磷酸化修饰增强Sufu对髓母细胞瘤的抑癌作用

目的：探讨在髓母细胞瘤（medulloblastoma,MB）中磷酸化修饰对Suppressor of fused（Sufu）抑癌活性的调节和潜在机制。方法：免疫组化分析MB组织芯片中Sufu的表达及磷酸化水平。在MB细胞系DAOY中转染野生型Sufu或其磷酸化位点突变质粒,分别通过细胞免疫化学染色、Western blot、CCK8、EdU标记、细胞流式检测等分析Sufu的核浆分布以及转染细胞的增殖、凋亡等指标,通过荧光素酶报告基因实验检测转染细胞Hedgehog（Hh）信号通路下游胶质瘤相关癌基因同源物（hlioma?associated oncogene homologue,Gli）的转录活性,Western blot检测鸟氨酸脱羧酶（ornithine decarboxylase,ODC1）的表达水平。结果：Sufu在MB组织的表达明显高于正常小脑,并呈现磷酸化的修饰状态。磷酸化Sufu主要聚集在细胞核。Sufu能抑制DAOY细胞的增殖及克隆形成,促进细胞凋亡。非磷酸化的Sufu突变体抑癌作用明显减弱。已知在Hh通路下游,Gli介导的转录活化以及ODC1介导的多胺合成增加均可以促进MB细胞的生长。磷酸化Sufu抑制Gli介导的转录活化,非磷酸化Sufu对Gli的抑制作用减弱,并促进ODC1的表达。结论：Sufu发生磷酸化修饰后,对MB的抑制作用增强,其机制可能与抑制Hh信号下游的Gli转导活性和细胞的多胺代谢有关。     

人脐带间充质干细胞外泌体的分离鉴定及其溶血性能研究

目的：分离并鉴定人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSC）分泌的外泌体,研究其对人血的溶血性能。方法：通过超速离心法从脐带干细胞培养上清中分离外泌体,采用蛋白免疫印迹法、透射电镜和纳米颗粒跟踪分析法进行鉴定;制备人红细胞悬液,加入不同浓度外泌体,进行溶血试验,用试管法观察并用紫外分光光度法测定计算溶血度。结果：分离获得的外泌体特异富集蛋白CD9、CD81、Alix,不含有高尔基体蛋白Gm130;透射电镜下可见其呈杯盘状结构,粒径直径为40~120 nm;脐带干细胞外泌体对人血的溶血率小于5%。结论：HUCMSC分泌的外泌体具有外泌体的经典结构及典型特征,不引起人血溶血反应,为未来脐带干细胞外泌体作为载体进行药物递送提供了实验依据。     

大鼠神经元型一氧化氮合酶基因慢病毒载体的构建及功能测定

目的：构建编码大鼠神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,nNOS）全长基因的慢病毒载体,并检测其表达效率和催化活性功能。方法：采用RT?PCR提取nNOS的cDNA,同时改造真核表达载体pCDH?GFP。鉴定nNOS的cDNA碱基序列正确后,将目的基因克隆入慢病毒载体pCDH?GFP,得重组载体pCDH?GFP/nNOS,采用Lipofectamine 2000将其及慢病毒包装辅助质粒转染293T细胞,超速离心纯化后,感染神经干细胞和海马齿状回神经元进行感染能力鉴定,并检测nNOS蛋白表达和催化功能。结果：成功构建编码nNOS全长cDNA,测序证明重组慢病毒载体pCDH?GFP/nNOS构建成功。包装慢病毒颗粒LV?nNOS?GFP可以感染离体神经干细胞和在体神经元。Western blot检测证明nNOS蛋白成功表达。一氧化氮浓度检测表明表达的nNOS具有催化活性。结论：慢病毒载体LV?nNOS?GFP构建成功,可以表达功能性全长nNOS蛋白。     

