表达hCGβ的重组乳酸杆菌经口接种小鼠产生抗hCGβ体液免疫应答

目的：用表达hCGβ的重组乳酸杆菌活疫苗经口接种不同品系小鼠产生抗hCGβ免疫应答。方法：用10^8、10^9、10^10个重组乳酸杆菌Lb．hCGβ灌服6～8周龄雌性BALB／c和C57BL／6小鼠。3周后用相同剂量加强免疫1次。间接ELISA检测初次免疫后2～8周血清和阴道灌洗液抗hCGβIsG和IgA抗体滴度。流式细胞仪分析B和T细胞的增殖情况，ELISpot计数抗hCGβIsG和IsA抗体分泌细胞克隆数。结果：不同品系小鼠经口腔接种10^9、10^10Lb．hCGβ可诱导相近的免疫应答；而10。诱导的抗体滴度较低。在加强免疫后，10^9和10^10Lb．hCGβ诱导的抗血清结合hCGβ抗原的能力〉100ng／n11。Lb．hCGβ口腔接种后，BALB／c小鼠子宫和阴道的B细胞增殖；C57BL／6小鼠子宫及阴道的抗体分泌细胞克隆数较脾脏明显增多（P〈0．05）。结论：重组乳酸杆菌活疫苗Lb．hCGβ可经口接种诱导有效的抗hCGβ免疫应答，产生的应答强度与免疫剂量呈正相关。     

人早孕蜕膜组织及蜕膜基质细胞趋化因子受体及配体的转录特征

妊娠后，蜕膜化的子宫内膜（蜕膜，decidua）和发育的滋养细胞共同构成了母．胎界面。同种异体移植物的胎儿，能够在母体内存活直至足月分娩，这其中涉及母．胎界面极为复杂的免疫调节机制。蜕膜主要由蜕膜基质细胞（decidual stromal cell，DSC）（75％）和淋巴细胞构成，能分泌多种细胞因子，具有广泛的生物学功能，是母．胎界面来自母体的重要成分。     

NOEY2基因对人乳腺癌细胞体外生长的影响

目的：构建NOEY2基因真核表达载体。研究其对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231生长的影响。方法：RT-PCR获得目的基因编码区,经T/A策略克隆后,再亚克隆至pcDNA3,获得真核表达载体。用lipofectAMINE辅助转染MDA-MB-231细胞,经G418长期筛选而获得稳定转染细胞克隆。Western印迹检测NOEY2蛋白水平的表达。通过记录生长曲线和流式细胞分析术观察转染细胞的生长和细胞周期变化。结果：NOEY2真核表达载体pcDNA3/NOEY2-CR构建成功。被稳定转染该载体的MDA-MB-231细胞有明显NOEY2蛋白表达,而对照细胞无表达。NOEY2转染细胞的生长抑制率可达46.3%,在细胞周期改变上可见明显的S期分数和G2/M期分数下降,而G0/G1期比例上升。结论：NOEY2基因转染对体外培养的人乳腺癌细胞生长具有一定的抑制作用。支持其人微言轻一个抑癌基因的推测,本研究为进一步探索NOEY2作为治疗基因的价值创造了条件。     

超低温冷冻对人精子糖被的影响

目的研究超低温冷冻对人精子糖被的损伤。方法利用凝集素芯片比较精子冷冻前、后的凝集素结合谱。结果通过比较冷冻保护剂和冷冻方法对精子复苏率的影响,确定了Cryo Sperm TM以及一步熏蒸法为最佳精子冷冻试剂和方法;通过凝集素芯片比较精子冷冻前、后的凝集素结合谱观察到在91种凝集素中,有33种发生了显著变化,其中,冷冻后显著下调的有9种,显著上调的有24种,并且显著下调的MAA及显著上调的PSA、ABA和AIA经流式验证,结果与芯片一致。结论精子糖被经过冷冻之后发生了显著变化,对精子起保护作用的唾液酸大量丢失,同时也暴露糖链内部的糖基,因此精子糖被的冷冻损伤可能是由于低温冷冻引起精子生育力低下的原因之一。     

白细胞介素25促进早孕期母-胎界面滋养细胞的增殖

探索人早孕绒毛组织和滋养细胞中白细胞介素25(interleukin 25,IL-25)及其受体的表达,以及IL-25对滋养细胞的促增殖作用。免疫组织化学法检测IL-25在正常早孕期绒毛组织的表达;流式细胞术检测IL-25及其受体在正常妊娠和自然流产绒毛组织的滋养细胞中的表达;CCK-8实验分析重组IL-25(rhIL-25)及其中和性抗体对人绒毛膜滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞活力的影响。结果显示IL-25在正常绒毛组织滋养细胞中呈阳性表达,自然流产患者绒毛滋养细胞的IL-25及其受体的表达均低于正常妊娠(P0.001);重组IL-25处理后,HTR-8/SVneo细胞活力以时间依赖和剂量依赖方式显著增强(P0.001或P0.000 1);相反,IL-25中和性抗体明显抑制其细胞活力(P0.05或P0.01或P0.001)。结果表明人早孕母-胎界面滋养细胞表达IL-25,以自分泌方式促进自身增殖,IL-25异常低表达可能参与反复自然流产的发病机制。     

