Toll样受体在成骨细胞和破骨细胞中的表达及作用

Toll样受体(TLRs)在早期固有免疫中对入侵病原微生物的识别发挥重要作用,并在固有免疫和适应性免疫中起着枢纽作用。近来研究发现,TLRs在成骨细胞(OB)及破骨细胞(OC)分化、成熟及其功能中具有重要的调控作用。OC骨吸收与OB骨形成构成了持续不断的骨重建过程。阐明TLRs在OB和OC发生和功能中的作用,可加深对骨代谢相关疾病发生机制的认识并为开发针对性药物提供新的方法。     

卵巢上皮性癌合并卵巢子宫内膜异位症67例临床病理分析

目的 探讨合并卵巢子宫内膜异位症(内异症)的卵巢上皮性癌(卵巢癌)的临床病理特点.方法 选取1996年1月至2006年12月在复旦大学附属妇产科医院就诊并经手术确诊的卵巢癌共727例,对其中合并卵巢内异症的67例患者(其中由卵巢内异症恶变的卵巢癌患者34例,为A组;其他仅合并卵巢内异症的卵巢癌患者33例,为B组)的临床病理资料进行回顾性分析,并与660例未合并卵巢内异症的卵巢癌患者(C组)进行对照分析.同期本院经手术病理确诊的卵巢内异症患者共3890例.结果 卵巢内异症恶变为卵巢癌的发生率为0.87%(34/3890).卵巢癌合并卵巢内异症的发生率为9.2%(67/727).A、B、C组患者的平均年龄分别为(47.2±1.3)、(47.8±1.2)、(51.2±0.4)岁,3组问比较,差异有统计学意义(P=0.013).A、B组病理类型多为透明细胞癌(分别为67.6%、69.7%),其所占比例均明显高于C组的18.8%(P=0.000);而C组以浆液性腺癌(50.3%)为主,其所占比例明显高于A组的8.8%和B组的12.1%(P=0.000).A、B组手术病理分期多为Ⅰ期(分别为73.5%、63.6%),其所占比例均明显高于C组的31.4%(P=0.000);而C组多为Ⅲ期(47.7%),其所占比例明显高于A组的23.5%和B组的15.2%(P=0.001).A、B、C组高分化(分别为11.8%、6.1%、10.5%)、中～低分化(分别为88.2%、93.9%、89.5%)所占比例分别比较,差异均无统计学意义(P=0.602).A、B、C组雌激素受体(ER)阳性率分别为22.2%(6/27)、31.6%(6/19)、43.9%(136/310),3组间比较,差异有统计学意义(P=0.018);A、B、C组孕激素受体(PR)阳性率分别为22.2%(6/27)、15.8%(3/19)、35.5%(110/310),3组间比较,差异无统计学意义(P=0.082).患者总的5年累积生存率为55.6%,A、B、C组患者的5年累积生存率分别为78.9%、92.8%、51.9%,3组间比较,差异有统计学意义(P=0.000).结论 合并卵巢内异症的卵巢癌患者,具有年轻(尤其是内异症恶变患者)、多为卵巢透明细胞癌、期别早、ER表达水平低、预后好的特点.     

人源分子佐剂hC3d3促进人免疫活性细胞协同刺激分子表达及对hCGβ抗原的反应性

目的探讨分子佐剂hC3d3与hCGβ的融合蛋白hCGβ-hC3d3对人外周血单个核细胞（PBMC）中的B细胞与T细胞表面协同刺激分子表达及对hCGβ抗原反应性的影响。方法从人肝细胞cDNA文库克隆hC3d基因片段；构建pCI-gs-signal-6His-hCGβ及pCI-gs-signal-6His-hCGβ-hC3d3真核表达质粒，表达和纯化重组蛋白抗原hCGβ及hCGβ-hC3d3融合蛋白。实验分组：将B细胞、B＋T细胞组或PBMC，分别应用hCGβ、hCGβ-hC3d3或美洲商陆（PWM）等抗原进行体外处理48h。用流式细胞术分析培养后的上述淋巴细胞表面的CD80、CD86、CD154、CD25等协同刺激分子的表达；用ELISA检测培养上清中IL-2的含量。结果本研究成功克隆了hC3d基因，构建了真核表达质粒pCI-gs-signal-6His-hCGβ及pCI-gs-signal-6His-hCGβ-hC3d3；经转染CHO细胞，获得了目的蛋白高效分泌表达。经鉴定及纯化成功获得了较高纯度的目的蛋白hCGβ及hCGβ-hC3d3。hCGβ-hC3d3蛋白能够显著上调B细胞表面CD80、CD86分子的表达，尤其是CD86分子的表达（P〈0．01）；能明显增强T细胞表面CD154、CD25分子的表达（P〈0．05）。hCGβ-hC3d3蛋白提高B细胞抗原提呈能力及T细胞活化后分泌IL-2的能力（P〈0．05）。结论人源分子佐剂hC3d3明显促进人免疫活性细胞协同刺激分子表达及对hCGβ抗原的反应性。     

