稳定层流剪应力对内皮细胞骨架调节蛋白VASP表达的影响

为探讨生理强度的稳定层流剪应力对内皮细胞骨架actin相关蛋白VASP特征影响规律，我们采用胰蛋白酶消化法分离人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，模拟体内流动环境，建立平行板流动腔模型。利用细胞图像分析系统和ALEXA488—若丹明一次毒蕈环肽双标记法，观察内皮细胞在稳态层流下形态、actin排列变化与VASP分布变化之间的规律。采用Western blot定量动态检测细胞内VASP表达及磷酸化的水平。结果表明，内皮细胞在10dyn／cm^2剪切作用后，随时间细胞逐渐延长，长轴趋于剪应力作用方向排列，细胞与静息态的细胞相比，细胞内骨架沿剪应力方向重组，与此同时VASP表达增强，沿着actin纤维呈点状分布，尤其集中在细胞膜下actin末端区域；Western blot检测显示在剪切后，细胞内VASP出现快速磷酸化，VASP总体表达量增加，2h达高峰后逐渐恢复，8h后再次逐渐升高。以上结果提示血流动力学特性中剪应力引起了细胞胞质内骨架蛋白分子重组，血管内皮细胞形态改变，在此过程中，VASP发挥骨架调节蛋白的作用。     

纤维蛋白原与吸附白蛋白、肝素的新型血管支架材料氧化钛的血液相容性

探索纤维蛋白原(Fibrinogen,FIG)与吸附白蛋白、肝素的新型血管支架材料氧化钛(Titanium Oxide,Ti-O)的血液相容性。(1)研制Ti-O,切割成薄膜;(2)Ti-O薄膜涂层白蛋白和肝素;(3)血小板(platelet,PL)吸附试验;(4)酶联免疫试验测FIG吸附量;(5)动物犬股动脉内植入涂层的Ti-O薄膜与对照试片Ti-O和不锈钢(Stainless steel,SS)薄膜。结果发现:Ti-O完全具有固定白蛋白和肝素的结构与性能,比未涂层的Ti-O能更一步减少PL和FIG的吸附,实验动物体内薄膜6个月后取出扫描电镜观察黏附的PL少,形态无改变,血管内无血栓,优于未涂层的Ti-O,更明显优于SS。Ti-O为N型半导体,不易接受FIG的电荷,并且与血细胞有相似的界面张力,决定生物材料Ti-O有较好的血液相容性。Ti-O对白蛋白、肝素有极好的亲和力是因以化学键相结合,在血中进一步减少FIG和PL被涂层的Ti-O吸附。实验证明涂层的Ti-O有持久和稳定的抗凝血性能。     

支气管哮喘患者粘附分子和细胞因子的变化及其意义

目的:探讨支气管哮喘患者外周血白细胞粘附分子β2整合素(β2-integrin熏CD18)、血清可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1,CD54)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的变化及其意义。方法:采用流式细胞仪技术检测外周血白细胞CD18和血清sICAM-1的表达;采用酶连接免疫吸附方法(ELISA)检测血清IL-6和IL-8水平。结果:(1)与正常对照组相比,支气管哮喘患者外周血白细胞CD18和血清sICAM-1表达显著增加穴P<0.05雪;(2)与正常对照组相比,支气管哮喘患者血清IL-6和IL-8水平显著增加穴P<0.05雪;(3)支气管哮喘患者外周血白细胞CD18和血清sICAM-1表达呈显著正相关(r=0.791熏P<0.05)。结论:支气管哮喘患者外周血白细胞CD18和血清sICAM-1表达以及IL-6和IL-8水平增加,可能是支气管哮喘重要的发病机制之一。     

临床分离产IMP-1型金属酶非发酵菌的耐药机制研究

从临床收集耐亚胺培南的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌共50株,进行头孢他啶和2-巯基乙醇的表型协同试验(CAZ ME),然后进行金属酶IMP-1基因的PCR检测。选取IMP-1阳性株测序,用PCR方法检测有无一类整合子基因(IntI1)。表型的检测发现有28株为协同阳性,其中铜绿假单胞菌27株,鲍曼不动杆菌1株。PCR和测序检测出其中一株铜绿假单胞菌含有IMP-1基因,同时也含有IntI1基因。首次在中国西部地区发现产IMP-1型金属酶、同时也含有一类整合子的铜绿假单胞菌,对于临床上研究细菌的耐药性传播具有重要意义。     

苦参碱对人单核细胞内三磷酸腺苷结合盒转运体A1及胆固醇酯的影响

目的观察苦参碱对人单核细胞胆固醇和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响。方法用TBARS法检测细胞内MDA,油红O染色法检测泡沫细胞的形成,荧光分光光度法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量,RT-PCR和Western blot检测ABCA1mRNA与蛋白的表达。结果单核细胞经佛波脂(PMA)及ox-LDL共同孵育后,细胞内积聚的总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯及脂质过氧化产物均明显增多(P<0.05),有大量泡沫细胞形成,而ABCA1蛋白、mRNA水平明显减少(P<0.05);苦参碱干预组显著缓解上述变化,细胞内胆固醇酯减少,ABCA1 mRNA、蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论苦参碱可能通过增强ABCA1的表达和降低细胞内胆固醇聚积而发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

