分子生物学技术在检验医学中的应用

分子生物学中的分子生物传感器技术、分子生物芯片技术、分子生物纳米技术和分子蛋白组学在医学检验中的应用,使针对患者的临床治疗更为合理和快速,这将对检验医学的发展起到重要作用。就分子生物学技术在检验医学中的应用做以综述,为检验医学提供帮助。     

弓形虫HT分离株ROP5蛋白基因的克隆、序列分析及其表达研究

目的克隆和表达弓形虫虎源分离株(HT株)ROP5蛋白基因。方法运用RT-PCR技术从弓形虫HT株中扩增出ROP5基因,将其克隆入T载体中进行测序和分析,并将目的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中进行诱导表达。结果该基因全长1650bp,编码549个氨基酸。其中前24个氨基酸构成信号肽序列。与GenBank中报道的RH株相比,有12个核苷酸有差异,导致7个氨基酸发生改变,两者核苷酸和推导氨基酸序列的同源性分别为99.2%和98.9%。转化重组质粒pETROP5的大肠杆菌BL21(DE3)在IPTG的诱导下,可表达出相对分子质量为64800的重组蛋白,并且能与弓形虫抗体发生血清学反应,表达量占菌体蛋白的15.6%。结论成功克隆和表达了弓形虫HT株ROP5蛋白基因,表达的重组蛋白具有良好的反应原性。     

2006年黑龙江省肾综合征出血热监测研究

目的掌握黑龙江省肾综合征出血热(HFRS)人间和动物间流行特征,为制定防治措施提供科学依据。方法收集全省HFRS疫情资料,并在固定监测点及面上常规调查中采集人血清、鼠肺和鼠血做汉坦病毒(HV)抗体和抗原检测。结果2006年黑龙江省共报告HFRS病例3870例,死亡33例,年平均发病率10.13/10万,死亡率为0.09/10万,病死率为0.85%,与2005年相比,病例数下降7.68%,主要发病地区为佳木斯、双鸭山、牡丹江、黑河和鸡西市。在固定监测点捕获小兽10种2554只,采集鼠肺、鼠血各2461份,患者或疑似患者血清598份,健康人血清527份,其中小兽密度为11.19%,野外和村内优势鼠种分别为黑线姬鼠和褐家鼠,患者血清抗体阳性率为63.88%,健康人群隐性感染率较低;鼠带病毒率为7.68%,鼠血清抗体阳性率为10.73%。结论进一步证实黑龙江省是以姬鼠型为主的混合型疫区,人间疫情有下降趋势,但小兽密度和鼠带病毒率仍然较高,需要进一步加强监测和防治,尤其应扩大易感人群的免疫接种范围。     

载双歧杆菌胞外多糖纳米粒子诱导人胃癌裸鼠移植瘤细胞的凋亡

目的: 制备载双歧杆菌胞外多糖纳米粒子（Bifidobacterium exopolysaccharideloaded nanoparticles，B.EPSNPs)，探讨B.EPSNPs对人胃癌细胞裸鼠移植瘤增殖和凋亡的影响。方法：取Fe3O4纳米粒子和B.EPS，采用乳化高温固化法制备B.EPSNPs。建立人源胃癌细胞(BGC823)裸鼠移植瘤模型，接种6 d后随机分为5组，分别以生理盐水、NPs、环磷酰胺（cytoxan,CTX）、游离B.EPS及B.EPSNPs进行灌胃治疗。观察各组瘤体的生长情况，TUNEL法检测细胞凋亡，透射电镜观察细胞超微结构，免疫组化法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)及凋亡调控基因bcl2、bax蛋白表达水平。结果：空载NPs和B.EPSNPs平均粒径分别为（560±21）nm、（960±32）nm，B.EPSNPs载药率为30％。B.EPSNPs对移植瘤的抑瘤率为（46.4±2.94）%，高于游离B.EPS组的(32.0±1.62)％和NPs组的(4.9±0.98)％。B.EPSNPs组移植瘤细胞凋亡指数明显高于B.EPS组\[（66.8±5.58）％ vs （41.3±4.26）％\]（P<0 .01)。透射电镜观察到B.EPSNPs治疗后的移植瘤细胞核染色质凝集成块状，出现了典型的凋亡特征。与B.EPS相比，B.EPSNPs组PCNA及bcl2的表达水平有所降低（P<0.01），bax的表达水平有所提高（P<0 .01）。结论：纳米粒子运载B.EPS增强了后者对胃癌细胞(BGC823)移植瘤的增殖抑制作用和促凋亡作用，提高了B.EPS的抗肿瘤活性。      

A reliable immunoturbidimetry method for immunoglobulin G in bovine colostrum

With rabbit anti-bovine IgG, a reliable, highly selective and cheap method has been optimised and established for the determination of IgG in bovine colostrum. The method was based on the soluble immune complex precipitating from the liquid in the function of polyethylene glycol. Subsequently, the interference of casein, β-lactglobulin, α-lactalbumin, lactofemin and inactive IgG to the immunoassay was investigated. Finally, the assay was applied to the analysis of IgG in spiked milk samples. The limit of detection, calculated as three times of determinations’ standard deviation, was 0.07 mg/mL, with a practical working range between 0.2 and 0.8 mg/mL. The average recoveries of IgG in milk were 97.63%, 99.87%, 100.1% for 0.2 mg/mL, 0.5 mg/mL, 0.8 mg/mL, respectively. Eventually, confirmation test between immunoturbidimetry method and high performance liquid chromatography (HPLC) was carried out, and the results of the immunoassay were in accordance with that of HPLC.