全人源双特异性c⁃Met/PD⁃L1 scFv⁃Fc融合蛋白的优化、制备及生物学特性鉴定

目的：通过优化设计、构建c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白,探究重轻链不同组合形式对c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白与肿瘤抗原结合的亲和性和特异性的影响。方法：使用生物信息学分析、基因工程抗体技术设计、优化及制备重轻链不同组合的双特异性c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白CP1、CP2、PC1、PC2;生物分子相互作用分析仪BLItz分析融合蛋白对重组c?Met蛋白和PD?L1蛋白的亲和力,ELISA法分析其抗原结合特异性。结果：成功制备双特异性c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白,融合蛋白CP1与重组c?Met蛋白和PD?L1蛋白的亲和力和抗原结合特异性均优于CP2、PC1和PC2。结论：重轻链不同组合形式会影响c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白与c?Met和PD?L1蛋白的亲和力和抗原结合的特异性,融合蛋白CP1的亲和力和抗原结合的特异性最高,其对应的重轻链组合形式可用于c?Met/PD?L1 CAR表达载体的构建。     

HPLC法测定恩格列净有关物质的方法学验证

目的：建立恩格列净原料药纯度及所含杂质的测定方法。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法,用Waters symmetry C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以0.01%（V/V）三氟乙酸溶液为流动相A,乙腈为流动相B,线性梯度洗脱：0~10 min,流动相B 32%;10~50 min,流动相B 32%~95%;检测波长225 nm,流速1.0 mL/min,柱温45℃。结果：恩格列净与各杂质的分离度均>1.5,检出限均<9 ng/mL, 线性范围满足定量分析要求;重复性试验相对标准差（RSD）均<5%;供试品溶液和对照溶液在8 h内稳定性良好;各杂质的回收率为88.6%~106.1%,RSD均<10%。结论：本研究建立的方法检测灵敏度高,精密度好,可作为恩格列净原料药有关物质的控制方法。     

烟碱对帕金森病模型小鼠多巴胺释放的影响及机制探讨

目的：研究烟碱对帕金森病（Parkinson’s disease,PD）模型小鼠不同脑区多巴胺（dopamine,DA）的影响及其机制。方法:应用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP）制备PD小鼠模型,应用爬杆实验检测小鼠运动功能,应用酪氨酸羟化酶免疫组化观察小鼠中脑黑质致密部（substantia nigra pars compacta, SNpc）多巴胺能神经元数目,应用高效液相色谱法检测小鼠不同脑区（纹状体、海马、皮质）DA的含量,应用蛋白质免疫印迹检测小鼠纹状体多巴胺转运体（dopamine transporter,DAT）的变化。结果：①烟碱可显著改善MPTP导致的野生型小鼠运动功能障碍;②烟碱可显著改善MPTP诱导的野生型小鼠中脑SNpc多巴胺能神经元的丢失;③烟碱可显著减轻MPTP所致的野生型小鼠纹状体DA含量的减少,烟碱对α7-烟碱型乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs）敲除型（knockout,KO）小鼠MPTP模型中纹状体DA含量的减少无明显恢复作用,烟碱对野生型小鼠或α7-nAChRs KO小鼠MPTP模型中海马和皮质中的DA含量无明显影响。④烟碱可显著增加野生型小鼠MPTP模型中纹状体DAT的含量,烟碱对α7-nAChRs KO小鼠MPTP模型中的纹状体DAT的减少无逆转作用。结论：烟碱可以激活α7-nAChRs抑制PD模型小鼠SNpc区多巴胺能神经元的死亡,提高纹状体DAT水平;促进纹状体DA含量增加,从而在PD模型小鼠中发挥神经保护作用。     

34例Turner综合征患儿身高落后的影响因素分析

目的 分析Turner综合征（TS）患儿身高标准差（SDS）落后情况及影响因素。方法 回顾性分析2009年2月至2014年8月因身材矮小或生长缓慢至南京医科大学附属儿童医院内分泌科就诊的34例TS患儿的临床资料。结果 34例TS患儿,1例身高在1.1 SDS,余33例身高均在-2 SDS以下。回归分析显示,身高SDS与年龄负相关（r=-0.452,P<0.05）,与体重SDS正相关（r=0.078,P<0.05）,与骨龄、体质量指数、生长激素峰值、胰岛素样生长因子-1、染色体核型、雌激素、黄体生成素、促卵泡刺激素无相关性（P>0.05）;按染色体核型将患儿分为45,X和嵌合体组,身高SDS均值比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 身材矮小是TS最常见的临床表现,身高落后与年龄和体质量有关,与染色体核型无关。     

