肝素化胶原/壳聚糖多孔支架的制备及其血管化的研究

本研究旨在构建一种能快速血管化的人工真皮替代物。用冻干法制备了胶原／壳聚糖多孔支架，并对其进行肝素化，观察此支架的结构特征、亲水性、体外降解性和组织相容性，同时将血管生成素引入到此支架，对复合有血管生成素的肝素化支架的体内血管化进行了初步研究。结果表明，肝素化胶原／壳聚糖多孔支架具有合适的三维多孔结构、良好的吸水性和较理想的酶解稳定性，体内实验表明，此支架具有良好的组织相容性，血管生成素可加快支架的血管化。     

钛表面纳米仿生磷灰石涂层对成骨样细胞活性的生物增强效应

目的：观察钛表面纳米仿生磷灰石涂层对成骨样细胞行为的影响，为骨科常用钛植入体的表面改性及其生物效应提供实验依据。方法: 商业用纯钛经过物理、化学和生物处理，表面生成均匀薄层仿生的纳米磷灰石涂层，将仿生涂层的钛金属板与成骨样细胞复合培养，以纯钛和只经磨砂、酸蚀处理的钛板作为对照，采用MTT法检测细胞活力和增殖变化、扫描电镜和激光共聚焦荧光显微镜观察细胞形态、RT-PCR检测碱性磷酸酶基因表达。结果: 纳米仿生磷灰石涂层比非涂层钛金属表面细胞的增殖数量明显增高，细胞的形态和分布也优于对照组；培养12 d，涂层对细胞ALP基因表达的量明显高于对照组。结论: 钛金属表面纳米仿生磷灰石涂层可以增强细胞的生物效应，提高钛植入体的骨界面早期结合，具有很好的应用前景。     

小鼠气道反应性的测定

目的:测量各种小鼠呼吸模型的肺功能，尤其是非离体的动态肺功能，对于呼吸疾病的研究具有重要意义。 方法:主要包括整体测量方法和离体测量方法。而整体法又主要分为有创法（主要为气道阻力、顺应性的测定）和无创法（Penh，enhanced pause的测定）。本篇主要介绍整体的测量方法。 结论:不同的方法各有利弊，适用于不同的实验要求。     

福辛普利、卡托普利及缬沙坦对人血单核细胞表达组织因子的影响

目的:研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)中的福辛普利(fosinopril)、卡托普利(captopril)及I型血管紧张素II受体拮抗剂(ARB)中缬沙坦(valsartan)对人血单核细胞受细菌脂多糖(LPS)刺激表达组织因子(TF)的影响。方法:从健康平产妇脐静脉取得脐血,分离单个核细胞,分组培养,以LPS(0.1 mg/L)刺激作为对照组,其它组分别再加入ACEI类药物fosinopril (20 mg/L)、captopril(20 mg/L)及valsartan(20 mg/L),孵育。冻融法收集细胞裂解液,用一期凝固法分析LPS诱导单核细胞表达的组织因子促凝活性。用RT-PCR技术,观察各组表达TFmRNA,并以GAPDH作为内参照进行半定量分析。结果和结论:Fosinopril,captopril及valsartan可下调人血单核细胞由LPS诱导的TFmRNA的表达,并显著降低促凝活性。     

PCR检测龈下菌斑中齿垢密螺旋体与牙周组织破坏的关系

目的　建立龈下菌斑标本中齿垢密螺旋体PCR临床快速检测方法 ,了解齿垢密螺旋体感染与慢性牙周炎牙周组织破坏程度之间的关系。方法　 81例慢性牙周炎患者每例采取 2个不同患牙牙位的龈下菌斑标本 ,用终浓度为 1%的TritonX 10 0 10 0℃水浴 10min处理标本以制备DNA模板 ,用PCR检测标本中齿垢密螺旋体特有的相对分子质量 (Mr)为 5 3× 10 3 外膜蛋白基因 (tdpA)扩增片段。结果　 6 7例患者 ( 82 .7% )的 2份龈下菌斑标本齿垢密螺旋体tdpAPCR均为阳性 ,9例患者( 11.1% )的其中 1份龈下菌斑标本可见目的扩增片段 ,5例患者 ( 6 .2 % )的 2份龈下菌斑标本PCR均为阴性 ,16 2例龈下菌斑PCR检测总阳性率为 88.3% ( 143 16 2 )。牙槽骨吸收 >2 3和牙周袋深度≥7mm患牙龈下标本的PCR阳性率较高 (P <0 .0 5 ) ,牙龈指数与PCR阳性率无明显关系 (P >0 .0 5 )。结论　PCR检测tdpA基因可用于慢性牙周炎龈下标本中齿垢密螺旋体的临床快速诊断 ,齿垢密螺旋体感染与牙周组织破坏密切相关。     