CTLA4Ig基因转染猪皮治疗中小面积浅Ⅱ度烧伤创面的随机对照试验

目的探讨CTLA4Ig基因转染猪皮治疗中小面积浅Ⅱ度烧伤创面的临床疗效与安全性。方法将自2005年5月～2007年5月我院收治的浅Ⅱ度烧伤患者60例随机分为2组，每组30例。基因转染猪皮治疗组：伤后创面简单清创，去除水疱，用复温后的基因转染猪皮覆盖创面。对照组：创面简单清创，除颜面、会阴部位创面外，均予包扎治疗，保留水疱皮，其后常规换药治疗。结果基因转染猪皮治疗组创面愈合时间5～10d，对照组为8～14d。基因转染猪皮治疗组疼痛明显减轻，未观察到寒战、高热等全身不良反应及局部排斥反应。两组均未出现瘢痕，但对照组部分病例出现色素改变。结论应用基因转染猪皮治疗中小面积浅Ⅱ度烧伤创面能明显缩短创面愈合时间，能明显减轻创面疼痛，减少换药次数，预防色素改变及瘢痕形成。     

Survivin反义核酸对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

Survivin是凋亡抑制蛋白（IAP）家族的一个成员，具有强大的抗细胞凋亡功能，在几乎所有肿瘤组织中特异性表达，而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不表达。本研究针对Survivin mRNA序列设计了反义寡核甘酸，RT—PCR检测表明，该序列反义寡核苷酸可明显降低细胞中survivin基因的mRNA含量；Western印迹显示Survivin蛋白水平也被降低。MTT比色实验法检测结果说明人Survivin反义寡核苷酸抑制SMMC-7721细胞增殖，抑制率为43％，远高于无义寡核苷酸组和空白对照组。反义寡核苷酸还显著增强SMMC-7721细胞对于抗肿瘤药高三尖杉酯碱的敏感性，TUNEL法检测结果显示，在较低高三尖杉酯碱浓度下，反义寡核苷酸转染细胞的凋亡率明显高于其它对照组。本研究结果提示，survivin表达的靶向抑制有望应用于肿瘤的辅助治疗之中。     

Calpain inhibitor I对烧伤小鼠肝脏NF-κB转录及炎性细胞因子分泌的影响

探讨Calpain inhibitorI（CI—I）对严重烧伤小鼠肝脏IκBα表达，NF-κB转录及炎性细胞因子分泌的影响。将CI-I腹腔给药预处理小鼠1h后背部行20％全身体表面积（TBsA）Ⅲ度烧伤，收集肝组织，检测其IκBα表达，NF-κB转录和血清TNF-α、IL-1β、IL-6分泌水平。与烧伤对照组比较，CI-I预处理后肝脏NF-κB转录活性和炎性细胞因子分泌有所降低。提示CI-I预处理可有效抑制严重烧伤小鼠肝细胞NF-κB活化和血清炎性细胞因子分泌，从而有利于烧伤后的炎症调节。     

定向诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化

目的:采用骨髓间充质干细胞体外转化为心肌样细胞,为心衰的干细胞移植治疗提供基础。方法:分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,5-氮杂胞苷诱导24h后正常培养,通过形态学、PAS反应、磷钨酸苏木素染色(PTAH)、免疫细胞化学染色作鉴定。结果:诱导细胞以梭形、柱状为主,部分细胞有分支,单个核、卵圆形、居中,似心肌细胞,PAS及PTAH染色均为阳性。诱导后培养2周的细胞表达Sarcomeric Actin和Connexin-43较弱,以后表达逐渐增强,而且1、3、5代细胞均稳定表达。结论:骨髓MSCs可在体外被诱导分化为心肌样细胞,有望成为心衰干细胞移植治疗的理想细胞材料。     

涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系基因表达谱及基质金属蛋白酶表达差异

目的筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的候选基因，并对其中的候选基因进行初步的验证。方法用限制片段差异显示PCR技术（restriction fragments differential display PCR, RFDD-PCR）建立涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞株（ACC-M、ACC-2）的表达谱。对两个表达谱的片段进行比较，通过生物信息学的分析，初步筛选出候选基因。用半定量逆转录PCR技术对筛选出的基因进行初步验证。结果RFDD-PCR方法共获得5420个基因片段，其中包含12个基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）基因。半定量逆转录PCR方法发现MMP2、MMP7、MMP9、MMP14、MMP15、MMP24在ACC-M和ACC-2中的表达存在明显差异。结论构建了ACC-M和ACC-2细胞株的表达谱，为寻找目的基因奠定了基础。发现MMP2、MMP7、MMP9和MMP15与涎腺腺样囊性癌的发生、发展、转移有关，不同肿瘤细胞的转移能力可能与不同的MMPs家族基因相关。