P53和P21在PC12细胞分化中的作用

目的探讨P53及其下游P21蛋白在PC12细胞分化中的可能作用机制。方法用反转录病毒质粒pBabe-P53/m175转染未分化PC12细胞,经筛选后建立野生型P53蛋白功能丧失的细胞系PC12(P53/m175);利用倒置相差显微镜、流式细胞术及Western blot等方法,比较两种细胞在神经生长因子(NGF)作用后,细胞分化表型、细胞周期及相关蛋白表达的改变。结果NGF作用于正常PC12细胞组,P53/P21蛋白表达持续升高,细胞G1期阻滞出现的时间与蛋白表达开始增加的时间相一致;而在NGF作用的PC12(P53/m175)细胞组,细胞不能表达P21蛋白,且细胞周期G1期阻滞的程度也出现显著下降。NGF作用下,两组细胞都能观察到神经突起的生长,表现出明显的分化表型。结论PC12细胞经NGF作用后出现P53及P21蛋白持续表达增加,主要介导了细胞分化过程中细胞周期G1期阻滞这一特征的出现,但并不是导致神经突起进行性生长这一特征的必需条件。     

人外周血树突状细胞培养和地塞米松对其分化的影响作用

目的分离培养和鉴定人外周血树突状细胞（DC）,以及探讨地塞米松对其分化的影响作用。方法密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,贴壁后加入GM-CSF、IL-4和LPS培养,部分组另加入地塞米松,观察细胞形态学、流式标志和DC与T淋巴细胞共培养后的增殖变化。结果外周血单核细胞诱导培养后具有DC形态学特征,CD83表达上调,CD14表达下调,DC与T淋巴细胞共培养后呈增殖反应。培养液中加入地塞米松后CD83表达下调,CD14表达上调,DC与T淋巴细胞共培养后增殖反应减弱。结论外周血单核细胞经联合细胞因子可诱导为DC;地塞米松可使DC在功能上处于不成熟状态。     

人外周血T淋巴细胞自噬现象的观察

目的：观察分离培养的人外周血T淋巴细胞的自噬现象。方法：密度梯度离心法及尼龙棉柱法分离健康成年人外周血T淋巴细胞，分空白组及地塞米松（DXM）组，培养72小时后观察细胞光镜及电镜形态学、MDC荧光染色，并用流式细胞仪检测自噬细胞比例变化。结果：①通过自然培养后人外周血T淋巴细胞可出现典型自噬细胞形态学改变。②空白组及DXM组72小时自噬细胞发生率与0小时比较有显著性差异。③DXM组与空白组72小时自噬细胞发生率有显著性差异。结论：人外周血T淋巴细胞存在自噬现象，DXM可诱导人外周血T淋巴细胞自噬。     

^99mTc-DTPA肾动态显像及β2-m水平在评价肾移植受者肾功能中的价值

目的：探讨^99mTc-DTPA肾动态显像半定量参数和血、尿β2-m水平测定对肾移植术后早期并发症诊断与鉴别诊断的价值。方法：28例肾移植病人术后均进行放射性核素^99mTc-DTPA肾动态显像,同时测定移植肾的肾小球滤过率（GFR）、膀胱放射性计数与移植肾放射性计数比值（B/K值）和移植肾放射性1min计数与腹主动脉放射性1min计数比值（K1min/A1min比值）。在进行放射性核素肾动态显像前所有病人均收集其血液和尿液标本,采用放射免疫分析测定血、尿β2-m水平。结果：12例肾功能正常者肾动态显像示肾血流灌注及功能良好,GFR值为（49.1±6.1）ml/min,B/K值均〉3,K1min/A1min比值为8.18±1.41;4例急性排斥反应者肾血流灌注受损程度重于功能相,GFR值为（33.2±5.3）ml/min,B/K值均〈1,K1min/A1min比值为2.59±0.86,β2-m水平以血β2-m升高明显;8例慢性排斥反应者肾血流灌注和功能相均同时受损,GFR值为（19.8±7.5）ml/min,B/K值均〈1,K1min/A1min比值为2.19±0.84,β2-m水平也以血中升高明显;2例肾小管坏死者及2例环孢素A肾中毒者肾血流灌注受损均轻于功能相,GFR值分别为（38.5±4.1）ml/min和（39.4±5.81）ml/min,B/K值均〈1,K1min/A1min比值分别为5.83±0.84和6.01±0.66,β2-m水平以尿中升高显著。结论：放射性核素肾动态显像半定量参数K1min/A1min比值和B/K值,结合肾移植病人术后血、尿β2-m水平联合分析可早期初步鉴别排斥反应的类别,可作为判断移植肾受损程度、原因及预后估测的敏感指标。     