启动子区5′CpG岛去甲基化对人结肠癌细胞生物学表型的影响

目的：探讨DNA启动子区5′CpG岛甲基化状态与人结肠癌RKO细胞增殖凋亡等生物学特征的关系。方法： 应用特异性DNA甲基转移酶（DNMTs）抑制剂-5-氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-2′-deoxycytidine，5-Aza-CdR）处理肠癌RKO细胞72 h，甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）及DNA测序法分析p16/CDKN2基因CpG岛甲基化状态；MTT、FCM、荧光染色及透射电镜检测启动子区去甲基化后细胞生长、形态和细胞周期凋亡的影响。 结果： DNMTs抑制剂能较好地逆转启动子区胞嘧啶甲基化状态；CpG岛去甲基化后能明显地抑制肠癌细胞的生长，增加细胞群体倍增时间（P<0.01），诱导肠癌细胞凋亡，影响肠癌细胞周期分布，并具有良好的量效依赖关系。 结论： 通过逆转CpG岛高甲基化能有效地抑制肠癌细胞增殖，为临床治疗大肠癌提供新的作用靶点。     

正常血钾型周期性麻痹SCN4A基因R675Q新突变细胞模型的建立及初步研究

目的 建立一个正常血钾型周期性麻痹(normokalemic periodic paralysis,normoKPP)R675Q新突变的细胞模型并对其通道电流进行初步研究.方法 用编码野生型人骨骼肌钠离子通道a亚单位基因(skeletal muscle Na channel type 4 alpha subunit gene,SCN4A)的cDNA为模板,PCR技术定点突变后磷酸钙沉淀法瞬时转染突变质粒至293细胞,逆转录PCR和Western印迹验证目的 基因和蛋白的表达;膜片钳技术全细胞记录野牛和突变型钠通道电流.结果 突变经测序得以证实;转染后24 h和48h,突变通道的基因及蛋白表达量显著增高;相同的测试电压下R675Q钠通道相对电流在到达峰值前小于野生型钠通道,到达峰值后大于野生型钠通道;R675Q和野生型钠通道均在0 mV测试电压刺激下到达峰值.结论 成功建立了正常血钾型周期性麻痹R675Q新突变的细胞模型;R675Q突变同时提高了通道的激活和失活,其所在的S4区域可能和患者发作性力弱的症状密切相关.     

基质金属蛋白酶3和尿激酶型纤溶酶原激活物受体在2型糖尿病大血管病变中的变化

目的： 探讨基质金属蛋白酶3（MMP-3）和尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）在2型糖尿病大血管病变中的变化。方法: 用ELISA双抗体夹心法测定26例正常对照和39例2型糖尿病患者（其中单纯2型糖尿病15例、合并大血管病变24例）的血浆MMP-3和uPAR水平。结果: 单纯糖尿病组uPAR高于正常对照（P<0.05）而MMP-3无显著差异；合并大血管病变组MMP-3显著高于正常对照和单纯糖尿病组（P<0.01，P<0.01），而uPAR亦高于正常对照及单纯病变组（P<0.01，P<0.05）。2型糖尿病血浆MMP-3水平和uPAR水平呈正相关， LDL-C与uPAR呈正相关且是uPAR主要影响因素。 结论: MMP-3和uPAR与2型糖尿病大血管病变发生密切相关，MMP-3可作为2型糖尿病血管病变的循环标志物。     

探讨血小板计数在血泵离体实验中的意义

为了探讨血小板计数在血泵离体实验中的意义。我们用两种滚压泵分成两组，作5对16小时离体长时间转流实验，血样本为转前作对照组、转流4h后每隔2h抽1次。测定项目：血小板计数、游离血红蛋白。结果：两组血小板计数值均随转流时间延长而呈线性逐渐增加，各时点值与前时点比（P＜0．05），有显著差异，两组游离血红蛋白量也随转流时间延长而呈线性增加。血小板计数与游离血红蛋白呈直线回归相关关系。结论；在血泵离体转流实验中，血小板计数可反映血细胞碎片的数量，因此可作为一项评价血泵离体溶血性能的客观指标。     

心脑血管病和糖尿病相互合并与血浆凝血酶调节蛋白水平的变化

目的探讨脑梗死、脑出血、冠心病、高血压合并糖尿病对血浆凝血酶调节蛋白 (PTM)水平的影响。方法用ELISA法检测305例心脑血管疾患 ,其中脑血管病132例 (脑梗死81例 ,脑出血51例 ) ,高血压冠心病66例 ,糖尿病107例。健康对照组60例 ,其中献血员25人 ,学生12人 ,体检健康者23人 ,年龄12～77岁 ,平均38.6岁。结果60例健康人对照组PTM水平为(20.40±7.72)μg/L,糖尿病和高血压冠心病无合并症组PTM水平稍高 (23.44±6.33)μg/L和(23.00±7.13)μg/L,与对照组无显著性差异 (P>0.05) ,无合并症脑血管病组PTM水平 (30.51±14.13)μg/L则显著高于对照组 (P<0.01)。合并症各组中 ,合并糖尿病的PTM水平最低 ,合并肾病者PTM水平最高。合并肾病的各组 ,PTM水平均显著高于其他合并症组 :脑血管病合并肾病为(61.25±24.43)μg/L高于合并高血压冠心病 (32.12±12.35)μg/L和糖尿病 (31.37±12.06)μg/L,高血压冠心病合并肾病为(52.11±22.29)μg/L高于合并脑血管病 (31.78±12.28)μg/L和糖尿病 (28.72±9.58)μg/L,糖尿病合并肾病为(40.26±11.98)μg/L高于合并脑血管病 (31.63±8.95)μg/L ,P<0.01;高血压冠心病和糖尿病合并脑血管病时PTM水平均高 (31.78±12.28)μg/L和(31.63±8.95)μg/L,与脑血管病组处于同一水平