人源抗TLR4抗体IgG的制备及其中和特性分析

目的:构建全人源抗人Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抗体轻?重链表达载体,在293Free style 细胞中表达并纯化,分析该重组全分子抗体的生物学活性?方法:设计引物扩增全人源抗人TLR4抗体可变区编码序列,将其分别克隆到真核表达载体pFUSE-CHIg-hG1和pFUSE-CLIg-hl中,共转染至293Free style 细胞,表达产物用protein A亲和层析柱纯化?应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)?Western blot?免疫共沉淀?质谱分析及蛋白芯片检测抗体的免疫学特性,并检测该抗体对人单核细胞淋巴瘤THP1细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α表达的影响?结果:成功构建全人源抗人TLR4抗体真核表达载体,获得的全分子抗TLR4抗体保持了与抗原的结合活性,对THP-1细胞TNF-α表达的抑制率可达85.7%?结论:重组全人源抗TLR4 IgG保持了与TLR4的结合特异性,并具有明显的中和作用,对炎症治疗具有潜在的应用价值?     

MAGE-A9在乳腺癌组织中的表达及临床意义CSCD

目的检测MAGE-A9在乳腺癌中的表达情况,分析其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法在组织芯片上(70例乳腺癌标本及20例癌旁对照标本)进行免疫组化检测,使用Cox回归法及Kaplan-Meier生存分析法进行乳腺癌病人的预后评估。结果免疫组化结果显示乳腺癌中的MAGE-A9表达明显高于癌旁对照组的表达(P<0.05)。MAGE-A9的表达与乳腺癌病人的肿瘤组织学分级、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有重要关联(P均<0.05)。生存分析显示MAGE-A9阳性、TNM分期与乳腺癌病人预后关系密切,MAGE-A9高表达提示病人预后不良。结论 MAGE-A9在乳腺癌组织中异常高表达且MAGE-A9的表达与乳腺癌病人的多项重要临床指标相关。MAGE-A9可作为乳腺癌病人预后的独立危险因素。     

水溶媒剂型在蚊香系列的应用研究

目的用水作为滴加、释放媒介,制作盘式蚊香、电热片蚊香和电热液体蚊香。方法通过溶解-乳化-包裹等加工工艺,研制水溶媒母液,对盘式蚊香、电热片蚊香进行药剂滴加,以及用于电热液体蚊香,并根据国标方法对药效、毒性、稳定性进行了实验研究。结果研制的15%氯氟醚菊酯、15%四氟甲醚菊酯母液,将母液用水稀释,用于制作氯氟醚菊酯、四氟甲醚菊酯盘式蚊香、电热蚊香片和电热液体蚊香;经检测,0.35%水剂盘式蚊香KT50为4.93和4.52 min,电热片蚊香通电8 h后的KT50为2.90和4.53 min,电热液体蚊香通电360 h后的KT50为3.43和3.53 min,模拟现场1 h击倒率除氯氟醚水剂外均达到90%以上,急性毒性试验显示均为低毒级。结论以水代替油作为溶媒,大大减少了煤油的用量,降低了CO2的排放,可以此降低企业成本,实现低能耗、低污染、低排放。     

建立染料法荧光定量PCR检测恙虫病东方体

目的建立染料法荧光定量PCR检测恙虫病东方体。方法根据恙虫病东方体56kD外膜蛋白基因序列设计特异性引物,建立染料法(SYBR green I)实时荧光定量PCR,评估其灵敏性及特异性;并对恙虫病东方体鸡胚培养物、东方体感染小白鼠脏器标本以及恙虫病病人血样等多种样本进行检测。结果建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r2=0.99),灵敏性评估显示20μl体系单PCR反应管靶基因大于28个拷贝即可被有效检测,最低检出浓度为2拷贝/μl,比普通PCR检测方法提高1~2个数量级,并且具有较好的重复性;建立的SYBR I染料法具有良好的特异性,与立氏立克次体R株等其他5种立克次体,以及被检测的其他几种病原菌DNA模板均不发生特异性扩增;用建立的染料法对东方体鸡胚培养物、东方体感染动物脏器,以及采集的现场恙虫病病人血样共59份标本进行检测,其中57份检出阳性。用该定量PCR检测恙虫病东方体实验感染小鼠的血、脾脏、肾脏、肝脏标本,结果脾脏中东方体检出量最多,肝脏和肾脏次之,血中的恙虫病东方体量较低。结论本研究建立荧光定量PCR方法均具有很高的特异性和敏感性,适合各种样本中东方体的快速检测,可用于实验室的快速诊断。     

我军血吸虫病流行病学研究回顾与今后任务

半个世纪以来,我军在与血吸虫病斗争中进行了系列的流行病学研究,通过系统的回顾与总结,提出了今后任务。(1)部队疫情:着重介绍建国初期及近年几起血吸虫病急性感染实例,以及给疫区及临时进驻疫区执行任务的部队官兵造成的严重危害。(2)调查研究:概括了各个时期我军在血吸虫病感染方式、个体防护、尾蚴调查及杀灭、快速侦检、预防服药方面调查研究所取得的系列成果。(3)防病经验:我军在军事演习、泅渡训练、农业生产、抗洪抢险等方面预防血吸虫病的主要成效和基本经验。(4)今后任务:探讨我军今后血吸虫病流行病学研究应着重解决的早期诊断与快速侦检、疫水消毒、灭螺、个体防护、预防服药和疫苗等方面的问题,为保障广大官兵身体健康及部队战斗力服务。     