染色体多态性与ART妊娠结局的临床分析

目的分析染色体多态性对生育功能的影响,探讨其与ART妊娠结局的关系。方法回顾性调查分析珠海市妇幼保健院2009年至2010年生殖中心行IVF-ET共1607例患者的染色体核型及其临床资料,研究其ART妊娠情况。结果 1607例生殖异常患者中,检出染色体正常核型1563例(97.3%),ART妊娠877例,妊娠率为56.1%,流产113例,流产率为12.9%;检出染色体多态性核型37例(2.3%),ART临床妊娠20例,妊娠率为54.1%,流产2例,流产率为10.0%。结论染色体正常组与染色体多态性组ART的妊娠率及流产率的差异无显著性统计学意义,染色体多态性患者不影响ART妊娠结局。     

镁对哮喘患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞凋亡及Foxp3表达的影响

目的:观察镁对分离培养的健康人和哮喘患者外周血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞凋亡及叉头框蛋白3(Foxp3)表达的影响。方法:经磁珠分离法分离出健康人和哮喘患者外周血CD4⁺CD25⁺T细胞,分镁剂干预组(10 mmol/L)及空白组培养72 h后,用流式细胞仪检测CD4⁺CD25⁺T细胞的凋亡率及Foxp3表达情况。结果:(1)健康人外周血CD4⁺CD25⁺T细胞的纯度为77.4％~92.3%,哮喘患者CD4⁺CD25⁺T细胞的纯度为75.2％~93.8％。(2)CD4⁺CD25⁺T细胞占外周血CD4⁺T细胞的比例在健康组为4.12%~7.98%,在哮喘组为4.51%~8.68%,两者没有显著差异(P＞0.05)。(3)镁(10mmol/L)可以诱导健康组及哮喘组外周血CD4⁺CD25⁺T细胞凋亡率增加(P＜0.05),但对Foxp3的表达无影响(P＞0.05)。结论:镁促进CD4⁺CD25⁺T调节细胞凋亡增加可能为其治疗支气管哮喘的作用机制之一。     

老年慢性肺心病患者血小板活性与高敏C反应蛋白的关系

目的探讨老年慢性肺心病患者血小板活化标志物PAC-1、CD62p的变化与高敏C反应蛋白（hs-CRP）的关系。方法用三色全血流式细胞术测定36例老年慢性肺心病患者外周血中血小板PAC-1、CD62p的表达水平,采用免疫比浊法测定hs-CRP,并与28例老年健康对照者及28例非老年健康对照者比较。结果老年慢性肺心病组PAC-1、CD62p、hs-CRP均明显高于老年健康对照组及非老年健康对照组（均P〈0.001）。老年健康对照组PAC-1、CD62p阳性表达率亦高于非老年健康对照组（P〈0.05）。老年慢性肺心病患者PAC-1、CD62的变化与hs-CRP呈正相关。结论老年慢性肺心病患者血小板明显活化,其活化程度与hs-CRP关系密切。     

