人γ干扰素的纯化与分析 Ⅰ.玻璃珠吸附层析法纯化人γ干扰素

<正> 为了探讨人γ干扰素(HuIFN-γ)的生物学作用机理以及提高临床疗效,纯化工作已成为当前 HuIFN-γ研究的一个急待解决的问题。由于 HuIFN-γ不能用盐析法进行浓缩,近年来,国外采用 CPG(Controlled-pore     

人rIFN-γ的纯化及鉴定实验研究

本研究利用本室建株的A_3 杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体,对大肠菌表达的人rIFN-γ进行了纯化。宿主菌经 7MGuHCl 处理后,收获的抽提液经 40％饱和(NH_4)_2SO_4盐析,除去部分杂蛋白,纯度约提高了一倍、活性回收>100％。此溶液稀释70倍复性后直接通过McAb亲和层析纯化,纯度达到98％,比活6×10~6Iu/mgp。本文还对复性的影响因素进行了研究,证实溶液的离子强度及蛋白浓度对复性均有影响。     

肥大细胞负调控分子与变态反应性疾病

Ⅰ型变态反应病的发生率逐年上升,目前缺乏有效的治疗方法,严重影响人类的健康和患者的生活质量。近年来,利用免疫负调控作用的信号分子,抑制肥大细胞和嗜碱粒细胞释放炎性介质和细胞因子,为Ⅰ型变态反应性疾病的免疫治疗开辟了新的途径。肥大细胞和嗜碱粒细胞表面表达的IgE高亲和力受体（FceRI）在Ⅰ型变态反应发生中起着重要作用,     

血管生成抑制素Endostatin研究新进展

１９９７年Ｏ‘Ｒｅｉｌｌ从小鼠血管内皮细胞瘤中分离到一种新的２０ｋＤ具有特异抑制血管内皮细胞生长的抑制因子－－Ｅｎｄｏｓｉａｔｉｎ,它对牛它细血管内皮细胞、牛肺主动脉内皮细胞有特异的抑制增殖作用,而对非血管内皮细胞系细胞如ＮＩＨ３Ｔ３,Ａ１０平滑肌细胞等则无增殖抑制作用,实验证实大肠杆菌生产的复性及未复性的Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ及杆状病毒生产的重组Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ均有抑制鸡胚血管生成的作用,而且     

携带DT_(390)-VEGF_(165)或DT_(390)-VEGF_(exon7)融合基因的真核表达载体的构建及表达

抑制血管再生可能是治疗实体瘤的有效途径。肿瘤血管生成的主要调控者是血管内皮细胞生长因子(ＶＥＧＦ)。ＶＥＧＦ的 5种异构体中ＶＥＧＦ165是表达丰度最高的异构体 ,ＫＤＲ和Ｆｌｔ 1为ＶＥＧＦ的高亲和受体。1996年Ｓｏｋｅｒ等在各种肿瘤细胞系上发现了仅与ＶＥＧＦ165外显子 7编码的结构域结合的受体 ,即ＶＥＧＦ165Ｒ[1] 。目前将细菌毒素的跨膜结构域和酶性结构域与细胞因子或抗体构成的融合蛋白靶向杀伤各型细胞的研究已有大量报道 ,但这些融合毒素仅对某些类型的肿瘤有效。为扩大癌症治疗范围 ,我们选择ＶＥＧＦ165和ＶＥＧＦｅｘ…     

LPS、rh-TNFα刺激PBL诱导TRAIL表达的初步研究

选择人ＰＢＬ作为人ＴＲＡＩＬ基因的来源,抽提细胞在ＬＰＳ和ｒｈ－ＴＮＦα刺激２,１０,１８ｈ的总ＲＮＡ,通过ＲＴ６－ＰＣＲ观察ＴＲＡＩＬ基因转录ｍＲＮＡ的水平,然后用ＰＣＲ扩增ＴＲＡＩＬ基因,并用免疫印迹法分析ＴＲＡＩＬｍＲＮＡ翻译蛋白的水平。结果发现：在ＬＰＳ和ｒｈ－ＴＮＦα刺激细胞并进一步诱导细胞凋亡可能与诱导表达ＴＲＡＩＬ有关。     

核酸疫苗作为治疗性疫苗的前景

联系核酸疫苗的免疫机理和慢性病毒感染的发生机制,对将核酸疫苗用作慢性病毒感染的治疗疫苗的发展前景作一简要阐述。     

利用重组痘苗病毒表达人CD20基因

目的获得重组人 CD2 0分子并研究编码人 CD2 0的基因在痘苗病毒中的表达。方法从 p GEM- T- EASY/ CD2 0载体上酶切下编码人 CD2 0分子的 c DNA,亚克隆到 p JSA1175载体上 ,重组质粒与野生痘苗病毒共转染 TK- 143细胞。结果APAAP检测到重组病毒感染的细胞表面有 CD2 0分子表达 ,富集后病毒滴度约为 1× 10 9pfu/ ml。结论人 CD2 0基因在痘苗病毒中表达 ,为研究其功能以及研制单克隆抗体奠定了基础     

HBV.CP—β—IFN真核表达载体的构建及鉴定

目的 扩增ＨＢＶ基因Ｃ区启动子,将其与β－干扰素基因进行连接,以构建真核表达载体,为下一步研究表达打下基础。方法 ＰＣＲ方法扩增ＨＢＶ基因Ｃ区启动子,产物经ＤＮＡ自动测序正确后,与表达干扰素的ｐ３．１ｃＤＮＡ（＋）－β－ＩＦＮ质粒进行粘端连接,并对构建真核表达载体进行限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析。结果 扩增出ＨＢＶ,ＣＰ,序列与报告资料基本一致;与ｐ３．１ｃＤＮＡ（＋）－β－ＩＦＮ真核表达载体。     

携带人β干扰素基因的人乙型肝炎特异性真核表达载体的构建

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)C区启动子调控的人β干扰素(IFN-β)基因的真核表达载体.方法切除真核表达载体pcDNA3.1(+)-DT390-VEGFexon7内部的CMV启动子及DT390序列使之成为p3.1V7;从逆转录病毒载体pMNSM-IFN-β质粒中游离人β干扰素基因;用PCR方法从pGEM.7Z-HBV质粒中扩增人乙型肝炎病毒(HBV)的C区启动子序列;通过转换酶切位点,将HBV C区启动子和人β干扰素基因共同插入到p3.1V7中,构建成受HBVC区启动子控制的人β干扰素基因真核表达载体p3.1V7-HBV.CP-IFN-β.结果构建完成携带人β干扰素基因的人乙型肝炎特异性真核表达载体.结论该载体为慢性病毒性肝炎的特异性干扰素基因治疗奠定了基础.