创伤合并内毒素攻击时小鼠肝组织锌指蛋白A20 mRNA表达的初步研究

目的　研究创伤合并内毒素攻击时小鼠肝组织中锌指蛋白A2 0mRNA的表达规律。方法　选用健康昆明种小白鼠 95只 ,雌雄不拘 ,体重 18～ 2 4 g ,制作双侧股骨闭合性骨折创伤及创伤合并内毒素血症模型。随机分为正常对照组、单纯创伤组、单纯内毒素组和创伤内毒素组。以逆转录 -聚合酶链式反应 (RT -PCR)技术检测肝组织中锌指蛋白A2 0mRNA的表达 ,结果以A2 0mRNA与内参照GAPDHmRNA之总灰度比值表示。　结果　正常对照组A2 0mRNA呈现低量表达 ;单纯创伤组各时相点锌指蛋白A2 0mRNA均呈现低量表达 ,与正常对照组相比 ,差异无显著性意义 ;单纯注射内毒素后 0 .5h ,A2 0mRNA均较正常对照组升高明显 ,注射后 0 .5～ 2h为A2 0mRNA表达的高峰期 ,2h以后表达又有所下降 ,各时相点均高于单纯创伤组 ;而创伤内毒素组在注射内毒素后 0 .5h ,A2 0mRNA均较其他两组显著升高 ,注射后 0 .5～ 2h为A2 0mRNA表达的高峰期 ,注射后 2h显著高于单纯内毒素组 (P <0 .0 5 ) ,至 4 ,7,10h时表达逐渐下降 ,但仍高于单纯创伤组。　结论　锌指蛋白A2 0作为一种参与体内炎症反应调控的内源性蛋白 ,在创伤合并内毒素攻击的早期即可呈现出高表达。说明创伤合并内毒素攻击情况下 ,A2 0表达增加是机体的一种重要的内源性抗炎保护效应机制 ,     

对年青患者行全髋关节置换术如何选择？

解答：由于年青人活动量大，对关节使用寿命要求更长，目前可以考虑使用：（1）高交联的超高分子聚乙烯-金属；（2）陶瓷-陶瓷的人工关节承重面；（3）金属-金属的人工关节承重面。     

纳米羟基磷灰石/聚氨基酸复合材料的生物相容性研究

目的:评价新型骨内固定生物材料纳米羟基磷灰石(Nanohydroxy apatite,nHA)/聚氨基酸的生物相容性.方法:对nHA/聚氨基酸复合材料生物相容性进行体外及体内评价,分别进行以下实验:①细胞毒性试验,材料与兔骨髓间充质干细胞共同培养,倒置相差显微镜观察细胞生长,CCK-8检测细胞增殖情况.②急性毒性试验,KM小鼠20只,雌雄不限,体重20～23 g,分两组(n=10),分别按50 g/kg注射材料浸提液及生理盐水,观察小鼠毒性表现.③溶血试验,分3组,分别取10 ml材料浸提液、灭菌蒸馏水、生理盐水,各加入0.2ml新鲜抗凝兔血测溶血率.④热源试验,新西兰大白兔3只,雌雄不限,体重2.3～2.5 kg,按10ml/kg注射材料浸提液,测量正常体温与注射后连续3 h内每小时体温的差值.⑤微核试验,KM小鼠30只,雌雄不限,体重20～23 g,分3组(n=10),分别按100 g/kg间隔24h注射材料浸提液、环磷酰胺及生理盐水2次,观察骨髓嗜多染红细胞及含微核小体的骨髓嗜多染红细胞,计算微核率.结果:nHA/聚氨基酸复合材料对骨髓间充质干细胞无毒性,无急性毒性,溶血率正常,无致热源,无微核试验遗传毒性.结论:nHA/聚氨基酸复合材料具有良好的生物相容性,有望用作骨内固定材料.     

