解毒生肌膏调控GSK-3β/β-catenin减轻炎症反应促糖尿病SD大鼠慢性创面修复的影响

目的 从GSK-3β/β-catenin角度探讨炎症反应对糖尿病SD大鼠慢性创面修复的影响。方法 使用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲霉素（Streptozocin,STZ）及手术制备全层皮肤缺损的方法建立糖尿病SD大鼠创面模型,成模后随机分为模型组（n=15）,磺胺嘧啶银组（n=15）及解毒生肌膏组（n=15）,并设立正常创面组（n=15）。磺胺嘧啶银组创面和解毒生肌膏组创面予以磺胺嘧啶银软膏和解毒生肌膏外敷,每日1次,模型组与正常创面组不予干预。给药后第3天、7天和14天肉眼观察各组大鼠的创面愈合情况,计算创面愈合率;HE观察组织基本形态;Masson检测胶原生成情况;超微电镜观察内质网结构差异;免疫组织化学法检测肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）表达;蛋白质免疫印迹法检测糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β）蛋白和β-连环蛋白（β-catenin）蛋白表达。结果 给药后3天解毒生肌膏组创面愈合率高于模型组（P<0.05）;给药后14天解毒生肌膏组创面愈合率高于磺胺嘧啶银组（P<0.05）。HE结果 给药后3、7天解毒生肌膏组创面较其他组肿胀程度较小,毛细血管数量丰富;14天,解毒生肌膏组和正常创面组出现皮肤附属器新生,组织结构完整度好。Masson结果 解毒生肌膏组较其他各组胶原纤维分布均匀,排列结构较为整齐,新生胶原纤维更为粗壮,分布均匀,排列整齐。电镜结果：解毒生肌膏组内质网丰富,数量较多,形态结构趋于正常。免疫组织化学法结果：与模型组相比,各组TNF-α、IL-6表达水平明显降低;解毒生肌膏组TNF-α表达水平低于正常创面组;解毒生肌膏组TNF-α、IL-6表达低于磺胺嘧啶银组。Western blot法结果显示：与正常创面组相比,各组β-catenin表达量均上调（P<0.05）,解毒生肌膏组上调表达量最少;与正常创面组相比,各组GSK-3β蛋白表达含量明显下调（P<0.05）;给药后7天,磺胺嘧啶银组和解毒生肌膏组GSK-3β蛋白表达含量上调（P<0.05）,但仍低于正常创面组。结论 解毒生肌膏作用糖尿病大鼠创面修复机制通过调控GSK-3β和β-catenin表达,使炎症因子IL-6和TNF-α表达下调,最终达到糖尿病大鼠慢性创面愈合。     

麝香配伍乳香促虎杖提取物治疗慢性非细菌性前列腺炎的动物实验研究

目的:观察麝香、乳香配伍组合对虎杖提取物治疗慢性非细菌性前列腺炎模型大鼠前列腺组织病理及炎症因子表达的影响。方法:53只健康雄性Wistar大鼠,5只用于大鼠前列腺蛋白提纯液的制备,48只随机分为麝香配伍乳香+虎杖提取物组、虎杖提取物、模型组、正常对照组共4组。除正常对照组外,应用大鼠前列腺蛋白提纯液辅以免疫佐剂制备实验性慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型,造模60 d时正常对照组、模型组予生理盐水,虎杖提取物、麝香配伍乳香+虎杖提取物组分别予生药量虎杖1.575 g/(kg.d)、麝香0.021 g/(kg.d)、乳香1.05 g/(kg.d)按组别选用连续灌胃,各组给药14 d时处死,检测指标包括病理学,ELISA法检测前列腺组织匀浆TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平,RT-PCR及Western印迹方法检测炎症因子MCP-1(CCL2)、CCR2 mRNA及蛋白表达。结果:麝香配伍乳香+虎杖提取物组前列腺组织结构改善,无明显炎性细胞浸润,虎杖提取物组可见炎性细胞浸润。麝香配伍乳香+虎杖提取物组明显降低前列腺组织炎症因子(TNF-α:11.04±4.07、IL-1β:16.94±4.26、IL-6:110.08±28.42、IL-8:26.28±7.36,pg/ml),优于单纯虎杖提取物组(TNF-α:63.21±21.37、IL-1β:41.32±14.62、IL-6:177.64±42.65、IL-8:96.37±37.61,pg/ml),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。麝香配伍乳香+虎杖提取物组大鼠前列腺组织炎症趋化因子MCP-1(CCL2)及其受体CCR2的mRNA(MCP-1:0.32±0.17;CCR2:0.28±0.11)及蛋白(MCP-1:0.28±0.15;CCR2:0.11±0.04)表达水平与模型组(MCP-1 mRNA:1.15±0.39;MCP-1蛋白:0.93±0.34;CCR2 mRNA:0.83±0.26;CCR2蛋白:0.93±0.34)比较显著降低(P<0.01),显著优于虎杖提取物组(MCP-1 mRNA:0.65±0.27;MCP-1蛋白:0.56±0.22;CCR2 mRNA:0.78±0.24;CCR2蛋白:0.25±0.09),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:麝香乳香配伍组合的应用具有促进虎杖提取物对慢性前列腺炎的治疗,降低炎症反应程度,从而促进前列腺组织结构修复的作用。     

