丁酸钠和5-aza诱导间充质干细胞向心肌细胞分化的研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠（sodiumbutyrate）和DNA甲基化抑制剂5-aza对骨髓间充质干细胞（BMSCs）向心肌细胞分化的影响。方法常规培养大鼠BMSCs,细胞分为4组：依次加入丁酸钠0mM,0.5mM,1.0raM,2.0mM。MTT和流式细胞仪检测不同浓度丁酸钠对细胞增殖和凋亡的影响。4周后利用western blot和免疫荧光检测4组细胞的心肌细胞特异性蛋白的表达。从上述4组中选出诱导能力最强的丁酸钠组与5-aza组成4个实验组：阴性对照组,5-aza组,丁酸钠组,5-aza.L丁酸钠组。作用4周后检测心肌细胞特异性蛋白的表达。结果丁酸钠抑制细胞增殖,具有浓度依赖性,而对细胞凋亡没有明显影响。检测发现丁酸钠和5-a．za均能有效诱导BMSCs分化为心肌细胞,丁酸钠诱导分化最适浓度为1.0mM。同时1．0mM丁酸钠诱导分化效率高于5-aza。除此,5-aza和丁酸钠共同作用于BMSCs,其诱导分化能力明显高于其它组。结论丁酸钠能够有效诱导BMSCs向心肌细胞分化,丁酸钠浓度为1．0mM时诱导能力最强,同时诱导分化率高于5-aza。5-aza和丁酸钠一起作用诱导BMSCs向心肌细胞分化的能力明显高于其它组,间接证明DNA去甲基化和组蛋白乙酰化具有协同作用。丁酸钠在有效作用浓度范围内,虽然抑制BMSCs增殖,但是不影响细胞凋亡,表明丁酸钠具有低毒的特性,为以后丁酸钠应用于临床打下实验基础。     

没食子酸对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用及机制

目的探讨没食子酸对卵巢癌细胞株SKOV3的生长抑制作用及机制,为其临床应用提供依据。方法采用MTT法测定没食子酸单独作用及没食子酸与顺铂、丁酸钠联合用药后卵巢癌细胞株SKOV3的生长抑制率。Annexin V-FITC凋亡试剂盒于荧光倒置显微镜下观察没食子酸诱导SKOV-3细胞凋亡情况。结果没食子酸对SKOV-3细胞株生长有明显抑制作用,且呈一定的浓度依赖性;IC50为23．4μg／ml。没食子酸与顺铂合用可以明显增加顺铂对卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用,而与丁酸钠联合用药仅为单纯相加作用。随着没食子酸剂量增加,凋亡细胞数目增多。结论没食子酸可抑制SKOV3细胞生长,其机制为诱导细胞凋亡;没食子酸与顺铂联用有协同作用。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体联合丁酸纳诱导肝癌HepG-2细胞凋亡研究

目的 观察肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)与丁酸纳(NaB)联合应用对肝癌细胞HepG-2的抑制作用.方法 将HepG-2细胞悬液接种于96孔培养板后,分别或联合加入不同浓度的NaB(1.0、2.5、5.0 mmol/L)和TRAIL(10、100、500、1000μg/L),应用噻唑蓝(MTT)比色法检测其对HepG-2细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内DR4和DR5 mRNA的表达水平.结果经不同浓度的TRAIL处理后,HepG-2细胞生长抑制率和凋亡率分别为(4.5±1.3)%和3.2±0.7)%,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).NaB对HepG-2细胞生长有明显抑制作用,且随着NaB浓度从1.0mmol/L升高到5.0mmol/L时,抑制率从(37.6±2.6)%升高到(58.4±3.0)%,各浓度组间差异有统计学意义(P<0.05),NaB浓度为2.5 mmol/L时的凋亡率为(26.7 5.2)%.联合应用NaB和TRAIL能够明显的提高HepG-2细胞的生长抑制率和凋亡率,与同等浓度的NaB或TRAIL单独应用比较,差异有统计学意义(P<0.05).HepG-2细胞经过NaB作用后,其DR5 mRNA的表达水平明显的高于对照组.结论 HepG-2细胞对单独应用TRAIL诱导的凋亡不敏感,NaB可通过上调HepG-2细胞内DR5 mRNA的表达而增强HepG-2对TRAIL的敏感性.     

丁酸钠对人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及p27Kip1蛋白表达的影响

目的 通过观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠对人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞的增殖影响及p27Kip1蛋白表达改变,探讨丁酸钠调控人口腔癌细胞增殖的分子机制.方法 人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞经不同浓度丁酸钠[0 mmol/L(空白对照组),2、4、6、8 mmol/L(4个实验组)]作用后,甲基噻唑基四唑(MTT)法观察细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布,免疫组化检测p27Kip1蛋白的表达.结果 丁酸钠能够呈时间剂量依赖性抑制Tca8113细胞的增殖,丁酸钠处理后的Tca8113细胞出现了凋亡形态变化;细胞周期阻滞于G0～G1期,丁酸钠2 mmol/L组G0～G1期达(63.2±2.4)%,4 mmol/L组G0～G1期达(77.2±3.8)%,空白对照组G0～G1期达(48.1±2.4)%,P＜0.05;p27Kip1蛋白表达水平明显上调.结论 丁酸钠能够抑制人口腔癌细胞的增殖,该作用可能与p27KiP1蛋白表达上调及G0～G1期细胞周期阻滞有关.     