分阶段阶梯式教学法在骨科见习教学中的应用

以临床实践操作教学为中心，按照认识规律巧妙地运用分阶段阶梯式教学方法，使医学生的学习热情、对见习内容的理解和掌握程度及动手能力均获得显著提高，该方法在骨科临床见习教学中取得了满意的教学效果。     

微囊化神经组织联合脱细胞神经移植修复犬坐骨神经缺损

目的 了解微囊化神经组织与脱细胞神经联合移植桥接犬坐骨神经30 mm缺损后腓肠肌的变化.方法 将健康成年杂种犬12只随机分为A、B、C、D 4组(n=3):A组截取双侧坐骨神经行化学萃取制备脱细胞神经;B、C组使用脱细胞神经移植修复犬的坐骨神经30 mm缺损,B组同时辅以微囊化神经组织移植;D组行自体神经移植修复缺损.术后定期观察术侧肢体运动功能恢复情况,6个月时检测神经移植段运动传导速度,并取术侧及健侧腓肠肌行琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase,SDH)、突触素和运动终板染色,以及取距远端吻合口以远1 cm的坐骨神经神经行Masson、固蓝及NF-200染色.结果 B、C、D组实验动物均纳入实验动物数量分析、无脱失.图像分析表明B组腓肠肌SDH光密度、肌纤维截面积、突触素及运动终板光密度及面积等与C组有明显统计学差别,而与D组无明显统计学差别,运动功能恢复、电生理及坐骨神经形态学检测均与腓肠肌检测结果相符合.结论 微囊化神经组织细胞与脱细胞神经联合移植修复缺损神经后,重新支配靶器官,使腓肠肌萎缩明显减弱,效果优于单纯脱细胞神经移植,有望代替自体神经移植.     

土木香内酯对人骨肉瘤143B细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨土木香内酯（alantolactone,ALT）对人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。方法：用不同浓度（0、4、6、8、10 μmol/L）的ALT处理人骨肉瘤143B细胞后,用结晶紫染色法和MTT实验检测细胞的增殖能力,用划痕愈合实验、Transwell 小室法、Hoechst33258 染色法分别检测细胞的迁移、侵袭和凋亡水平,用qPCR及Western blotting（WB）分别检测细胞中E-cadherin 和N-cadherin、caspase-3、cleaved-caspase-3（c-caspase-3）、PARP和cleaved-PARP（c-PARP）mRNA和蛋白表达水平。用荧光素酶报告基因实验检测T细胞淋巴因子或淋巴增强因子（T cell lymphocyte factor/lymphoid enhancer factor,TCF/LEF）转录活性,qPCR及WB检测β-catenin 及MMP-7、c-Myc mRNA和蛋白表达水平。结果：ALT能够抑制骨肉瘤143B 细胞的增殖、迁移和侵袭,同时促进细胞凋亡（P<0.05 或P<0.01）。经8、10 μmol/L ALT处理后,143B细胞中PARP mRNA和蛋白水平显著上调,c-caspase-3 和c-PARP 蛋白水平表达增加（均P<0.05）;E-cadherin mRNA 和蛋白水平表达上调、N-cadherin mRNA 和蛋白表达水平下调,同时TCF/LEF 转录活性明显下降（P<0.05 或P<0.01）,β-catenin、MMP-7 和c-Myc mRNA和蛋白表达水平显著下调（P<0.05 或P<0.01）。结论：ALT通过抑制Wnt/β-catenin 信号通路的活性从而抑制人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡。     

