天麻素磷脂复合物的制备工艺考察

目的:优选天麻素磷脂复合物的制备工艺,为该成分的开发应用提供参考。方法:采用溶剂挥发法制备天麻素磷脂复合物,以天麻素与大豆磷脂的结合率为指标,结合单因素试验和正交试验进行系统研究,考察了反应时间、温度、溶剂类型、药脂比、天麻素质量浓度等因素对磷脂复合物制备工艺的影响。结果:天麻素磷脂复合物的最佳工艺条件为以四氢呋喃为反应溶剂,反应温度40℃,反应时间0.5 h,天麻素与大豆磷脂的投料比1∶2,天麻素质量浓度20 g·L-1,转速100 r·min-1。复合物结合率98.3%。结论:建立的制备工艺稳定可行,可为天麻素的进一步开发利用提供条件。     

伴侣自吞噬在MPP+损伤的SH-SY5Y细胞中的影响及葛根素的干预作用

目的： 研究葛根素通过分子伴侣自吞噬途径保护MPP⁺损伤的SH-SY5Y细胞。方法： 以1 mmol·L^-1 MPP⁺损伤SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型。采用CCK-8染色检测不同浓度的葛根素对MPP⁺损伤的SH-SY5Y细胞存活率的影响;透射电镜、AO染色观察自噬体的形成及检测溶酶体活性的变化;RT-PCR检测Lamp2a,Hsc70 mRNA表达的变化,Western blotting法检测细胞内Lamp2a,Hsc70,α-synuclein蛋白的表达。结果： 在12.5~50.0 μmol·L^-1,预先30 min加入葛根素可以保护SH-SY5Y细胞抵抗MPP⁺诱导的损伤,并呈一定的量效关系;AO染色和电子显微镜检测25.0,50.0 μmol·L^-1葛根素作用于1 mmol·L^-1MPP⁺损伤的SH-SY5Y细胞,细胞内出现自噬体,并且随着葛根素剂量的增加,胞质中形成的自噬体增多;流式细胞术检测结果显示50.0 μmol·L^-1葛根素可以拮抗1 mmol·L^-1 MPP⁺诱导的SH-SY5Y细胞内ROS水平的增加,阻止氧化损伤的发生;RT-PCR和Western blotting结果表明在12.5~50.0 μmol·L^-1葛根素通过上调细胞内Hsc70,Lamp2a mRNA和蛋白水平保护MPP⁺造成的SH-SY5Y细胞损伤并抑制MPP⁺诱导的SH-SY5Y细胞α-synuclein蛋白的积聚。结论： 葛根素可以拮抗MPP⁺诱导的SH-SY5Y细胞损伤,其保护机制可能与干预分子伴侣自吞噬途径有关。     

天麻素通过抑制细胞凋亡保护谷氨酸诱导的PC12细胞损伤

目的：研究天麻素（Gastrodin）对谷氨酸诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的影响及可能机制。方法：以谷氨酸建立体外培养PC12细胞损伤模型并采用MTT比色法测定细胞存活率;AO/EB双染法经荧光显微镜观察细胞凋亡形态;采用流式细胞术检测细胞内活性氧含量以及Annexin V/PI染色后的细胞凋亡率;Western blot法检测细胞内Caspase-3蛋白表达。结果：天麻素可明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1～10μmol/L剂量呈一定的量效关系;同时,天麻素可明显抑制谷氨酸引起的活性氧（ROS）的累积,降低谷氨酸诱导的活性Caspase-3蛋白的表达,降低PC12细胞的凋亡率,在0.1～10μmol/L剂量呈量效相关性。结论：在一定剂量范围内,天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与减少ROS的生成,阻止氧化损伤的发生,抑制Caspase-3途径依赖的细胞凋亡相关。     

舒尔经片对实验性子宫肌瘤及痛经的作用

目的:探讨舒尔经片对实验性大鼠子宫肌瘤及小鼠痛经模型的影响,为舒尔经片临床用于抗子宫肌瘤及治疗痛经作用提供实验依据。方法:①采用雌、孕激素负荷诱导大鼠子宫肌瘤模型,同时灌胃给予舒尔经片(1.12、0.56、0.28 g/kg),1次/d共30 d,测量大鼠子宫、卵巢系数及子宫横径,放射免疫法检测血清雌二醇和孕酮含量,显微观察子宫的病理形态学改变;②复制缩宫素致小鼠痛经模型,观察不同剂量舒尔经片(1.44、0.72、0.36g/kg)对小鼠扭体潜伏期及扭体次数的影响;热板法观察舒尔经片对小鼠痛阈的影响。结果:舒尔经片1.12 g/kg能显著降低子宫肌瘤大鼠子宫系数及横径,提高卵巢系数,降低大鼠血清中孕酮水平,改善子宫的病理学变化。舒尔经片各剂量均能不同程度减少小鼠扭体次数,延长扭体反应潜伏期,提高热板致小鼠的痛阈值。结论:舒尔经片对大鼠子宫肌瘤有一定的抑制作用,对痛经有较强的镇痛作用。     

中成药治疗眩晕现状

正眩晕是临证中常见病症之一,"眩"指目眩,"晕"指头晕,二者常同时并见,故统称为眩晕。其多由风、火、痰、瘀、虚所引起。老年人多发,主要临床表现为头晕眼花、天旋地转,病情轻者仅有眼花,头重脚轻,闭目即止,重者如坐舟车,视物旋转,甚至不能站立、行走。近年来,中成药被广泛用于眩晕的治疗,现对中成药治疗眩晕     