“LBL、CBL、PBL、心智图”混合教学在中西医结合儿科学教学中的应用

目的　探讨“LBL、CBL、PBL、心智图”混合教学在中西医结合儿科学教学中的应用效果。方法　将175名中西医结合临床专业七年制学生分为实验组与对照组,实验组采用“LBL、CBL、PBL、心智图”混合教学,对照组采用“LBL+CBL”传统教学。比较两组理论知识成绩及教学满意度。采用SPSS 19.0进行t检验。结果　实验组学生对混合教学作出了高度评价,实验组在教学方法满意程度、激发学习兴趣、提升创新思维能力、提高临床诊疗思维能力、增强记忆方面明显优于对照组（P＜0.05）,且实验组学生在期末考试成绩方面显著高于对照组（P＜0.05）。结论　与传统教学相比,“LBL、CBL、PBL、心智图”混合教学模式能提高中西医结合儿科学的教学质量,可以在教学实践中进一步整合完善并运用。     

逍遥丸对抑郁模型大鼠海马突触素mRNA表达的影响

目的研究逍遥丸(舒肝解郁中药方剂)抗抑郁作用的分子机制。方法以原位杂交和RT-PCR方法,研究慢性应激抑郁模型大鼠的海马突触素mRNA表达以及逍遥丸对其影响。结果模型组大鼠海马突触素mRNA表达量明显上升,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);氟西汀组、逍遥丸组大鼠海马突触素mRNA表达量显著下降,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论模型大鼠海马神经元内突触素表达上调,逍遥丸能下调其表达。     

某校大学生亚健康失眠状态的调查与干预研究

[目的]探讨大学生以失眠症状为主的亚健康现状以及耳穴贴压法的临床干预作用.[方法]随机抽取湖南省中医药大学大一新生3 006名作为调查对象,采用大学生亚健康中医证候问卷调查表和匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)的问卷方式,调查大学生以失眠症状为主的亚健康现状,并对亚健康失眠状态学生予以耳穴贴压法进行调理干预.根据学号尾数随机将其分为磁珠组(耳穴处予以贴压磁珠,n=207)和中药组(耳穴处予以贴王不留行籽,n=201).并在无亚健康症状的同年级学生中,随机抽取203名志愿者,作为正常睡眠对照组.分析研究对象亚健康状态的主要症状及分类情况,比较三组间睡眠质量相关量表评分.[结果]亚健康症状的大学生有1 853例(61.64%),其中躯体亚健康以睡眠紊乱为主者408例(13.57%);心理亚健康以抑郁寡欢为主者256例(8.52%);社会交往亚健康以恐惧胆怯为主者117例(3.89%).两组研究对象经过1个月的干预调理后,睡眠质量均得以改善.磁珠组与中药组在PSQI 总分、睡眠质量、入睡时间得分方面比较,耳穴贴压磁珠组优于中药组,差异具有统计学意义(P<0.05).[结论]大学生是亚健康状态的高发人群之一,耳穴贴压磁珠法对大学生亚健康失眠状态,在改善睡眠质量方面,具有较好的调理干预作用.     

