The N-Terminal α-Helix of Potato Virus X-Encoded RNA-Dependent RNA Polymerase Is Required for Membrane Association and Multimerization

Positive-sense single-stranded RNA viruses replicate in virus-induced membranous organelles for maximum efficiency and immune escaping. The replication of potato virus X (PVX) takes place on the endoplasmic reticulum (ER); however, how PVX-encoded RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) is associated with the ER is still unknown. A proline-kinked amphipathic α-helix was recently found in the MET domain of RdRp. In this study, we further illustrate that the first α-helix of the MET domain is also required for ER association. Moreover, we found that the MET domain forms multimers on ER and the first α-helix is essential for multimerization. These results suggest that the RdRp of PVX adopts more than one hydrophobic motif for membrane association and for multimerization.     

高压静电场照射雏鸡免疫器官的细胞免疫变化

目的探讨不同性质高压静电场对雏鸡免疫器官细胞免疫变化的影响。方法用组织化学染色及细胞培养技术和MTT测定法对高压静电场照射雏鸡免疫器官的T细胞数量及其对ConA增殖功能的动态变化进行了检测。结果高压正静电场照射雏鸡免疫器官的T细胞数量及其增殖功能明显高于高压负静电场照射雏鸡和对照雏鸡;而高压负静电场照射雏鸡免疫器官的上述各项检测指标均不同程度的低于对照雏鸡。结论高压正静电场照射对雏鸡免疫器官的细胞免疫功能有促进作用,而高压负静电场照射可使雏鸡免疫器官的细胞免疫功能降低或减弱。     

吸水链霉菌17997产生氢醌型格尔德霉素及其生物合成中间产物

目的 了解格尔德霉素生物合成PKS后修饰过程中的一些细节.方法 对格尔德霉素产生菌吸水链霉菌17997及其格尔德霉素生物合成聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)后修饰基因阻断变株(gdmP-和gdmN-)在ISPII平板不同时间的培养物进行乙酸乙酯提取,硅胶板TLC和NaOH显色分析,检测GDM及其生物合成中间产物,并利用LC-MS对中间产物进行鉴定.结果 吸水链霉菌17997原株、gdmN-和gdmP-变株在培养时间72～96h,发现氢醌型格尔德霉素(GQH2)、氢醌型4,5-双氢-7-去氨甲酰基-7-羟基格尔德霉素(H2GQH2-dC)和氢醌型4,5-双氢格尔德霉素(H2GQH2)分别为主要组分,相应的醌型化合物为次要组分;之后,这些氢醌型化合物随培养时间延长逐渐消失,相应的醌型化合物成为主要组分.双向硅胶板TLC分析证实GQH2、H2GQH2-dC和H2GQH2均可在空气中自发氧化为相应的醌型化合物.结论 在吸水链霉菌17997的GDM生物合成PKS后修饰过程中,首次提出GQH2自发氧化为GDM可能是氢醌型向醌型转变的位点,同时它也是GDM生物合成最后一步.     

蛋清蛋白肽体外血管紧张素转化酶抑制活性及其消化稳定性

目的研究蛋清蛋白肽体外血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性以及耐胃肠道消化稳定性。方法采用超滤分离蛋清蛋白酶解产物;利用高效液相色谱法测定蛋白酶水解物及其超滤各组分的体外ACE抑制活性。氨基酸自动分析仪测定ACE抑制活性较高组分(EWPH-Ⅲ)的氨基酸组成。体外模拟胃肠道消化试验测定EWPH-Ⅲ的消化稳定性。RP-HPLC法分析消化产物的组成变化。结果蛋清蛋白水解物的ACE抑制活性随着分子量的降低而增强(P<0.05),分子量小于3ku组分(EWPH-Ⅲ)的ACE抑制效果最好,其IC50值为0.049 mg/ml。EWPH-Ⅲ中疏水性氨基酸和必需氨基酸总量分别为49.51%和50.26%。经过胃肠道消化作用后,EWPH-Ⅲ的ACE抑制活性有所降低,消化产物的RP-HPLC分析结果显示EWPH-Ⅲ中多肽组分发生了明显的变化,胰酶消化产物中疏水性较强的多肽组分含量有所减少。结论蛋清蛋白肽具有较强的ACE抑制活性并且具有很高的营养价值,其ACE抑制活性随着阶段性的胃肠道消化而发生改变。     

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??OBJECTIVE To analyze the structure and growth pattern of the biomass, root number, and age class of Asarum sieboldii f.seoulense. METHODS A large sample, random sampling investigation and determination method were used. RESULTS The biomass and root number of Asarum sieboldii f.seoulense were correlated with the growth speed; the correlation coefficient was high. There existed allometric relationship between the age class and the number of roots of Asarum sieboldii f.seoulense; the age class and biomass had allometric relationship. CONCLUSION The increase of the biomass of Asarum sieboldii f.seoulense depends on the root number; with the increase of the age class, the biomass and root number of Asarum sieboldii f.seoulense increase, but the relative growth speeds are not equal.     

表皮干细胞的鉴定方法

获得纯化的人类和动物表皮干细胞不仅可为构建有生理功能的人工皮肤提供种子细胞，对了解皮肤组织器官发育、肿瘤疾病发生也具有重要意义，是转基因和组织工程技术中的重要靶细胞。利用慢周期性和自我更新能力是鉴别表皮干细胞最基本且较可靠的实验手段，但这两种方法的应用很不方便。目前位于表皮干细胞表面的糖蛋白已作为其特异性标志而受到关注。因表皮干细胞的特异性分子标志、识别标准、分布定位及体外培养条件下生物学特性的变化等诸多方面都还存在争议，限制了其基础研究与临床应用。     

单核细胞增生性李斯特菌溶血素基因的原核表达

目的为获得大量的单核细胞增生性李斯特氏菌（Listeria monocytogenes，Lmo）溶血素（Hemolysin，hty）蛋白，以便研制Lmo诊断试剂及其在疫苗研制方面的作用。方法本文应用Primer Premier5．00设计引物，引入13amHI和x幻工酶切位点。以前期合成构建的pMDl8-T-hly质粒为模板，通过PCR方法扩增出Lmo0586株溶血素基因。相应酶切后，克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中，构建pGEX-6p-hly重组质粒，转化入大肠杆菌BL21（DE3）进行表达。带有重组质粒pGEX-6p-hly的大肠杆菌BL21（DE3）经IPTG诱导后，进行SDS-PAGE及免疫印记分析。结果PCR体外扩增hly基因产物大小约为1624bp，成功构建了重组表达质粒pGEX-6p—hly；SDS-PAGE显示蛋白表达带的分子量约为72ku，重组蛋白主要以包涵体形式表达。表达量占菌体总蛋白的20．8％；Western免疫印记表明具有良好的反应原性。结论在国内首次构建重组质粒pGEX-6p-hly，并以融合蛋白的形式进行了高效表达，同时该蛋白具有特异的抗原反应性，为研制Lmo诊断试剂及其在疫苗研制中的作用奠定了基础。