用TRAP PCR ELISA及TRAP PCR PAGE测定鼻咽癌端粒酶活性的比较

目的：比较ＴＲＡＰ ＰＣＲ ＥＬＩＳＡ及ＴＲＡＰ ＰＣＲ ＰＡＧＥ检测鼻咽癌端 酶的活性。方法：分别采用ＴＲＡＰ ＰＣＲ ＥＬＩＳＡ及ＴＲＡＰ ＰＣＲ ＰＡＧＥ检测了３８例鼻咽癌（ＮＰＣ）、１５例癌旁组织、１９例慢性鼻咽炎和鼻咽癌ＨＮＥ１细胞株、其它２种癌细胞株及３种正常细胞的端粒酶表达,并探讨了在不同数量的ＨＮＥ１细胞中端粒酶表达的灵敏度及ＨＮＥ１细胞株、５例ＮＰＣ活检组织经热灭活后端粒酶检测的     

胰蛋白酶消化提取DNA

胰蛋白酶消化提取ＤＮＡ贺明伟，张白帆，郑艳珍，王光平，唐发清哺乳动物细胞ＤＮＡ的提取，一般是在含乙二胺四乙酸钠（ＥＤＴＡ）和十二烷基磺酸钠（ＳＤＳ）的反应缓冲液中，利用蛋白酶Ｋ消化降解蛋白质，随后用苯酚，氯仿相继处理来获得的［１］。上述试剂中蛋白酶Ｋ...     

鼻咽癌组织端粒酶各组分基因表达的研究

目的：探讨端粒酶各组分基因在鼻咽癌（nasopharynegal carcinoma,NPC)组织及鼻咽慢性炎症粘膜（chronic inflammation of nasopharyngeal epithelium,CINE)组织中的表达情况。方法：利用RT-PCR方法检测鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎症粘膜组织端粒酶各组分基因（hTR、TP1mRNA和hRNA)的表达情况。方法：利用RT-PCR方法检测鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎症粘膜组织端粒酶各组分基因（hTR、TP1mRNA和hTERTmRNA)的表达。结果：43例NPC组织中,hTR、TP1mRNA和hTERTmRNA表达阳性率分别为90.7%、88.4%和16例CINE组织中,hTR、TP1 RNA和hTERTmRNAmRNA表达阳性率为87.5%、87.5%和0%;仅hTERTmRNA在鼻咽癌组织中的表达显著高于鼻咽慢性炎症粘膜组织中的表达,而hTR或TP1mRNA在鼻咽癌组织中的表达和鼻咽慢性炎症粘膜组织中的表达。结论：hTERTmRNA可能在端粒酶活性调节中起重工作用;hTERTmRNA的表达水平,可作为鼻咽癌诊断指标之一。     

提取高分子量DNA的新方法

提取高分子量ＤＮＡ的新方法贺明伟，张白帆，郑艳珍，王光平（湖南医科大学湘雅医院中心实验室长沙４１０００８湖南医科大学法医学教研室）我们利用国产胰蛋白酶取代价格昂贵的蛋蛋白酶Ｋ提取高分子量ＤＮＡ，获得了成功。方法如下：取胰蛋白酶ｌｇ溶于１００ｍｌ生理盐...     

血清叶酸维生素B12含量测定对某些血液病贫血的观察及临床意义

为了解不同类型贫血病人血清叶酸、维生素B12 的变化 ,用放射免疫分析法测定了 43例不同类型的血液病贫血患者的血清叶酸和维生素B12 含量 ,结果表明缺铁性贫血血清叶酸和维生素B12 不减少 ;骨髓增生异常综合征随病程进展血清叶酸值呈递减变化 ,白血病活动期患者的血清叶酸含量明显低于正常 ,恶性血液病贫血患者治疗前血清维生素B12 含量可较正常增高 ,但增高的程度可因血液病类型的不同而异。因此 ,测定血清叶酸和维生素B12值对血液病贫血的鉴别诊断及某些血液病的病情演变和预后判断有一定的意义     