白血病因子及其抗体对小鼠胚胎着床影响的体外研究

目的研究外源性白血病血子（LIF）及其抗体对小鼠胚胎着床的影响。方法将妊娠4d的小鼠胚胎种植于已建立的子宫内膜体外模型上，观察不同浓度的LIF及其抗体对小鼠胚胎黏附，植入及扩展的情况。结果LIF可以促进胚胎的黏附（P＜0．05），胚胎的扩展率降低。加入LIF抗体（5μg/ml，10μg/ml）使胚胎的黏附率降低（P＜0．05）。结论LIF可以促进胚胎的黏附和植入，其机制可能是通过上调子宫内膜整合素β3的表达促进子宫内膜容受性的建立。     

Treg与促炎因子协同作用活化子宫内膜间质细胞Smad2信号通路

本研究探讨了异位病灶调节性T细胞(Treg)与促炎细胞因子IL-1β、TNF-α协同作用对子宫内膜间质细胞Smad2信号通路的活化作用及其分子机制。采用原代分离培养子宫内膜异位症(简称内异症)患者在位及异位子宫内膜间质细胞(endometrial stromal cell,ESC);流式细胞术和ELISA法分别检测腹腔液中Treg的比例和TGF-β1的水平;免疫组织化学法分析正常、在位及异位内膜间质细胞中P-Smad2和Smad2的表达水平;细胞内Western法分析ESC Smad2信号通路的活化状况。结果显示:(1)与非内异症者相比,内异症患者盆腹腔内具有更多数量的Treg和更高水平的TGF-β1,且与疾病的进展呈正相关。(2)内异症患者在位及异位内膜具有更高的P-Smad2和Smad2水平。(3)异位病灶微环境中的Treg能够通过分泌TGF-β1与IL-1β或TNF-α发挥协同作用,可能通过激活ERK和p38信号通路活化ESC Smad2信号通路。ESC Smad2信号通路的活化可能通过多种分子机制影响ESC的生物学活性,从而导致疾病的发生和发展。     

早孕滋养细胞膜型及可溶性趋化因子CXCL16表达调控

目的 探讨趋化因子CXCL16在人早孕滋养细胞表达和释放的调控机制.方法 原代培养人早孕滋养细胞,实时定量RT-PCR、免疫化学和ELISA方法分析CXCL16的表达和分泌;ELISA方法分析细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4刺激前后滋养细胞CXCL16的表达和分泌水平;ELISA方法分析ADAM10治疗前后滋养细胞CXCL16的表达及分泌水平.结果 滋养细胞表达并分泌趋化因子CXCL16;IFN-γ治疗后滋养细胞表达和分泌CXCL16水平均显著上升(P<0.01),但TNF-α和IL-4并不影响CXCL16的表达或分泌;ADAM10可以加速CXCL16自滋养细胞的脱落,但并不上调CXCL16的合成.结论 IFN-γ和ADAM10参与调控母胎界面滋养细胞趋化因子CXCL16的合成和分泌.     

母-胎免疫识别低下型反复自然流产配偶淋巴细胞免疫疗法的改进

比较配偶淋巴细胞诱生后与非诱生免疫疗法 ,对于母 胎免疫识别低下型反复自然流产 (RSA )的临床疗效 ,并分析其疗效机制。 194例母 胎免疫识别低下型RSA患者随机分成 2组 ,分别采用经体外诱生的或未经体外诱生的配偶淋巴细胞对其进行皮内多点注射免疫治疗。分别观察随后的妊娠结局、封闭抗体水平。经配偶淋巴细胞免疫后 ,体外诱生的淋巴细胞免疫组妊娠成功率为 90 0 % ;未经体外诱生的淋巴细胞免疫组妊娠成功率为 84 8%。对于封闭抗体各项指标分析结果显示 ,配偶淋巴细胞皮内免疫能有效促进RSA患者封闭抗体及其抗独特型抗体水平的升高 ;经体外诱生的配偶淋巴细胞免疫疗法能显著提高RSA患者外周血抗CD3 BE的水平。配偶淋巴细胞皮内免疫疗法通过刺激封闭抗体的产生 ,改善随后的妊娠预后 ,配偶淋巴细胞经体外诱生后作为免疫原 ,通过升高抗CD3封闭抗体水平 ,有助于改善妊娠预后。     

补肾宁心方对小鼠成骨细胞的增殖和抗凋亡作用

目的探讨补肾宁心方促进成骨细胞增殖和抗凋亡作用。方法建立BALB／c小鼠绝经后骨质疏松模型,给予中药补肾宁心方浓缩液(简称中药组)灌服12周,灌服雌激素为阳性对照组(简称E2组),灌服生理盐水为阴性对照组(简称对照组)。12周末处死各组动物取颅骨,以植块法培养成骨细胞,MTT法测其增殖能力;取股骨,以透射电镜观察其细胞器的变化;取药物血清体外观察其抗成骨细胞凋亡作用。结果中药组和B组细胞器丰富,高尔基体发达,胶原纤维致密;中药组比对照组来源的成骨细胞具有更强的增殖能力(P<0．05);10％～20％的中药药物血清在体外能有效抑制成骨细胞的凋亡。结论中药补肾宁心方具有促成骨细胞增殖和抗凋亡作用。