脑出血后铁代谢异常

脑出血(intracerebral hemorrhage, ICH)是一种临床常见的高致残率和高死亡率的脑血管病.大量临床和实验研究表明,ICH后血肿周围脑组织铁代谢异常是造成脑水肿和神经细胞凋亡等继发性脑损伤的重要原因,是影响患者转归的重要因素.文章对ICH后铁代谢异常及其意义进行了综述.     

化痰通络汤对脑缺血/再灌注大鼠“肠-脑”轴的干预作用

目的 基于“肠-脑”轴探讨化痰通络汤（HTTLD）对大鼠脑缺血再灌注后脑组织和肠道形态和功能的影响。方法 将60只SPF级雄性大鼠随机分为假手术组,模型组,HTTLD高、中、低剂量组（28.66,14.33,7.16 g·kg^-1）,依达拉奉（4 g·kg^-1）+丁酸梭菌（5.0×10⁸ cfu·mL^-1）组,采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,灌胃给药HTTLD,神经功能缺损评分和2,3,5-氯化三苯四氮唑（TTC）染色法测定脑组织损伤,小肠推进率观察脑缺血再灌注对肠道动力的影响,十二指肠黏膜的病理形态学检测评价肠黏膜细胞损伤,酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血清D-乳酸（D-LAC）,二胺氧化酶（DAO）,细菌内毒素（LPS）含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测十二指肠的闭合蛋白（Occludin）,紧密连接蛋白-5（Claudin-5）,闭锁小带蛋白-1（ZO-1）蛋白的表达。结果 脑缺血再灌注后,大鼠出现神经功能缺损症状,与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分显著升高（P<0.01）;与模型组比较,HTTLD中、高剂量组能显著减少神经功能缺损症状,降低神经功能缺损评分（P<0.01）。与假手术组比较,模型组大鼠脑组织出现明显梗死灶,脑梗死率显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组脑梗死体积明显减少（P<0.01）,以HTTLD高剂量组的效应最佳,且效应具有剂量依赖性。小肠推进率结果显示,与假手术组比较,模型组小肠推进率显著降低（P<0.01）;与模型组比较,各给药组能显著升高小肠推进率（P<0.01）,以HTTLD高剂量效应最佳,且效应具有剂量依赖性。十二指肠黏膜组织病理学检测显示,脑缺血再灌注后十二指肠黏膜可见明显损伤,各给药组黏膜损伤情况明显减轻。与假手术组比较,模型组ZO-1,Occludin,Claudin-5蛋白表达均显著降低（P<0.01）;与模型组比较,HTTLD低、中、高剂量组能不同程度上调ZO-1,Occludin,Claudin-5蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,以高剂量组的效应最为显著。与假手术组比较,模型组血清D-LAC,DAO,LPS蛋白含量均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组D-LAC,DAO含量均明显降低（P<0.05,P<0.01）,HTTLD中、高剂量组明显降低LPS含量（P<0.05,P<0.01）,且HTTLD高剂量组的作用最明显。结论 脑缺血再灌注后,大鼠脑组织受损、出现神经功能障碍,同时肠道黏膜损伤、肠道蠕动减弱和肠道黏膜屏障破坏。HTTLD能减少脑组织和胃肠道黏膜损伤,减轻神经功能缺损症状,提高胃肠道动力、改善肠道屏障功能、减少肠道细菌代谢产物和毒物的释放,从而发挥对脑缺血再灌注后“脑-肠”轴损伤的保护作用。     

内质网应激对缺血性脑卒中神经元凋亡与自噬的调控及中医药的干预

内质网作为细胞内的一种膜质细胞器,通过参与分泌蛋白和跨膜蛋白的合成、折叠、成熟和翻译后修饰以维持细胞内稳态,与疾病的发生发展密切相关。当内质网环境受到干扰后蛋白质将发生折叠或错误折叠,此时内质网应激被激活,可对神经元的凋亡与自噬进行调控,在缺血性脑卒中中扮演着重要角色。本文从内质网应激的信号通路入手,探讨内质网应激与神经元凋亡和自噬的关系,介绍中医药通过内质网应激途径调控缺血性脑卒中神经元凋亡与自噬的研究概况,为研究中医药在缺血性脑卒中的作用机制提供新的现代医学的理论支持和作用靶点。     

