重组空肠弯曲菌PEB1蛋白的大量表达及其鉴定分析

目的 探讨基因工程菌PEB1 E.coli BL21(DE3)大量表达重组空肠弯曲菌PEB1蛋白的稳定性及其纯化方法并鉴定.方法 诱导培养工程菌E.coli BL21(DE3)表达重组空肠弯曲菌PEB1蛋白,经镍琼脂糖凝胶层析柱纯化,透析后通过SDS-PAGE分析纯化后的重组空肠弯曲菌PEB1蛋白分子量大小.结果 挑取的PEB1 E.coli BL21(DE3)单个菌落,经总共17 h的扩增,细菌总数可达1×1010以上.在咪唑浓度为100,200,300 mmol/L时,洗脱液中重组蛋白的含量较高,分子量在31KD左右.结论 基因工程菌PEB1 E.coli BL21(DE3)可大量稳定表达重组空肠弯曲菌PEB1蛋白,经鉴定与空肠弯曲菌外膜蛋白-PEB1蛋白分子量相同.     

最大无菌屏障与中心静脉导管相关血流感染关系的Meta分析

目的 探讨最大无菌屏障与预防中心静脉导管相关血流感染的相关性.方法 采取Meta分析法,对医院重症监护室或肿瘤患者实施中心静脉置管时采用最大无菌屏障来预防导管相关血流感染的作用进行研究和分析.结果 依据本研究标准,将8篇个案研究资料纳入分析范围,根据异质性检验水准(d=0.1),选择随机效应模型分析,结果显示最大无菌屏障可降低中心静脉导管相关血流感染发生率(OR =0.35,95％ CI =0.24 ～0.53;P＜0.01).结论 最大无菌屏障可降低中心静脉导管相关血流感染发生率,可作为导管相关血流感染重要预防措施.     

密度梯度离心法分离脐血单个核细胞方法的优化

目的 对密度梯度离心法分离脐血单个核细胞的方法进行优化,以提高该方法分离脐血单个核细胞的收率.方法 脐血40份,每份40 ml,分为常规组和优化组,每组20份.常规组脐血与NS1∶1混合稀释后,直接通过Ficoll分离液分离单个核细胞;优化组通过先将脐血洗涤一次,加入等量NS充分吹打混匀,200目筛网过滤,保持细胞悬液和Ficoll分离液1:1的体积比进行分离操作.对每份分离得到的脐血单个核细胞通过白细胞稀释液稀释后计数.结果 常规组分离后的白膜层有11份界面不清晰,同时均混有少量的红细胞.优化组分离后的白膜层有1份界面不清晰,仅有极少的红细胞混入.两种方法收集的脐血单个核细胞数比较,优化组多于常规组(P＜0.01).结论 通过对密度梯度离心法的步骤进行优化,可提高脐血单个核细胞的分离效果.     

茶多酚联合顺铂对人卵巢癌细胞SKOV3生长的影响及机制

目的观察茶多酚(TP)、顺铂(DDP)及二者联合对人卵巢癌细胞SKOV3增殖及凋亡的影响,初步探讨二者联合对SKOV3细胞生长影响的机制。方法人卵巢癌细胞SKOV3经低毒剂量TP、DDP单独或联合作用后,MTT法检测细胞增殖情况,DAPI核染色法荧光显微镜观察细胞凋亡形态变化,AnnexinV-FITC双染流式细胞术分析细胞凋亡,Westernblot方法检测细胞中Akt及p-Akt的表达。结果低毒剂量TP单药组、DDP单药组与联合用药组对细胞的增殖抑制率分别为(11.47±2.07)%、(32.26±4.85)%、(52.62±3.23)%,联合用药组的细胞增殖抑制率明显高于DDP单药组,差异有统计学意义(P=0.000);荧光显微镜下可见低毒剂量TP单药组的细胞核形态及染色与阴性对照组无明显差异,联合用药组细胞核比DDP单药组着色更重,核浓缩、核碎裂现象更加明显,呈现典型的细胞凋亡征象;低毒剂量的TP对细胞的凋亡无明显影响,联合用药组的凋亡率明显高于DDP单药组,差异有统计学意义(P=0.000);各用药组细胞中总的Akt蛋白表达无明显变化,p-Akt蛋白表达降低,其中联合用药组细胞中p-Akt蛋白表达降低最明显,与对照组及单药组比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 TP与DDP联合后可显著增强DDP的抑制细胞增殖、促细胞凋亡效应,可能是通过抑制Akt蛋白的磷酸化来实现的。     

综合性评价在《护理学基础》实验教学中的应用

护理学基础操作技能在护理中的地位是非常重要的,尤其直接影响到护理专业的发展,也影响着实用型护理人才的质量.教育评价是促进教育发展的重要手段,是了解教育教学水平,了解人才质量和学生学习效果的基本方法.通过教育评价不仅可以发现教育活动中存在的问题,而且可以了解教师的教学水平和学生的学习效果.     