丹皮酚通过miR-21介导的p38 MAPK信号通路下调氧化低密度脂蛋白诱导的大鼠血管内皮细胞肿瘤坏死因子-α释放

目的观察微RNA-21(microRNA-21,miR-21)对p38丝裂原活化的蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase,p38-MAPK)信号通路的调控作用,探究丹皮酚(paeonol,Pae)抑制血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)损伤的机制。方法组织块预消化贴壁法培养大鼠VEC;氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导VEC的损伤;用HiPerFect试剂将miR-21模拟物或抑制剂转染进入VEC;免疫印迹法检测p38MAPK信号通路相关蛋白的表达;酶联免疫吸附试验检测VEC中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平。结果 ox-LDL明显提高VEC中Ras、p-MKK3/6、p-p38蛋白表达水平,并诱导VEC分泌TNF-α;miR-21高表达可升高TNF-α水平及Ras、p-MKK3/6、p-p38蛋白表达水平;Pae明显降低损伤的VEC分泌TNF-α水平,且抑制由miR-21高表达引起的TNF-α水平上升及p38MAPK信号通路的激活。结论 Pae可抑制miR-21介导的p38MAPK信号通路,减少ox-LDL诱导的VEC中TNF-α的分泌。     

补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠神经—内分泌功能的影响

目的探讨补肾生髓方治疗缺血性中风的可能机制。方法雄性SD大鼠采用惊恐加房劳的复合伤肾法制造肾精亏虚模型,联合大脑中动脉线栓法改良制作左侧局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。将造模成功的24只大鼠随机分为模型组、脑络欣通组和补肾生髓方组,每组8只。另随机取正常大鼠8只为正常组。脑络欣通组和补肾生髓方组分别按每天8.54g/kg、10.25g/kg灌胃相应药物,造模后每天灌胃2次;模型组予以等量的生理盐水灌胃,各组均持续2周。正常组不做处理。检测各组大鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)、促甲状腺素(TSH)、红细胞生成素(EPO)、血钙及血磷值。结果与正常组比较,模型组大鼠血浆ACTH和血清TSH、EPO、血钙值显著降低,而血磷值升高(P0.05或P0.01)。与模型组比较,脑络欣通组血磷值降低,补肾生髓方组血清TSH值升高、血磷值降低(P0.05)。结论补肾生髓方药能升高肾精不足型脑缺血再灌注大鼠血清TSH值、降低血磷,具有调节神经—内分泌的作用。     

益气活血法治疗缺血性中风的实验研究概况

<正>脑血管病是致死的重要病种之一[1]。脑卒中已经成为严重危害人类健康的主要疾病之一。其中,缺血性脑卒中占66.4%,且一直呈上升趋势[2]。因此,缺血性中风一直是我国中风病研究的重点。气虚血瘀是缺血性中风的根本病机,益气活血法成为防治缺血性中风的根本途径[3]。学者们对益气活血法防治缺血性中风的研究已经从分子水平进行多方面的探讨[4]。作者就近5年益气活血法治疗缺血性中风的实验研究进展概述如下。     

新藤黄酸联合阿霉素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

目的研究新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)与阿霉素(adriamycin,ADM)联合作用对人乳腺癌细胞MCF-7的影响。方法体外培养人乳腺癌细胞MCF-7细胞株,采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态变化;4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)细胞核染色实验观察GNA与ADM单独与联合作用对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响;膜联蛋白Ⅴ(annexinⅤ,AV)-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染流式细胞仪检测给药后乳腺癌细胞MCF-7凋亡率。结果 MTT检测结果显示,在GNA浓度为0.125~4μmol/L和ADM浓度在0.5~16μmol/L范围内,人乳腺癌细胞MCF-7的细胞存活率随GNA和ADM剂量增加而降低,且联合用药组细胞存活率低于单独用药组。倒置显微镜和荧光显微镜下,与对照组比较,细胞明显缩圆变小,染色细胞核破碎,呈现凋亡状态,而联合用药组凋亡细胞数量明显高于单独用药组。AV-FITC/PI双染经流式细胞仪检测发现,GNA与ADM单独和联合作用均诱导MCF-7细胞凋亡,与单独用药组比较,联合用药组细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论 GNA与ADM单独和联合作用均能诱导人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡,且两者联合作用可产生协同效应,其作用机制可能与诱导细胞凋亡相关。     

高效液相色谱-蒸发光散射法测定黄芪中单糖和双糖的含量

目的采用高效液相色谱-蒸发光散射法建立黄芪中单糖和双糖含量的测定方法。方法色谱柱为Waters X BridgeTM氨基柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(70∶30),流速为1.0mL/min,柱温为30℃。蒸发光散射检测器参数:雾化器温度为50℃,漂移管温度为90℃,气体流量为1.60L/min,增益值为1.0。结果果糖、蔗糖和麦芽糖分别在0.10~0.90μg(r=0.999 9)、1.00~9.00μg(r=0.999 6)、0.25~2.25μg(r=0.999 4)范围内其对数值与峰面积的对数值呈良好的线性关系;平均回收率分别为97.97%(RSD=1.56%)、97.82%(RSD=1.53%)、97.36%(RSD=1.59%)。结论所建立的高效液相色谱-蒸发光散射法简单、准确、重复性好,可用于黄芪中单糖和双糖的含量测定。