A new oral formulation for the release of sodium butyrate in the ileo-cecal region and colon

AIMTo develop a new formulation with hydroxy propyl methyl cellulose and Shellac coating for extended and selective delivery of butyrate in the ileo-caecal region and colon.METHODSOne-gram sodium butyrate coated tablets containing 13C-butyrate were orally administered to 12 healthy subjects and 12 Crohn's disease patients and the rate of 13C-butyrate absorption was evaluated by 13CO2 breath test analysis for eight hours.Tauroursodeoxycholic acid(500 mg)was co-administered as a biomarker of oro-ileal transit time to determine also the site of release and absorption of butyrate by the time of its serum maximum concentration.RESULTSThe coated formulation delayed the 13C-butyrate release by 2-3 h with respect to the uncoated tablets.Sodium butyrate was delivered in the intestine of all subjects and a more variable transit time was found in Crohn's disease patients than in healthy subjects.The variability of the peak 13CO2 in the kinetic release of butyrate was explained by the inter-subject variability in transit time.However,the coating chosen ensured an efficient release of the active compound even in patients with a short transit time.CONCLUSIONSimultaneous evaluation of breath 13CO2 and tauroursodeoxycholic acid concentrationtime curves has shown that the new oral formulation consistently releases sodium butyrate in the ileo-cecal region and colon both in healthy subjects and Crohn's disease patients with variable intestinal transit time.This formulation may be of therapeutic value in inflammatory bowel disease patients due to the appropriate release of the active compound.     

分离丁酸钠诱导人大肠癌新分化相关基因的mRNA差异显示技术的一些改进

目的 :探讨应用 m RNA差异显示技术分离丁酸钠诱导的人大肠癌分化相关基因的改进方法。方法 :实验过程中针对某些关键因素如引物设计及 PCR参数的优化、PCR扩增产物显示方法、差异片段的鉴定及再证实等方面进行摸索和改进 ,总结出较为行之有效的改进方法。结果 :获得的差异片段经克隆测序并与 Gene Bank比较 ,其中的一个可能是新的基因 ,另一个与鼠 SOCS家族同源。结论 :经改进的方法 ,具有工作量小、实验周期短、操作简单、重复性好、成本低的优点。     

丁酸钠治疗胃粘膜癌前病变的实验研究

给大鼠自由饮用５０μｇ／ｍｌＭＮＮＧ溶液共２０周，诱发脾胃粘膜病变。实验从第３６周起，按１５０ｍｇ／ｋｇ体重，每日１次给大鼠喂服丁酸钠共８周，以后处死动物进行观察。丁酸钠治疗组大鼠腺胃粘膜肠化生、硫酸粘液阳性肠化生、中重度异型增生及胃癌的发生率（各为６０．０％、４０．０％、２０．０％、０％）显著低于未加治疗的对照组（各为８８．０％、７６．０％、４８．０％、１６．０％）（Ｐ＜０．０５）；治疗组大鼠幽门腺与胃底腺平均肠化腺体数（各为７０．３±４６．８、３９．８±２９．６）亦显著地低于治疗前对照组（各为２１６．３±９８．４、１３０．７±５９．２）和未加治疗的对照组（各为２４１．４±１１３．９、１４６．４±６６．３）（Ｐ＜０．０１）；经丁酸钠治疗后，大鼠病变胃粘膜血流量改善，泌酸功能好转，跨膜电位差及血和组织中ＬＰＯ含量恢复接近正常水平。说明丁酸钠对大鼠实验性腺胃粘膜癌前病变有部分逆转和阻断治疗作用。这为探讨人类胃癌前病变的防治提供了新的途径。     

转移抑制基因KAI1在丁酸钠逆转卵巢癌细胞恶性表型作用中的变化

目的 :研究丁酸钠逆转人卵巢癌 3AO细胞恶性表型的机制。方法 :采用MTT法观察药物对卵巢癌细胞的抑制作用 ,扫描电镜观察药物作用后细胞超微结构变化 ,免疫组化染色观察药物作用后转移抑制基因KAI1表达的变化。结果 :药物对卵巢癌 3AO细胞的抑制率呈剂量依赖性 ,药物作用后细胞微绒毛减少、变短、消失 ,KAI1基因免疫组化染色较对照组明显增强。结论 :丁酸钠可成功逆转人卵巢癌细胞的恶性表型 ,转移抑制基因KAI1在肿瘤浸润转移中起着重要作用     

苯丁酸钠对喉癌Hep-2细胞株诱导化疗的影响

目的:研究苯丁酸钠(PB)与诱导化疗药物对体外喉癌Hep2细胞株的联合作用,探讨PB对喉癌诱导化疗的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测PB分别与5氟脲嘧啶(5FU)和顺铂(CDDP)联合作用时对喉癌细胞的生长抑制作用。结果:5FU和CDDP分别与PB联合应用时,两药各个剂量组与对照组比较及各个剂量组之间比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);当5FU和CDDP的浓度一定时,PB的各个剂量组之间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:PB能增强诱导化疗药物对体外喉癌细胞的细胞毒作用,为临床增强喉癌诱导化疗的疗效,减少并发症和毒性反应的发生提供了新的思路。     

丁酸钠通过NF-κB途径上调NB4细胞共刺激分子表达

目的　观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠上调NB4 细胞共刺激分子表达的作用,并探讨其分子机制。方法　流式细胞术检测NB4 细胞经不同浓度丁酸钠处理不同时间后CD86、CD80分子表达变化,观察NF κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(Pyrrolidinedithiocarbamate ,PDTC)对丁酸钠上调CD86表达影响,NF κB试剂盒检测NB4 细胞核内NF κB含量。结果　经丁酸钠处理后,CD86和CD80分子比对照组出现不同程度上调,并具有时间剂量 效应依赖性。PDTC可部分抑制丁酸钠对CD86分子表达的上调作用。丁酸钠处理NB4 细胞后核内NF κB含量增多。结论　丁酸钠通过NF κB途径上调NB4 细胞共刺激分子表达。