Ki-67启动子转录调控结构与功能研究

目的 观察Ki-67核心启动子调控元件对转录调控的影响.方法 根据Ki-67启动子结构软件分析结果,对Ki-67核心启动子(-223～+30)内的5个调控区域,包括(+13～+30)及4个潜在Sp1结合位点(-198～-172)、(-170～-144)、(-63～-37)和(-14～+12)进行内部缺失,目的片段缺失的Ki-67核心启动子插入pGL3-Basic载体,构建报告基因重组体质粒.将重组体分别转染肿瘤Hela、SW1990、SGC-7901、A549细胞株,使用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,并与Ki-67核心启动子质粒pGLBK2+转录活性比较.结果 缺失(+13～+30)的启动子重组体质粒在4种肿瘤细胞的转录功能均有显著提高,分别达到缺失前的1.2、2.0、1.7、1.4倍.缺失潜在Sp1结合位点的4个启动子重组体在4种肿瘤细胞的转录功能均有显著降低,其中缺失(-170～-144)后转录活性最小,在4种肿瘤细胞中分别降至未缺失前的16.2%、10.4%、6.7%、12.2%.结论 Ki-67启动子(+13～+30)区包含负性调控元件,对其缺失后形成的新的Ki-67核心启动子(-223～+12)是更好的调控肿瘤基因治疗的启动子.(-198～-172)、(-170～-144)、(-63～-37)和(-14～+12)可能存在潜在的Sp1顺式作用元件,其中-170～-144区域的顺式作用元件最为重要.     

99Tcm-MDP全身骨显像联合局部SPECT/CT断层融合图像诊断原发性肝癌胸腰椎转移的临床价值

目的 探讨⁹⁹Tc^m-MDP全身骨显像联合局部CT融合图像诊断原发性肝癌胸腰椎转移的临床价值。方法 65例排除其他恶性肿瘤病史的伴有腰背痛的原发性肝癌患者行全身骨显像及胸腰椎局部SPECT/CT断层融合图像,根据患者综合表现诊断为肿瘤骨转移和无肿瘤骨转移,以手术病理或随访结果为最终诊断标准。采用四格表χ²检验比较全身平面显像与平面显像联合局部SPECT/CT断层融合图像对原发性肝癌胸腰椎转移的检出率,采用两组间的t检验比较两种方法检出胸腰椎转移灶数目的差异性。结果 65例伴有腰背痛的原发性肝癌患者经全身骨显像,检出骨转移病例12例,检出率为18.46%;共检出胸腰椎转移灶57个,有骨转移病灶的患者平均胸腰椎转移灶为4.07䥺SymbolqB@1.27个;全身骨骼联合局部SPECT/CT断层融合图像检出骨转移病例30例,检出率为46.15%;胸腰椎病灶136个,有骨转移病灶的患者平均胸腰椎转移灶4.53䥺SymbolqB@1.20个;两方法间检出率差异有统计学意义(χ²=11.40,P<0.05...     

RO20-1724对氯胺酮重复麻醉致未成年大鼠认知功能障碍的影响

目的 评价RO20-1724对氯胺酮重复麻醉致未成年大鼠认知功能障碍的影响.方法 健康SD大鼠48只,21日龄,雌雄不拘,体重45～55 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=12):对照组(C组)、氯胺酮组(K组)、氯胺酮+ RO20-1724组(K+R组)和氯胺酮+无水乙醇组(K+A组).K组腹腔注射氯胺酮70 mg/kg,1次/d,连续7d;K+R组和K+A组腹腔注射氯胺酮70 mg/kg,30 min后分别腹腔注射RO20-1724 0.5 mg/kg或等容量无水乙醇,1次/d,连续7d.C组腹腔注射等容量生理盐水,1次/d,连续7d.采用Morris水迷宫实验测定认知功能,记录逃避潜伏期和穿越原平台次数.Morris水迷宫实验结束当日,每组处死6只大鼠,取海马组织,电镜下观察超微结构.Morris水迷宫实验结束当日,每组处死6只大鼠,取海马组织,测定海马磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白(p-CREB)表达.结果 与C组比较,K组和K+A组第3天和第4天时逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,海马组织p-CREB表达下调(P＜0.05),K+R组逃避潜伏期、穿越原平台次数和p-CREB表达差异无统计学意义(P＞0.05);与K组比较,K+R组第3天和第4天时逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增多,海马组织p-CREB表达上调(P＜0.05),病理学损伤减轻,K+A组逃避潜伏期、穿越原平台次数和p-CREB表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RO20-1724可改善氯胺酮重复麻醉致未成年大鼠认知功能障碍,其机制与上调海马p-CREB的表达.     