云南白药对骨折愈合过程中血管内皮生长因子表达的影响

目的观察云南白药主要成分对兔骨折愈合过程中血管内皮生长因子表达的影响.方法将新西兰大白兔100只,随机分为五组,每组20只,手术制作所有兔桡骨中段骨干缺损模型,分别在左侧缺损间植入含有白药1～6号粉剂的医用明胶海绵,作为实验组.右侧同样手术处理,只是骨缺损中植入不含白药粉的医用明胶海绵,作为对照组,分别为白药1号、2号、3号、4号及6号组;观察不同时期1～6号白药原药成分对骨痂组织血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响.结果在骨折愈合的早期及中期,1～6号白药原药成分增加骨痂中VEGF基因表达的表达水平;各组以术后2周VEGF表达水平最高,术后12周表达水平最低.结论白药原药成分在骨折愈合的早、中期,具有提高骨折后骨痂内VEGF表达的作用,从而加速断端微血管新生重建,改善骨折肢体的血液循环,促进骨折愈合.     

经后方及外侧小切口微创全髋关节置换入路的比较研究

目的:比较经后方及外侧微创全髋关节置换人路的临床疗效.方法:由同一组手术医生行外侧入路微创全髋关节置换23例,后方入路微创全髋关节置换36例.比较两种不同入路的切口长度、手术时间、出血量、术后并发症、术后12周Harris评分及假体的位置、血沉及C-反应蛋白.结果:所有病例均获得随访,出血量、术后并发症、术后12周Harris评分及假体的位置、术后疼痛评分经统计学处理无显著性差异(P≥0.05).在外侧入路血沉及C-反应蛋白较高(P≤0.05).结论:后方及外侧微创全髋关节入路均体现了满意的临床疗效,后侧入路创伤较小.     

GDNF基因活化的细胞外基质对大鼠坐骨神经损伤后神经元的保护作用

目的:探讨GDNF基因活化的细胞外基质对神经元的保护作用.方法:通过化学萃取获得大鼠坐骨神经细胞外基质,复合上编码GDNF的质粒DNA,构建成基因活化的细胞外基质支架.60只成年Wistar大鼠按随机数字法分为3组:A组(n=20)GDNF基因活化的细胞外基质桥接组,B组(n=20)ECM桥接组,C组(n=20)自体神经桥接组,术后3天、1周、4周、12周时用RT-PCR、激光共聚焦显微镜等形态学方法来评价神经元保护作用.结果:GDNF基因活化的细胞外基质能作为局部的基因缓释系统来释放GDNF,在脊髓中高效表达12周以上.GDNF mRNA的表达和Nissl染色阳性细胞的数量在脊髓中明显增加,而iNOS表达明显下降.神经元存活率明显优于对照组(78.04%±3.50%vs 56.09%±1.89%).结论:GDNF基因活化的细胞外基质可以促进GDNF mRNA在脊髓中表达,增加前角运动神经元的存活率,其机制可能与iNOS受抑制有关.     

过氧化氢-乙醚法制备脱蛋白骨的理化性质研究

目的探讨过氧化氢-乙醚法制备脱蛋白骨（deproteinized bone，DPB）的理化性质。方法采用过氧化氢-乙醚法将大白兔干骺端松质骨脱脂、脱蛋白制作成生物衍生骨材料——DPB。倒置相差显微镜、体视学显微镜、扫描电子显微镜观察DPB材料外表面、孔隙内表面结构、孔径大小和孔间交通情况。pH计检测仪检测DPB材料的培养液pH值。光学显微镜观察微生物生长情况。微量凯氏定氮法检测DPB材料中蛋白质含量。结果倒置相差显微镜、体视学显微镜、扫描电子显微镜观察结果显示，DPB材料具有原骨组织的三维多孔一网架结构系统。计算机图像分析系统结果显示，孔隙率为（83．26±5．35）％；孔径最大径为（315．11±17．51）μm，最小径为（109．37±11．33）μm。浸泡DPB材料组培养液pH为7．383±0．015，空白对照组培养液pH为7．380±0．020。光学显微镜下观察结果显示，DPB材料的培养液未发现细菌或霉菌生长。DPB蛋白质含量为（20．4±1.2）％。结论由松质骨来源制作的DPB是一种较理想的组织工程骨生物支架材料。