南京市普通高校大学生健康知识与理念现状分析

目的 了解南京市普通高校大学生健康知识与理念的知晓情况及其影响因素,为制定南京市大学生健康素养促进策略提供科学依据.方法 对南京市普通高校的在校大学生采用方便抽样的方法,共抽取542名大学生进行健康素养问卷调查,回收问卷536份,回收率为98.89%.采用SPSS 20.0进行统计学描述与χ2检验.结果 ①南京市普通高校大学生健康知识和理念的知晓率为39.37%;②男、女生对健康知识和理念的知晓率都偏低,两者的差异无统计学意义(P>0.05);③父母亲的文化程度越高,其子女健康素养知识和理念的知晓率也越高.结论 南京市普通高校大学生对健康基本知识和理念的知晓率偏低,应有针对性地制定健康教育和健康促进政策,以提高大学生的整体健康素养.     

GCN5调控sublytic C5b⁃9诱导大鼠肾小球系膜细胞表达Cyclin D1及致SOX9的乙酰化修饰

目的：探讨GCN5调控sublytic C5b?9刺激大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）诱导Cyclin D1基因表达以及GCN5乙酰化修饰SOX9转录因子的作用。方法：先用Western blot检测Thy?1肾炎（Thy?1 nephritis,Thy?1N）大鼠的肾组织和sublytic C5b?9 刺激的GMC中GCN5、SOX9和Cyclin D1的表达。然后分别将pIRES2?GCN5过表达和shGCN5小干扰质粒或将这些质粒与Cyclin D1启动子质粒行不同组合转染GMC,用荧光素酶报告基因实验和real?time PCR、Western blot检测过表达或沉默GCN5后对Cyclin D1表达的影响。同时用免疫共沉淀（Co?IP）和Western blot检测sublytic C5b?9刺激或分别转染GCN5过表达和酶活性突变质粒（ΔGCN5）的GMC中SOX9的乙酰化修饰。结果：Thy?1N大鼠肾组织和sublytic C5b?9刺激的GMC中GCN5、SOX9、Cyclin D1蛋白水平均明显上调,而过表达GCN5基因能上调Cyclin D1的启动子活性、mRNA和蛋白表达;敲低GCN5表达则得到了相反的结果。此外,sublytic C5b?9刺激和过表达GCN5基因促进了SOX9的乙酰化修饰,而沉默GCN5后则降低了SOX9的乙酰化水平。结论：GCN5可上调GMC中Cyclin D1的表达,并促进SOX9的乙酰化修饰。     

南京地区HIV/AIDS患者一线抗病毒治疗失败相关因素分析

目的: 分析南京地区人类免疫缺陷病毒/获得性免疫缺陷综合征（HIV/AIDS）患者一线抗病毒治疗失败的危险因素,提前预警以降低一线治疗的失败率。方法：回顾性分析2016年1月至2019年9月在南京市第二医院感染科门诊启动一线抗病毒治疗并随访至2020年3月的HIV/AIDS患者基线人口学和随访资料,在此期间有耐药基因检测证实一线抗HIV治疗失败、更换含有洛匹那韦/利托那韦（LPV/r）的免费二线方案患者为治疗失败组,以同期病毒持续抑制患者作为对照,通过 Logistic 回归分析治疗失败的相关危险因素。结果：纳入的1 739例HIV/AIDS患者中有44例（2.5%）因病毒学失败更换含LPV/r的二线治疗方案。基线CD4⁺ T淋巴细胞计数<200个/μL (OR=13.105,95% CI：5.025~34.176)和基线病毒载量≥1×10⁵ 拷贝/mL (OR=2.491,95% CI：1.210~5.128)是一线治疗失败的危险因素;一线治疗失败与性别、年龄、婚姻状况、体重指数、传播途径、从确诊到治疗间隔时长、是否有基本医疗保险无关。结论：一线治疗失败的发生与低基线CD4⁺ T淋巴细胞计数和高基线病毒载量有关,具有危险因素的患者需重点关注。