高迁移率族蛋白1参与脓毒症大鼠急性呼吸窘迫综合征时中性粒细胞的凋亡

目的 探究脓毒症大鼠急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)时高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)参与中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMN)凋亡延迟的相关机制及正丁酸钠(sodium butyrate,SB)的干预效果. 方法 采用随机数字表法将90只健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为正常对照组(NS组,6只)、内毒素(lipopolysaccharide,LPS)致伤组(LPS组,42只)、HMGB1抑制剂SB干预组(SB组,42只),LPS组、SB组又分为7个时相点(LPS致伤后0.5、1、2、6、12、24、48 h),每个时相点6只动物.LPS组,腹腔注射LPS 5 mg/kg;SB组,腹腔注射LPS 5 mg/kg后0.5 h静脉注射SB,每次剂量500 mg/kg;NS组,腹腔注射生理盐水1 ml.LPS组、SB组于LPS注射后各时点,颈静脉取血检查PMN,取血后左肺灌洗收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),取右肺中叶行HMGB1 mRNA检测;于LPS注射12h时点(NS组大鼠留取颈静脉血、收集BALF、取右肺中叶行HMGB1 mRNA检测),3组大鼠收集左肺BALF后,取右肺下叶检测肺组织湿/干重比(wet/dry weight ratio,W/D),取右肺上叶进行病理组织学检查;于24、48 h时点,LPS组、SB组取右肺下叶检测肺组织W/D、取右肺上叶进行病理组织学检查. 结果 与NS组比较,LPS组肺组织中HMGB1 mRNA表达量明显增高,24 h达最大值,差异有统计学意义(P＜0.05);SB组的HMGB1 mRNA表达量减少,差异有统计学意义(P＜0.05).LPS组BALF中凋亡早期PMN表达量与NS组类似,但凋亡晚期PMN变化则不同,LPS组外周血中凋亡晚期PMN细胞高于NS组(P＜0.05),LPS组BALF中凋亡晚期PMN细胞均低于NS组(P＜0.05).LPS 12 h组BALF的PMN百分比明显高于NS组[(49.1±6.8)、(2.7±0.5)],差异有统计学意义(P＜0.01).LPS组肺组织光镜下可见肺泡腔水肿,支气管壁中发现PMN浸润,肺泡壁毛细血管扩充血.LPS24 h组肺组织的W/D明显高于NS组[(6.71±0.12)、(4.18±0.26)],差异有统计学意义(P＜0.05).SB干预组的HMGB1 mRNA表达量减少,早期凋亡率类似,SB组的BALF晚期凋亡率高于同时点LPS组的BALF,SB外周血组晚期凋亡低于同时点LPS外周血组,差异有统计学意义(P＜0.05).SB组BALF的PMN百分比、肺组织病理损伤程度、W/D均低于LPS组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 在大鼠ARDS中,HMGB1 mRNA表达较晚,但持续时间长,SB对HMGB1有潜在的治疗作用,HMGB1可能参与PMN凋亡机制的调节.     

高压氧联合神经干细胞移植对局灶性脑缺血大鼠空间记忆功能的影响

目的探讨高压氧(HBO)联合侧脑室神经干细胞(NSCs)移植对大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠空间记忆功能的影响。方法清洁级雄性SD大鼠60只,随机分为五组:假手术组(Sham组)、MCAO组、HBO组、NSCs组和HBO+NSCs组。MCAO模型采用改进的Longa法制作。各组均行Morris水迷宫实验,测试结束后立即处死大鼠,检测各组大鼠海马乙酰胆碱转移酶(ChAT)活性及脑源性神经营养因子(BDNF)与血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果各组大鼠寻找平台的的平均潜伏期随训练时间的延长逐渐缩短。MCAO组平均潜伏期显著长于其它四组(P<0.05)。HBO+NSCs组潜伏期明显短于HBO组和NSCs组(P<0.05)。HBO+NSCs组和Sham组潜伏期差异无统计学意义。MCAO组ChAT活性、VEGF和BDNF含量明显低于其它四组(P<0.05),而HBO+NSCs组明显高于HBO组和NSCs组(P<0.05)。结论 HBO联合NSCs移植更好地改善了局灶性脑缺血-再灌注大鼠记忆功能,这可能与促进海马ChAT活力及BDNF与VEGF的表达有关。