PPD对TH1细胞的在体调节及对卵蛋白致敏小鼠气道炎症的影响

目的：探索结核菌素纯蛋白衍生物（purified protein derivative，PPD）对卵蛋白（ovalbumin，OVA）致敏小鼠肺组织TH1细胞的在体调节和对气道炎症的。方法：取37只Balb/c小鼠，雌雄兼有，6-8周。OVA雾化连续10d，每次雾化20min，复制OVA致敏模型。观察记录小鼠耗氧量、肺组织淋巴细胞反应和支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中炎性细胞变化。结果：OVA致敏组小鼠肺组织CD4^ T淋巴细胞增加，CD8^ T淋巴细胞无明显变化，主要表现为γ-IFN阴性CD4^ T淋巴细胞的增加，γ-IFN^ /CD4比较降低。PPD治疗后，肺组织CD4^ 淋巴细胞降低，但γ-IFN^ 细胞明显增加。OVA致敏小鼠消耗氧增加，PPD治疗后降低。结论：使用本实验体系PPD可上调TH1细胞并减轻实验性哮喘的气道反应。     

辛伐他汀对内皮素-1诱导氧活性物质介导心肌细胞肥大的抑制作用

目的　探讨辛伐他汀对内皮素 1 (endothelin 1 ,ET 1 )诱导的氧活性物质 (reactiveoxygenspecies,ROS)产生和心肌细胞肥大的抑制作用。方法　用原代培养的新生大鼠心肌细胞进行实验。细胞内荧光信号用荧光倒置显微镜检测。细胞内ROS水平用ROS敏感的荧光探针 2 ,7 dichlorofluo rescindictate(DCF DA)来反应 ,细胞内RNA含量用RNA敏感的荧光探针碘化丙啶 (propidiumiodide ,PI)来测定。用考马斯亮蓝法测定细胞内总蛋白含量。用图像分析软件 (Leica图像分析软件 )测细胞表面积。结果　①ET 1浓度依赖性地使心肌细胞内DCF DA的荧光信号增加和心肌细胞肥大。过氧化氢酶 (catalase ,CAT ,0 2U·L- 1 )抑制ET 1 (1× 1 0 - 8mol·L- 1 )诱导的心肌细胞内DCF DA的荧光信号的增加和心肌细胞肥大。②辛伐他汀对ET 1诱导的心肌细胞内DCF DA的荧光信号增强和心肌细胞肥大产生剂量依赖性的抑制作用。结论　ET 1能够使心肌细胞产生ROS和ROS依赖的心肌细胞肥大 ,辛伐他汀能抑制ET 1诱导的ROS依赖的心肌细胞肥大。     

蝎毒多肽对辐射损伤小鼠骨髓造血干细胞及祖细胞的作用

目的 探讨不同蝎毒多肽(scorpion venom peptide,SVP)组分对辐射后机体造血干细胞及祖细胞恢复的作用.方法 6.0 Gy X射线一次性全身照射,制作辐射损伤小鼠模型.内源性脾结节法观察照射后第10天脾集落形成单位(CFU-S)的变化.用甲基纤维素半固体培养基培养骨髓混合集落生成单位(CFU-Mix),观察体内外给药方法及照射后不同时间对CFU-Mix生成的影响.结果 (1)体内实验:SVPⅣ组分处理后的CFU-S数明显高于照射对照组(P＜0.05);SVPV组分CFU-S数量与照射对照组差异无统计学意义.照射后各SVP组CFU-Mix的数量均高于照射对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)体外实验:与照射对照组相比,体外分别单独加入SVPⅣ、Ⅴ组分以及细胞因子(IL-6和SCF)均能够促进CFU-Mix的增殖;而SVPⅣ、Ⅴ组分分别与细胞因子联合应用对CFU-Mix生成的促进作用更为明显,其中Ⅳ组分效果更强,与照射对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 SVP具有保护辐射损伤小鼠造血干细胞及祖细胞,加速其增殖能力恢复的作用.     

蝎毒和蝎毒多肽对家兔血小板聚集的影响

目的观察蝎毒多肽(PSV)和蝎毒(SV)对家兔血小板聚集的影响。方法麻醉家兔,颈动脉取血制备富含血小板血浆,分别加入PSV和SV,用CHRON0-IDG 540VS双通道血小板聚集仪测定二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集作用。结果PSV对血小板聚集具有明显的抑制作用,且呈明显的量效关系,当PSV的浓度在10．0～15．0mg／ml时,血小板聚集受抑制最为显著;SV对血小板聚集受其剂量及作用时间影响很大,但总的趋势为较低浓度时促进血小板聚集,较高浓度时则抑制血小板聚集。结论PSV对血小板聚集起抑制作用,且呈明显的量效关系;SV对血小板聚集的影响在高浓度和低浓度时产生的效应相反,推测由于SV成分较为复杂,各成分之间互相作用机制还需深入研究。     

蛋白酶体抑制剂MG132联合3种化疗药物增强对人乳腺癌细胞的抑制作用

目的：观察蛋白酶体抑制剂MG132联合使用3种化疗药物对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用。方法：采用Alamar Blue^TM方法检测细胞的生长抑制效应。实验分4组：①化疗药物处理组（紫杉醇、紫苹素或阿霉素的不同浓度）;②MG132组（1．25、2．5、5、10μmoL／L）;③MG132联合3种化疗药物处理组;④溶剂对照组。MCF-7细胞分别使用上述药物处理40h后,加入Alamar Blue^TM孵育8h,测定OD值并计算细胞相对活力。结果：①MG1325μLmol／L及其以下浓度对MCF－7没有抑制效应;②3种化疗药物的不同浓度处理细胞后,细胞活力随药物的浓度升高明显下降,具有明显的剂量依赖效应;③选择MG1325μmol／L分别与3种化疗药物联合处理后,MCF－7细胞的活力明显下降,紫杉醇为19．10％、紫苹素19．13％,阿霉素27．17％,与化疗药物处理组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：蛋白酶体抑制剂MG132明显增强紫杉醇、紫草素和阿霉素对MCF-7细胞的抑制作用。     

