Sequence Type 4821 Clonal Complex Serogroup B Neisseria meningitidis in China, 1978–2013

Serogroup B Neisseria meningitidis strains belonging to sequence type 4821 clonal complex (CC4821), a hyperinvasive lineage first identified for serogroup C in 2003, have been increasingly isolated in China. We characterized the outer membrane protein genes of 48 serogroup B and 214 serogroup C strains belonging to CC4821 and analyzed the genomic sequences of 22 strains. Four serogroup B strains had porin A (i.e., PorA), PorB, and ferric enterobactin transport (i.e., FetA) genotypes identical to those for serogroup C. Phylogenetic analysis of the genomic sequences showed that the 22 CC4821 strains from patients and healthy carriers were unevenly clustered into 2 closely related groups; each group contained serogroup B and C strains. Serogroup B strains appeared variable at the capsule locus, and several recombination events had occurred at uncertain breakpoints. These findings suggest that CC4821 serogroup C N. meningitidis is the probable origin of highly pathogenic CC4821 serogroup B strains.     

Molecular genetic analysis of Plasmodium vivax isolates from Eastern and Central Sudan using pvcsp and pvmsp-3α genes as molecular markers

In Sudan, Plasmodium vivax accounts for approximately 5–10% of malaria cases. This study was carried out to determine the genetic diversity of P. vivax population from Sudan by analyzing the polymorphism of P. vivax csp (pvcsp) and pvmsp-3α genes. Blood samples (n = 76) were taken from suspected malaria cases from 2012–2013 in three health centers of Eastern and Central Sudan. Parasite detection was performed by microscopy and molecular techniques, and genotyping of both genes was performed by PCR-RFLP followed by DNA sequence for only pvcsp gene (n = 30). Based on microscopy analysis, 76 (%100) patients were infected with P. vivax, whereas nested-PCR results showed that 86.8% (n = 66), 3.9% (n = 3), and 3.9% (n = 3) of tested samples had P. vivax as well as Plasmodium falciparum mono- and mixed infections, respectively. Four out of 76 samples had no results in molecular diagnosis. All sequenced samples were found to be of VK210 (100%) genotype with six distinct amino acid haplotypes, and 210A (66.7%) was the most prevalent haplotype. The Sudanese isolates displayed variations in the peptide repeat motifs (PRMs) ranging from 17 to 19 with GDRADGQPA (PRM1), GDRAAGQPA (PRM2) and DDRAAGQPA (PRM3). Also, 54 polymorphic sites with 56 mutations were found in repeat and post-repeat regions of the pvcsp and the overall nucleotide diversity (π) was 0.02149 ± 0.00539. A negative value of dN − dS (−0.0344) was found that suggested a significant purifying selection of Sudanese pvcsp, (Z test, P < 0.05). Regarding pvmsp-3α, three types were detected: types A (94.6%, 52/55), type C (3.6%, 2/55), and type B (1.8%, 1/55). No multiclonal infections were detected, and RFLP analysis identified 13 (Hha I, A1-A11, B1, and C1) and 16 (Alu I, A1-A14, B1, and C1) distinct allelic forms. In conclusion, genetic investigation among Sudanese P. vivax isolates indicated that this antigen showed limited antigenic diversity.     

结核分枝杆菌Rv2941蛋白抗原表位集中区免疫原性研究

目的 分析结核分枝杆菌Rv2941抗原的T细胞表位集中区的免疫原性,探究其作为结核病疫苗候选抗原的潜力。方法 通过免疫表位数据库(Immune Epitope Database,IEDB)分析Rv2941抗原的T细胞表位区(命名为Rv2941p)并构建表达载体PET32a-Rv2941p,诱导表达并纯化Rv2941p。将其与免疫佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和PolyI:C乳化后,皮下免疫BALB/c小鼠3次,每次免疫间隔10 d,末次免疫1周后处死小鼠,进行免疫效果评价。采用ELISA法检测免疫后小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度以及免疫后小鼠脾脏淋巴细胞分泌IL-4、IL-2、IL-6和IFN-γ的水平。同时,利用流式细胞技术检测淋巴细胞内CD4⁺T、CD8⁺T细胞增殖情况以及胞内细胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL-4)表达水平。结果 Rv2941p可溶性表达,并获得高纯度的蛋白。Rv2941p诱导产生了高水平的特异性抗体IgG,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001)。另外,Rv2941p提高了IgG2a/IgG1的比值。细胞因子检测结果显示,Rv2941p提高了IFN-γ和IL-6的分泌,与Ag85B组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。同时,Rv2941p可以促进CD4⁺和CD8⁺T细胞的增殖分化,以及提高胞内IFN-γ和TNF-α的表达。结论 Rv2941p可以刺激小鼠产生较高的体液和细胞免疫,尤其Th-1类细胞免疫,可以作为结核病疫苗候选抗原,为结核病新型疫苗的开发奠定了基础。     