环孢素A对正常早孕期细胞滋养细胞体外生长的调节作用

目的　探讨环孢素A(cyclosporinA ,CsA)对正常早孕期细胞滋养细胞生长的调节作用。方法　选择孕 6～ 8周行人工流产术妇女绒毛 ,应用硅化聚乙酰胺吡咯烷酮 (percoll)密度梯度离心法 ,分离细胞滋养细胞 ;采用氚标记胸腺嘧啶摄入法 ,评价细胞滋养细胞的增殖能力 ;流式细胞仪分析其细胞周期 ;并应用扫描电子显微镜观察其细胞形态。结果　 (1)CsA在有效剂量范围内 (1× 10 -4 ～ 1μmol/L)可刺激细胞滋养细胞增殖 ,当细胞培养液中CsA浓度为 10 μmol/L时 ,则显著抑制细胞滋养细胞增殖。 (2 )细胞滋养细胞在浓度为 1μmol/LCsA培养液中培养 2 4h时 ,G2 M期细胞从 (2 8± 0 5 ) %增至 (6 7± 1 3) % ,当培养 48h时 ,则S期细胞从 (14± 5 ) %增至 (2 8± 8) %、凋亡细胞从 (8 7± 2 2 ) %减至 (3 6± 1 0 ) %。 (3)在浓度为 1μmol/LCsA培养液中培养 48h可使细胞滋养细胞伪足增多、变长 ,提示细胞侵袭力增加 ;细胞培养液中CsA浓度为 10 μmol/L时伪足减少。 结论　CsA在有效剂量范围内可刺激早孕期细胞滋养细胞生长 ,细胞形态改变 ,侵袭力增加。     

环孢霉素A对小鼠自然流产模型外周CD4~+CD25~+T细胞及妊娠结局的影响

为探讨着床期应用环孢霉素A(CsA)对小鼠自然流产模型外周CD4+CD25+T细胞及其妊娠结局的影响,以CBA/J♀×DBA/2♂为自然流产模型,在孕第4天给孕鼠单次口服不同剂量的CsA。孕第14天计数胚胎吸收率;并采用流式细胞术分析孕鼠脾脏CD4+CD25+T细胞比例。结果表明:与自然流产模型孕鼠比较,于着床期给予0.1 mg/kg、1 mg/kg、10mg/kg CSA,可显著降低自然流产模型胚胎吸收率(P<0.05)。在应用CsA后,自然流产模型孕鼠脾脏CD4+CD25+细胞占CD4+T细胞的比例显著增加(P<0.05)。表明CsA可通过上调外周CD4+CD25+T细胞,从而诱导母胎免疫耐受,改善妊娠预后。     

子宫内膜及异位灶趋化因子受体转录在子宫内膜异位症发病中的作用

目的：探讨子宫内膜异位症患者在位内膜及异位灶18种趋化因子受体的转录特征，以揭示趋化因子受体及其配体在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法：以正常子宫内膜为对照，半定量RT-PCR检测子宫内膜异位症患者在位内膜及异位灶18种趋化因子受体mRNA的表达水平，并比较其差异。结果：与正常子宫内膜相比，子宫内膜异位症患者在位子宫内膜CCR6、CCR8、CCR9、CX3CR1表达明显升高（P＜0．05）。与在位内膜相比，异位灶CCR4、CCR8、CCR9、CXCR1表达显著升高（P＜0．05）。结论：在位子宫内膜CCR6、CCR8、CCR9、CX3CR1高表达，可能参与子宫内膜异位症的发生；异位灶CCR4、CCR8、CCR9、CXCR1高表达，可能参与子宫内膜异位症的进一步发展。     

趋化性细胞因子对NK细胞生物学功能的调控作用

趋化性细胞因子（chemokine）及具受体在生理及病理情部下对白细胞间交流及移行起至关重要的作用，调控着白细胞在血管、淋巴及其他组织、器官间的迁移和募集。自1996年发现趋化性细胞因子受体CCR5和CXGR4是HIV-1感染人T淋巴细胞的协同受体后，对趋化性细胞因子及其受体在免疫系统分化成熟、     