急性乙型肝炎HBcAg特异性CTL克隆建立及初步分析

目的建立急性乙型肝炎（乙肝）患者的HBcAg特异性CD8^＋T细胞克隆。方法一例急性乙肝患者经用序列特异引物聚合酶链反应分型技术,测得其人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）-A基因型为1101,其外周血单个核细胞采用重组HHBcAg和合成的HLA—A＊1101限制性表位肽（HBV croe88—96）刺激,并以有限稀释法对活化的T细胞进行克隆化,建立HBcAg特异性的CD8^＋T细胞克隆。用免疫荧光染色、流式细胞术以及乳酸脱氢酶释放实验鉴定所获克隆。结果获得13株HBcAg＋特异性CD8^＋咖胞克隆（6侏为Tc1,3株为Tc2,4株为Tc0）。其中12株具有明显的特异性细胞毒沂陛（37．5％-85．5％,效／靶比为2．5：1）,1株（A10株,Tc0）细胞毒活性仅为10．2％。结论应用HLA—A＊1101限制性表位肽（HBV croe88—96）刺激急性乙肝患者的外周血单个核细胞,建立了13株肽表位特异性的CD8^＋T细胞克隆,为进一步研究打下基础。     

慢性HBV感染者CD8^＋ T细胞免疫反应的研究

目的观察不同慢性HBV感染者外周血CD8^＋ T细胞的细胞内毒性颗粒和细胞因子的表达水平。方法用rHBcAg作为刺激剂,采用免疫荧光染色结合流式细胞术分析慢性乙型肝炎中度、重度患者以及无症状HBV携带者外周血CD8^＋ T细胞的IFN-γ/IL-4和穿孔素/颗粒酶B表达水平。结果慢性乙型肝炎重度患者CD8^＋T细胞的穿孔素及颗粒酶B百分率显著高于正常对照（P〈0.01）和HBV携带者（P〈0.05,P〈0.01）,中度患者显著高于正常对照（P〈0.05）。2组慢性乙型肝炎IFN-γ＋/CD8^＋ T细胞（Tc1）百分率均高于正常对照和HBV携带者（P〈0.05）。HBV携带者CD8^＋T细胞的穿孔素和颗粒酶B表达以及Tc1百分率与健康对照差异无统计学意义。IL-4^＋/CD8^＋ T细（Tc2）表达各组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 CD8^＋ T细胞中穿孔素/颗粒酶B表达率的增加以及Tc1细胞增加与慢性HBV感染的肝损伤有关。     

蝙蝠携带重要人兽共患病毒研究进展

蝙蝠是多种重要人兽共患病毒的储存宿主,迄今为止已在蝙蝠体内分离到80多种病毒,随着二代测序等技术的发展,新的蝙蝠病毒还将不断被发现.研究显示,有25个病毒科病毒能够感染脊椎动物,其中有10个科被证实与蝙蝠有关,包括黄病毒科、布尼亚病毒科、副粘病毒科、丝状病毒科、弹状病毒科、冠状病毒科、披膜病毒科、正粘病毒科、呼肠孤病毒科等.除此之外,蝙蝠还被证实可携带禽流感病毒、森林脑炎病毒等.大部分病毒曾引起人或动物间的疾病流行,有些病毒还会导致蝙蝠个体的发病和死亡.因此,从人类健康和蝙蝠生态保护角度来看,研究蝙蝠携带病毒的病毒谱、蝙蝠和病毒的关系、可能的传播途径以及潜在危害性等,对我们全面认识蝙蝠携带病毒特性及加强蝙蝠传播病毒的防治十分重要.     

应用噬菌体肽文库筛选McAb F3特异性结合肽

目的：应用噬菌体展示肽文库筛选可与抗汉坦病毒囊膜蛋白单抗F3特异性结合的配体肽。方法：采用protein-A亲和层析纯化的F3单抗为筛选配基，对噬菌体展示的随机12肽文库进行生物亲和淘洗，夹心ELISA、竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性，并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果：通过3轮生物淘洗，能被抗体捕获的噬菌体克隆为91．7％（11／12）；ELISA测定显示筛选到的噬菌体短肽能与F3单抗特异性结合；序列分析表明7个阳性克隆氨基酸序列相同，均为－MHGPTKNQMWHT，同源性分析显示该序列与HTNV／SEOV M蛋白G2区第750－759位氨基酸有较高的同源性，结论：获得了具有良好结合活性的模拟表位肽，为基于表位水平的HFRSV（肾病综合征出血热病毒）特异性分子多肽疫苗的设计提供了重要依据。     

HCV NS5A基因在hepG2细胞中的表达以及对PI3K的影响

目的：探讨HCV—NS5A对PI3K表达的影响。方法：应用PCR技术从含有HCV全长开放阅读框的质粒中获得NS5A全长基因片段，利用基因重组技术将其克隆至真核表达载体pcDNA3．0（-）中。通过酶切、PCR及测序鉴定，NS5A基因已正确插入到pcDNA3．0（-）中，再利用脂质体转染HepG2细胞。结果：经RT—PCR及Western blot检测，HCV的NS5A基因在HepG2细胞中获得表达，而且在表达重组NS5A的转染HepG2细胞中，检测到PI3K蛋白的表达。结论：NS5A可在体外激活PI3K及其信号通路。