五种布鲁氏菌核酸检测试剂盒检测性能的评价北大核心CSCD

目的比较5种布鲁氏菌核酸实时荧光PCR检测试剂盒的一致性和检出能力,为临床实验室选择检测方法和布鲁氏菌的诊断提供参考依据。方法选用经病原学检测确定为布鲁氏菌阳性的血液样本38份,健康人的血液样本24份,潘氏变形杆菌、溶藻弧菌、河弧菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌DNA各1份,使用5种试剂盒(编号A-E)分别进行核酸检测,比较5种试剂盒临床样本检测的一致性;选择1份阳性样本核酸用无RNA酶水梯度稀释得到5个浓度(浓度1:4453.13 fg/μL,浓度2:1113.28 fg/μL,浓度3:278.32 fg/μL,浓度4:69.58 fg/μL,浓度5:17.40 fg/μL),每个浓度使用5种试剂盒(编号A-E)分别进行3次检测,比较5种试剂盒的阳性检出率及批内重复性。结果5种试剂盒检测67份DNA样品的符合率稍有不同,试剂盒ABDE的符合率均为100%,试剂盒C的符合率为98.51%。批内重复性显示5种试剂盒在浓度1、浓度2、浓度3水平重复检测DNA的Ct值变异系数均<5%;在浓度1与浓度4梯度区间,试剂盒的阳性检出能力比较显示试剂盒A、B、D较高,为11/12,试剂盒C和E较低,为8/12。结论5种试剂盒的真实性和可靠性较好,灵敏度和符合率稍有差别,特异度均为100%;重复性较好,检测性能良好。部分试剂盒对弱阳性样本的检出能力不强,该类样本可使用多种试剂盒复核,以保障结果的准确性。     

小肠结肠炎耶尔森菌在中国家畜家禽间分布的研究

目的为了解中国小肠结肠炎耶尔森菌在不同家畜、家禽中的分布规律,对不同地区家畜、家禽进行带菌状况调查。方法采集中国不同地区家畜、家禽咽拭子,肛拭子和粪便标本进行小肠结肠炎耶尔森菌分离培养,并对分离到的菌株进行血清分型、生物分型及毒力相关基因检测。结果猪中小肠结肠炎耶尔森菌携带率最高为12.91%,其次为犬,携带率为9.80%,两者分离的致病性菌株所占比例分别为73.50%和59.44%。而其他动物中小肠结肠炎耶尔森菌携带率较低,鸡、牛和羊分别为4.50%、2.78%和0.89%,且主要以非致病性菌株为主,分别占100%、94.44%和93.33%。结论首次在中国进行大规模家畜、家禽中小肠结肠炎耶尔森菌分布调查。动物中小肠结肠炎耶尔森菌感染率存在较大物种差异和地域性分布特征,猪、犬是小肠结肠炎耶尔森菌的主要储存宿主和传染源,而牛、羊、鸡、鸭等主要携带非致病性小肠结肠炎耶尔森菌,属于偶然宿主。     

DNA条形码技术在河北省坝上地区夜行鼠鉴定中的应用

目的以河北省坝上地区捕获的夜行鼠为对象,应用DNA条形码技术进行鼠类鉴定。方法在河北省坝上地区采集鼠肝脏标本,并保存整只鼠,制作标本,提取DNA,采用通用引物PCR法扩增细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因,并测序。将测序结果与Gen Bank中其他鼠类的DNA条码进行Blast比对,并构建分子进化树。结果 36份样本均能通过PCR扩增出特异性COⅠ基因条带,所构建的分子进化树结果与形态学鉴定结果有所不同,经头骨鉴定,进化树结果正确无误,更正形态学鉴定结果。其中2只夜行鼠未能在Gen Bank中找到同源性较高的鼠类基因,且头骨受到严重损坏,暂无法确定鼠种。结论 DNA条形码技术能够对鼠类进行有效的物种鉴定。     

我国病媒生物监测与控制现状分析及展望

我国丰富的气候条件、地理景观和生态环境孕育了多样性的病原、宿主动物和病媒生物,导致病媒传播疾病广泛分布和频繁发生,对我国人群健康造成极大危害。病媒生物监测与控制是病媒传播疾病预防和控制的根本措施。20世纪之前,鉴于人类对病媒生物认识不足,致使病媒生物防控工作相对迟缓。新中国成立后,我国病媒生物监测与控制得到重视和加强,但也走过一些弯路[1]。改革开放以来,特别是进入21世纪后,我国政府加强了病媒生物监     