人骨髓间充质干细胞体外长期传代培养及恶性转化趋势实验研究

目的探讨人骨髓间充质干细胞体外长期传代培养、扩增及其生物学特性,观察其恶性转化趋势的可能性。方法采用密度梯度离心差速贴壁法对人骨髓来源的间充质干细胞进行分离纯化,并进行体外长期传代,观察细胞形态及生长方式;鉴定细胞分化能力;相关癌标志P53、Ki67的表达与成瘤性检测。结果经过长期体外培养的人间充质干细胞,至36代时,细胞逐渐老化;成骨分化诱导能力丧失;相关癌标志表达阴性;无成瘤性。结论人骨髓间充质干细胞在体外可以有限传代,无显著恶性转化趋势。     

眼镜蛇毒组分抑制人神经胶质瘤U251细胞增殖及其机制研究

目的: 探讨眼镜蛇毒组分对人神经胶质瘤U251细胞增殖抑制作用及其机制。方法: 采用MTT法比较各种蛇毒组分对U251细胞增殖的抑制效果并筛选出高效组分,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,激光共聚焦显微镜和电子显微镜观察蛇毒组分作用U251细胞后的形态学变化。结果: 11种眼镜蛇毒组分对体外培养的神经胶质瘤细胞U251均有不同程度的生长抑制作用,其中组分KD II-3对肿瘤细f胞的抑制作用呈现剂量和时间依赖性。不同浓度(1、3.75、7.5、15 mg/L)KD II-3作用细胞24 h后,其凋亡率分别为13.3%、17.7%、20.0%、22.4%,且可见到"亚G₁期"峰。KD II-3还将U251的细胞周期阻滞在G₀/G₁期。7.5 mg/L KD Ⅱ-3作用U251细胞24h后激光共聚焦显微镜观察显示细胞膜皱缩,染色质浓缩、碎裂,透射电镜观察显示细胞核固缩,染色质凝聚。结论: 眼镜蛇毒组分KD II-3可抑制神经胶质瘤细胞U251的增殖,促进细胞凋亡。     

天麻对大鼠肾缺血再灌注损伤中SOD、MDA作用的研究

目的　探讨天麻在大鼠肾缺血再灌注损伤中的抗氧化作用 .方法　通过建立大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型 ,测定天麻对肾缺血再灌注后肾组织SOD活力与MDA含量的变化 .结果　与对照组相比 ,使用天麻后 ,在再灌注 6h、12h和 2 4h后肾组织SOD活力明显升高 (p值分别 <0 .0 1,0 .0 5 ,0 .0 1) ,MDA含量明显降低 (p值分别 <0 .0 5 ,0 .0 1,0 .0 5 ) .结论　天麻在大鼠肾缺血再灌注损伤模型中 ,有抗自由基损伤和减轻脂质过氧化的作用 .     

漆树酸联合紫杉醇对肝癌细胞生长抑制和凋亡的影响

目的:评价漆树酸和紫杉醇联合用药对人肝癌HepG2细胞是否具有协同作用.方法:人肝癌HepG2细胞经漆树酸和(或)紫杉醇处理后,MTS法检测细胞增殖情况,流式细胞仪技术检测细胞凋亡,Western blot方法检测Bax、Bcl-2及Caspase-3、8、9和PARP凋亡相关蛋白的变化.结果:漆树酸和紫杉醇联合应用能够明显增强对HepG2细胞的增殖抑制,与单独用药组相比具有明显的协同作用.漆树酸联合紫杉醇可以明显诱导HepG2细胞凋亡.两药联合作用可以诱导Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2比率增加,引起Caspase-3、8、9的活化,PARP的切割.结论:漆树酸和紫杉醇联合用药具有协同作用,明显增强抑制HepG2细胞的增殖和诱导细胞凋亡,其作用机制可能与Caspase系统活化相关.     

大鼠骨髓间质干细胞用肾上腺素类激素诱导为神经细胞的研究

目的:体外诱导大鼠骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经细胞。方法:SD大鼠股骨骨髓细胞体外扩增。用肾上腺素、去甲肾上腺素和异丙肾上腺素注射液分别加入无血清L-DMEM诱导MSC分化为神经细胞。免疫细胞化学鉴定有神经元烯醇化酶(NSE)、神经干细胞标志物巢蛋白(nestin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。结果:大鼠骨髓间质干细胞在体外扩增5-22代,对照组不加任何诱导剂,有53%的神经样细胞。加入肾上腺素、去甲肾上腺素和异丙肾上腺素诱导1-5h,约70%MSC形态转变为典型的神经样细胞。免疫细胞化学显示诱导出的神经样细胞NSE、nestin、GFAP表达阳性。继续培养5d后对照组神经样细胞逐渐凋亡。肾上腺素类各组虽存活6d,但细胞正常形态改变,部分细胞死亡漂浮。一瓶MSC在正常培养至第7代时,自发出现约50%的神经细胞,传至第13代,有约60%的神经细胞(66.5%±6.4%)。结论:骨髓本身可能存在着神经干细胞。大鼠骨髓间质干细胞用肾上腺素类诱导可分化为多种形态的神经细胞。