中国4城市2—7岁分析人群维生素B12营养状况流行病学调查

目的了解4城市2～7岁分析人群维生素B12的营养状况。方法2007年5～9月和2008年5—10月,对2002名2～7岁分析人群进行体格检查、膳食调查、血常规检查及血清维生素B12水平测定,其中重庆市485名、北京市513名、珠海市503名、武汉市501名。结果①2002名2～7岁分析人群平均维生素B12水平（ng·L^-1）为775±312,市区（835±271）高于郊区（720±338）,P〈0．001;其中重庆市为756±220、北京市为840±414、珠海市为772±245、武汉市为736±317,地区间差异有统计学意义,P〈0．001。②2～7岁分析人群维生素B12水平性别差异不显著,P〉0．05;2—5岁组维生素B12水平随年龄增长呈降低趋势,r=-0．146,P〈0．001;5岁～组和〈7岁组维生素B12水平相近。（3）4城市分析人群维生素B12减少（〈300）检出率为4．7％。其中维生素B12缺乏（〈200）检出率为1．5％,边缘性缺乏（200—300）检出率为3．2％。重庆市、北京市、珠海市和武汉市分析人群血清维生素B12减少检出率分别为2．1％、3．9％、3．2％和9．6％。④分析人群维生素B12水平主要受膳食维生素B12摄入量的影响,P〈0．001。分析人群平均膳食维生素B12摄入量（μg·d^-1）市区（2．4±2．0）高于郊区（2．0±1．4）,P〈0．05;重庆市、北市京、珠海市和武汉市分析人群平均膳食维生素B,2摄入量分别为1．9±1．3、2．8±1．6、2．6±1．8和1．6±1．2,差异有显著统计学意义,P〈0．001。⑤分析人群维生素B12水平与Hb水平呈低度相关,P〈0．001。结论4城市分析人群存在维生素B12减少,以边缘性缺乏为主。儿童维生素B12营养状况受膳食维生素B12摄入量的影响,分析人群血清维生素B12水平何时达到成人水平有待研究。     

Notch通路在大鼠肾脏缺血再灌注损伤TLR4介导的炎症反应中的作用

 目的: 探讨Notch通路对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)中Toll样受体4(TLR4)介导的炎症反应的作用。方法: 雄性SD大鼠75只随机分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IRI组)和γ-分泌酶抑制剂DAPT干预组(DAPT组)。分别于再灌注6 h、12 h、24 h、48 h、72 h时点观察各组肾脏病理改变,检测血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平,ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,免疫组化和Western blot分别检测大鼠肾脏Notch1、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平。结果: 在IRI组,呈现不同程度的以肾小管上皮细胞和间质损伤为主的肾脏病理改变,BUN、Scr及血清炎性因子TNF-α、IL-6含量在各时点均显著高于sham组(P<0.05),而在DAPT干预组,在各时点肾脏病理损伤明显减轻,BUN、Scr和血清TNF-α、IL-6水平均显著低于IRI组(P<0.05)。Notch1、TLR4和NF-κB p65主要表达于肾小管上皮细胞胞质中,在sham组仅有微量表达,在IRI组则有高表达,在各时点表达与sham组相比均显著增强(P<0.05),而在DAPT组,各因子的表达水平在各时点均较IRI组显著降低(P<0.05)。结论: 大鼠肾脏IRI出现显著的肾功能及肾脏病理改变,血清炎性因子TNF-α和IL-6水平升高,Notch1、TLR4及NF-κB p65在肾组织中表达增强;而DAPT可通过抑制Notch1活化和TLR4/NF-κB通路,抑制TLR4所介导的炎症反应,从而发挥肾脏保护作用。     

1α, 25-二羟维生素D3对早期角膜移植小鼠Th17细胞的免疫调控作用

 目的:观察在同种异体角膜移植的小鼠模型中,1α, 25-二羟维生素D3对Th17细胞及其相关细胞因子的影响。方法: C57BL/6 小鼠作为受体,BALB/c小鼠作为供体,建立小鼠穿透性角膜移植术模型。术后隔日对角膜移植小鼠腹腔注射1.0 μg 1α,25二羟维生素D3（维生素D3干预组）,模型组和正常对照组腹腔注射等量大豆油。在裂隙灯活组织镜下观察角膜移植物的透明情况,评估排斥反应的发生情况,并取角膜移植物做病理学检测。采用实时荧光定量PCR检测脾脏中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平,Western blotting分析外周血中RORγt及IL-17的蛋白含量,流式细胞术检测外周血IL-17和IFN-γ细胞因子的表达情况。结果: 1α, 25-二羟维生素D3显著地抑制了同种异体角膜移植排斥反应,同时减少了角膜移植物的炎性渗出。应用1α, 25-二羟维生素D3治疗后,小鼠脾脏中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平降低;外周血中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平被下调。结论: 1α, 25-二羟维生素D3抑制小鼠同种异体角膜排斥反应的作用与IL-17及相关细胞因子RORγt细胞调节密切相关。