鸟-胞内分枝杆菌复合群鸟和胞内分枝杆菌亚种对20种药物的敏感性特征及亚种间药物敏感性比较

目的 分析鸟-胞内分枝杆菌复合群鸟分枝杆菌亚种和胞内分枝杆菌亚种对20种药物的敏感性特征及比较2个亚种间的药物敏感性差异。方法 用微孔板Alamar blue显色法分别检测97株鸟分枝杆菌和172株胞内分枝杆菌对克拉霉素、卷曲霉素和利福布丁等20种药物的最小抑菌浓度,判断其敏感性,分析2个亚种菌株对20种药物的敏感性特征以及对利福霉素类、氨基糖苷类和大环内酯类内药物的交叉耐药性,并比较2个亚种对20种药物的敏感性差异。结果 对鸟分枝杆菌敏感率高于80%的药物依次是卷曲霉素(100%,97/97)、阿米卡星(97.9%,95/97)、利福布丁(96.9%,94/97)、利福平和卡那霉素(83.5%,81/97)及克拉霉素(82.5%,80/97);对胞内分枝杆菌敏感率高于80%的药物依次是阿米卡星(99.4%,171/172)、卡那霉素(95.9%,165/172)、利福布丁(95.4%,164/172)、克拉霉素(94.2%,162/172)、氯法齐明(87.2%,150/172)、卷曲霉素和罗红霉素(86.1%,148/172)及利福喷丁(82.6%,142/172)。97株鸟分枝杆菌分别有1株、1株和17株而172株胞内分枝杆菌中分别有0株、7株和6株同时对氨基糖苷类、利福霉素类和大环内酯类内各种药物同时耐药或中度敏感。鸟分枝杆菌对利福平和卷曲霉素的敏感率明显高于胞内分枝杆菌。胞内分枝杆菌对利福喷丁、妥布霉素、卡那霉素、乙胺丁醇、莫西沙星、克拉霉素、阿奇霉素和罗红霉素的敏感率均高于鸟分枝杆菌。结论 鸟和胞内分枝杆菌均对卷曲霉素、阿米卡星、利福布丁和克拉霉素敏感性较高,对胞内分枝杆菌敏感的药物多于鸟分枝杆菌,利福喷丁仅对胞内分枝杆菌抗菌性较好,而利福平仅对鸟分枝杆菌抗菌性较好,乙胺丁醇对两个亚种敏感性均较差;对同一种类的药物做药物敏感性试验可为临床医生治疗鸟或胞内分枝杆菌感染选择合适的替代药物做依据。     

我国艰难梭菌流行特征和研究进展

艰难梭菌被认为是抗生素和医疗机构相关性腹泻的主要病原,被美国疾病预防控制中心列为抗生素相关的紧迫公共卫生威胁之一。 近10年来,我国艰难梭菌感染的发生率显著上升,艰难梭菌的研究也日益深入,本研究旨在结合已有报道和研究成果,对我国艰难梭菌的流行特征进行总结,并展望领域内的热点问题,以期对未来研究提供参考。     

tdh+与tdh?副溶血弧菌耐药表型与基因型差异分析

  目的  描述tdh+与tdh?副溶血弧菌表型与基因型耐药差异,分析耐药基因型与耐药表型之间的关系。  方法  采用K-B纸片法检测208株tdh+与73株tdh?副溶血弧菌对临床及水产养殖中常用的7类16种抗生素的敏感性,使用新一代测序技术获得实验菌株的全基因序列,通过序列比对分析基因组中耐药基因及耐药相关基因突变情况。 分析耐药表型与基因型之间的关系。  结果  tdh+菌株和tdh?菌株对亚胺培南均100%敏感。 tdh+菌株对头孢吡肟、阿奇霉素耐药率（0.48%、8.65%）高于tdh?菌株（0.00%、4.11%）;tdh?菌株对氨苄西林、头孢西汀、头孢曲松、环丙沙星、萘啶酸、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、磺胺甲恶唑、复方新诺明、四环素、多西环素、氯霉素耐药率均高于tdh+菌株。 tdh?菌株的多重耐药率（34.25%）高于tdh+菌株（19.23%）。 耐药基因共检出5类7种,其中β-内酰胺类bla_CARB基因在所有的tdh+菌株和tdh?菌株均检出;四环素类tet（34）基因在tdh+与tdh?菌株基因携带率分别为99.52%、98.63%;喹诺酮类耐药基因qnrS5 仅在tdh+菌株中检出;tdh?菌株中叶酸代谢抑制类（sul2）、四环素类［tet（35）、tet（59）］、苯丙醇类（floR）耐药基因检出率高于tdh+菌株。 共在14株（tdh+9株,tdh?5株）细菌中检索出6种耐药基因点突变方式,均为编码16S rRNA的rrs基因突变。  结论  tdh?副溶血弧菌耐药现象较tdh+副溶血弧菌更为严重; 16S rRNA的rrs基因突变是除aph（3'）-Ib、aac（3）-Ⅱ、aac（6’） -I、aph（3'）-Id等耐药基因外副溶血弧菌对氨基糖胺类药物耐药的主要机制之一;副溶血弧菌中,可用bla_CARB耐药基因存在情况预测副溶血弧菌氨苄西林耐药表型;除此之外其余抗生素耐药表型与其对应耐药基因之间未见明确的对应的关系。