补肾宁心方对单核-内皮细胞在动脉粥样硬化中相互作用的影响

目的　探讨补肾宁心方对动脉粥样硬化中单核 -内皮细胞相互作用的影响。方法　以培养人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)作为靶细胞 ,在内皮细胞培养基中加入氧化型低密度脂蛋白 (ox- LDL)并在试验体系中加入灌服补肾宁心方的兔血清 ,收集内皮细胞条件培养基 ,作用于人单核细胞系 U937细胞 ,检测内皮细胞条件培养基中 MCP- 1的含量及内皮细胞表面粘附分子、细胞间粘附分子 - 1 (ICAM- 1 )、血管细胞粘附分子 - 1(VCAM- 1 )的表达 ,同时测定 U937细胞 CCR2、LFA- 1以及 VL A- 4 m RNA水平。结果　 ox- LDL显著升高内皮细胞条件培养基中 MCP- 1的含量 ,明显促进内皮细胞表面 ICAM- 1、VCAM- 1的表达 ,且在内皮细胞条件培养基作用下单核 U937细胞 CCR2、L FA- 1以及 VL A- 4 m RNA水平明显升高。如在试验体系中加入灌服补肾宁心方的动物血清 ,则 MCP- 1含量明显下降 ,内皮细胞表面 ICAM- 1、VCAM- 1的表达显著下调 (P<0 .0 1 ) ,且在条件培养基作用下单核 U937细胞 CCR2、LFA- 1以及 VLA- 4 m RNA水平明显下调。结论　补肾宁心方含药血清可能通过抑制内皮细胞分泌趋化因子、下调内皮细胞表面粘附分子的表达 ,抑制内皮细胞对单核细胞的趋化及相互粘附 ,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用。     

人早孕滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养对外周NK细胞的影响

为了分析人早孕母-胎界面功能细胞对外周NK细胞表型及功能的调节作用,我们模拟母-胎界面微环境,建立滋养细胞和蜕膜基质细胞共培养系统,并将此共培养体系与外周NK细胞共培养,采用流式细胞术分析NK细胞的表型和细胞因子的表达,用细胞毒检测试剂盒检测NK细胞的细胞毒活性。研究发现,母-胎界面滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养体系能够显著上调外周NK细胞抑制型受体KIR2DL1的表达,下调外周NK细胞杀伤性受体NKp44的表达;显著上调Th2型细胞因子IL-10的表达水平,下调外周NK细胞穿孔素perforin表达及其细胞毒活性。结果表明,母-胎界面功能细胞能够诱导外周NK细胞的耐受表型及Th2型优势,下调外周及蜕膜NK细胞的细胞毒活性,从而有利于形成母-胎界面免疫耐受微环境。     

过继转输正常妊娠孕鼠的T细胞抑制自然流产孕鼠对胚胎的排斥

目的　观察过继转输正常妊娠孕鼠的T、B细胞对小鼠自然流产孕鼠妊娠预后的影响。方法　以♀CBA J×♂BALB c为正常妊娠模型 ,♀CBA J×♂DBA 2为自然流产模型 ,于孕 9d ,采用单向混合淋巴细胞反应分析两组孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力及上清液IL 2分泌水平 ,以研究孕鼠母 胎免疫耐受状态 ;并于孕 14d观察两种模型的胚胎吸收率。然后 ,应用免疫磁珠阴性分选两组孕鼠脾脏T细胞和B细胞 ,并将两种细胞分别转输至孕 4d(着床期 )的♀CBA J×♂DBA 2孕鼠 ,于孕 14d分别观察宿主孕鼠的胚胎吸收率。结果　与自然流产孕鼠比较 ,正常妊娠孕鼠孕 9d脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力及IL 2的分泌显著下降 (P <0 .0 5 ) ,孕 14d胚胎吸收率也显著下降 (P <0 .0 5 )。与转输自然流产孕鼠的T细胞相比 ,转输正常妊娠孕鼠T细胞的宿主孕鼠的胚胎吸收率显著下降 (P <0 .0 5 ) ;而转输两组B细胞的宿主孕鼠的胚胎吸收率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　于孕早期过继转输正常妊娠孕鼠的T细胞能诱导宿主孕鼠母 胎免疫耐受 ,防止母体对胚胎的免疫排斥 ,使自然流产模型的妊娠预后达到正常妊娠水平。