。结果:辐射损伤后,外周血白细胞数、血小板数降低;染色体畸变率、精子畸形率和骨髓嗜多染红细胞微核率均增加,南沙参多糖可促进上述指标的恢复。结论:南沙参多糖对亚慢性受照小鼠损伤具有明显的保护作用,其机制与抗氧化作用有关。 相似文献
79.
目的:研究K-ras和p53基因突变与尿路上皮肿瘤的预后关系。方法:应用聚合酶链式反应加单链多态性分析(PCR-SSCP)检测52例尿路上皮肿瘤K-ras和p53基因突变。结果:K-ras基因突变率为9.6%(5/52),p53基因突变率为42.3%(22/52)。结论:尿路上皮肿瘤发生和发展牵涉多基因多步骤途径,p53基因突变对尿路上皮肿瘤预后有预测意义。 相似文献
80.
肺癌患者全线粒体DNA体细胞性突变检测 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 检测肺癌患者线粒体DNA体细胞性突变并探讨它在肿瘤发生中的作用。方法 利用时相温度梯度凝胶电泳对 16例肺癌患者的肿瘤及相应癌旁组织全线粒体DNA进行突变筛查 ,然后直接测序明确突变并进行分析。结果 在 10例 ( 62 .5 % )患者中发现 2 9个体细胞性突变 ,其中 2个位于rRNA区( 6.90 % ) ,10个位于mRNA区 ( 3 4.48% ) ,17个位于高变D环区 ( 5 8.62 % )。检测到 2例肿瘤和 3例癌旁组织具有常见的 4977bp缺失突变。除np3 0 3~ 3 0 9位点具有长度不稳定外 ,未发现其它微卫星区域不稳定。结论 肺癌患者的线粒体DNA存在高频率的体细胞性突变。 相似文献