不同中医临床证型下行型鼻咽癌组织细胞核蛋白质差异表达的初步研究

目的： 研究下行型鼻咽癌不同中医临床证型患者原发病灶组织细胞核差异表达蛋白质,为中医证型分类的科学性提供依据。方法：采用双向凝胶电泳及基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法 (MALDI-TOF-MS)对下行型鼻咽癌火毒困结型、气阴两虚型和气血凝结型患者的鼻咽癌组织细胞核蛋白进行分离和表达谱研究,利用生物信息学方法鉴定差异蛋白质。结果：与下行型鼻咽癌气阴两虚型细胞核蛋白点相比,气血凝结型有28个蛋白点表达上调、12个蛋白点表达下调,火毒困结型有9个点表达上调,19个蛋白点表达下调;与下行型鼻咽癌气血凝结型细胞核蛋白点相比,火毒困结型有25个蛋白点表达上调、18个蛋白点表达下调。MALDI-TOF-MS成功鉴定出3个差异蛋白质,来源于气血凝结型鼻咽癌患者的瘤组织细胞不均一性核糖核蛋白H (heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H,hnRNP H)和微管蛋白β链1 (tubulin beta-1 chain,TUB1)表达上调,来源于火毒困结型鼻咽癌患者瘤细胞的核蛋白Ⅵ型胶原蛋白α2链 (type Ⅵ collagen alpha 2 chain,COLⅥA2)前体表达下调。结论：下行型气血凝结型鼻咽癌患者的瘤细胞核蛋白hnRNP H和TUB1表达上调,下行型火毒困结型鼻咽癌患者的瘤细胞核蛋白中COLⅥA2前体表达下调。     

寿胎丸对脂多糖诱导的人绒毛外滋养细胞氧化应激及焦亡的调节作用

目的 探讨寿胎丸在脂多糖（LPS）诱导的人绒毛外滋养细胞（HTR-8/SVneo）损伤中的作用及其对细胞损伤中氧化应激和焦亡的调控,为寿胎丸安胎的作用机制研究提供新的方向。方法 采用LPS（100 μg?L^-1）诱导HTR-8/SVneo细胞损伤建立细胞模型,设置空白组、模型组、寿胎丸组（10%寿胎丸含药血清）、抗氧化剂组（1 mmol·L^-1 NAC）、NOD样受体热蛋白结构域3（NLRP3）抑制剂组（50 μmol·L^-1MCC950）。分别采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）试剂盒检测细胞活性情况;Hochest 33342/PI双荧光染色和流式细胞术观察细胞死亡情况;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-18（IL-18）、白细胞介素-1β（IL-1β）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）释放情况;DCFH-DA探针检测细胞内活性氧（ROS）含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测NLRP3、胱天蛋白酶（Caspase）-1、消化道皮肤素D（GSDMD）、IL-1β蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NLRP3、Caspase-1 mRNA的表达。结果 与空白组比较,模型组细胞活力显著降低（P<0.01）,细胞上清液中炎症因子IL-1β、IL-18含量显著增加（P<0.01）,氧化应激因子ROS、MDA含量升高,SOD活性显著降低（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白和NLRP3、Caspase-1 mRNA表达显著上调（P<0.01）;与模型组比较,寿胎丸组、NAC组及MCC950组细胞活力显著升高（P<0.01）,寿胎丸组和NAC组MDA、ROS活性降低,SOD活性显著升高（P<0.01）,寿胎丸组和MCC950组细胞上清液中IL-1β、IL-18含量减少（P<0.01）,细胞内NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白和NLRP3、Caspase-1、IL-1β mRNA表达均明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 寿胎丸可通过抑制氧化应激和细胞焦亡减轻LPS诱导的HTR-8/SVneo细胞损伤,这可能是寿胎丸防治复发性流产,发挥安胎作用的机制之一。