TRAP聚合酶链反应-酶免疫间接 定量法测定鼻咽癌中端粒酶活性

 目的　探讨TRAP PCR-ELISA间接定 量法测定鼻咽癌(NPC)中端粒酶(TLMA)的表达。方法　采用TRAP PCR ELISA 法测定了18例NPC组织、4例癌旁组织、4例慢性鼻咽炎组织及22个NPC HNE1细胞株、5例白 血病骨髓细胞及2例正常骨髓细胞、6个血管平滑肌细胞株中TLMA的表达。并测定了不同浓度 HNE1细胞株及NPC灭活标本中的TLMA活性。结果　NPC活检组织、癌旁组织 有较高的TLMA表达,而慢性鼻咽炎组织为阴性(P＜0.01)。NPC HNE1细胞株、白血 病骨髓细胞中亦有较高的TLMA表达。在102HNE1细胞株中亦能检测到TLMA活性。而2种正 常对照细胞为阴性。灭活后NPC标本中TLMA全部为阴性。结论　无论在NPC体 内、体外试验中均有较高的TLMA表达。该定量法特异性好、灵敏度可达102细胞,具有易 出结果、可靠、准确、能够反映不同程度的TLMA活性状态及与PAGE电泳图有较好的一致性等 优点。     

IL-12对慢性丙型肝炎病毒感染者淋巴细胞增殖的影响

目的：观察重组人白细胞介素１２（ｒｈＩＬ－１２）对慢性丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者淋巴细胞增殖的影响。方法：外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）分别与植物血浆凝素（ＰＨＡＳ）,ＨＣＶ抗的ｅ２２,ｅ１００－３、ｒｈＩＬ－１２和抗ＩＬ－１２抗体孵育５天后,加入胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）,然后收集细胞于液闪仪测定每分钟脉冲数（ｃｐｍ）。结果：不论是健康对照者（Ｐ〈０．０２５）,抑或慢性ＨＣＶ感染者（Ｐ〈０．     

hTR反义寡核苷酸诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的：探讨人端粒酶反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞凋亡的作用。方法：脂质体介导反义寡核苷酸转染鼻咽癌ＨＮＥ１细胞株,采用吖啶橙荧光染色计数,透射电镜观察ＨＮＥ１细胞凋亡改变。结果：反义寡核苷酸转染ＨＮＥ１细胞４８小时后,ＨＮＥ１细胞形态出现改变,细胞娄减少。吖啶橙荧光染色计数及透射电镜分别发现,反义寡核苷酸组较对照组有更多的调亡细胞及更高的调亡指数。结论：针对端粒酶ＲＮＡ的反义寡核苷酸能有效地通过抑制端粒     

维甲酸对肺鳞癌细胞株增殖分化的影响

用 5× 10 -6mol·L-1浓度的全反式维甲酸 (ATRA)作用于人肺鳞癌细胞株 (TUL细胞 ) ,检测细胞生长曲线 ;用MTT法检测细胞生长抑制率 ;用3H TdR掺入法测细胞DNA合成情况 ;透射电镜下观察细胞超微结构改变 ;并观察裸鼠成瘤情况。结果显示 :与对照组比较 ,经ATRA作用后 ,TUL细胞生长速度减慢 ,细胞生长曲线平坦 ,细胞生长抑制率为 42 3 % ,3H TdR掺入率明显减低 (P <0 .0 1) ,细胞DNA合成减少 ,透射电镜观察发现 ,TUL细胞呈良性分化 ,TUL细胞致瘤性明显降低。提示ATRA能抑制TUL细胞增殖 ,诱导分化 ,降低其致瘤性     

补肾醒脑解毒方对单纯疱疹病毒感染神经元的保护 …

单纯疱疹病毒(ＨＳＶ)是散发性病毒性脑炎的主要病原。近10年来由于抗病毒药无环乌苷(Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ,ＡＣＶ)的应用,ＨＳＶ脑炎的临床治疗有了很大进展,但存活病人仍约有半数遗留有不同程度的神经功能缺陷症状。并且,实验室和临床都已发现ＨＳＶ易对ＡＣＶ产生耐药。为从中草药中探寻治疗ＨＳＶ脑炎尤其是ＨＳＶ脑炎后遗症的药物,我们根据中医学传统理论与自己的临床经验,选用补肾醒脑解毒中药复方在体外对ＨＳＶ感染神经元细胞进行了实验研究,。1　材料和方法11　大鼠海马神经元培养　按文献方法取怀孕18ｄ的ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅ…