实时定量PCR技术诊断PCP的研究进展

肺孢子菌肺炎(PCP)是一种由耶氏肺孢子菌引起的致死性肺炎,常见于免疫功能低下人群,早期诊断有助于临床治疗.目前常用的病原学检查漏诊率较高;定性PCR检测虽然敏感,但有时难以区分隐性感染和显性感染.实时定量PCR是近年来发展的一种精确、敏感、污染少的核酸定量技术.本文综述结果表明,实时定量PCR技术能快速、敏感、特异地...     

嗜酸性粒细胞与蠕虫感染

嗜酸性粒细胞（Eosinophil,Eos）是参与人体免疫反应的一种效应细胞,当有寄生蠕虫感染时被激活,比例可高达40%,在抗蠕虫感染中具有重要作用,本文就Eos的结构、功能以及在抗蠕虫感染中的免疫保护和组织损伤作用作一综述。     

刚地弓形虫表面抗原的功能和应用

刚地弓形虫的表面抗原是弓形虫在感染宿主的过程中有着重要作用的一类蛋白,它们在弓形虫吸附和侵入宿主、免疫调节、虫体的存活等方面发挥着重要的作用。因此,对这些蛋白进行研究,将有助于我们更好的了解刚地弓形虫的致病机制、探寻预防和治疗弓形虫病的有效方法。现就目前为止发现的刚地弓形虫表面抗原及其功能作一综述。     

弓形虫致密颗粒蛋白GRA7的全基因原核重组表达

目的克隆弓形虫RH株致密颗粒蛋白7（GRA7）的全长基因,在大肠杆菌工程菌中重组表达GST-His-GRA7融合蛋白。方法提取弓形虫总RNA,反转录获得cDNA,PCR扩增GRA7基因全长,与pET-41Ek／LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌RosettaTM（DE3）pLysSSE程菌中诱导表达重组融合蛋白,最后采用SDS-PAGE和Westernblotting鉴定重组蛋白产物。结果构建了弓形虫GRA7全基因的重组表达质粒,诱导表达了GST-His-GRA7融合重组蛋白,分子量为62kD,与预测结果相符。结论研究获得了弓形虫GRA7全基因的重组蛋白,为进一步研究弓形虫GRA7抗原性及其与宿主细胞的相互作用奠定了基础。     

弓形虫分泌蛋白ROP5的全基因原核重组表达与抗原性鉴定

目的在大肠杆菌工程菌中重组表达刚地弓形虫RH株棒状体蛋白5(ROP5)的融合蛋白GST-6×His-ROP5,并初步评价重组蛋白的抗原性。方法体外细胞培养弓形虫速殖子,提取总RNA,反转录获得cDNA,PCR扩增ROP5基因全长,与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌RosettaTM(DE3)pLysS工程菌中诱导表达重组融合蛋白,最后通过Western blotting鉴定重组蛋白rROP5的抗原性。结果构建了弓形虫ROP5全基因重组表达质粒,诱导表达了GST-6×His-ROP5融合蛋白,分子量为96 kDa,与预测结果相符,重组蛋白与人源抗血清有显著免疫印迹反应。结论本研究获得了弓形虫ROP5全长重组蛋白,为进一步改进弓形虫诊断抗原,研究蛋白结构以及分泌蛋白与宿主细胞的相互作用奠定了基础。     

应用生物素标记与蛋白质组学方法分离鉴定弓形虫表面蛋白和分泌蛋白北大核心CSCD

目的分离和鉴定刚地弓形虫RH株速殖子表面蛋白和分泌蛋白。方法在绿猴肾Vero细胞株中体外培养弓形虫RH株速殖子,利用滤膜和Percoll细胞分离液分离纯化速殖子。将纯化的速殖子用生物素标记后,裂解虫体,采用亲和素凝胶珠分离生物素标记的弓形虫表面蛋白和分泌蛋白。对分离得到的蛋白进行浓缩和密度梯度凝胶电泳。将电泳条带分段切胶,回收蛋白后,酶切,应用液相色谱和两级质谱联用技术(LC-MS/MS)进行蛋白鉴定。结果共鉴定出785种弓形虫蛋白,其中81种为基因组注释的表面或分泌蛋白,占10.3%。785种蛋白中,检测到同一种蛋白多肽的次数(PSM值)>10的蛋白有65种,其中43种为基因组注释的表面蛋白或分泌蛋白,占66%,余22种为预测的未知蛋白。结论应用生物素标记和亲和素层析分离了弓形虫表面蛋白和分泌蛋白,并初步鉴定了一批潜在的弓形虫新表面蛋白和分泌蛋白。     

Felty综合征

Felty综合征是指具有类风湿性关节炎、粒细胞减少和脾大的三联征,是类风湿性关节炎的一种少见特殊类型.本文对Felty综合征临床特点进行阐述.     

70株志贺菌属血清分型及耐药分析

目的分析医院细菌性痢疾的流行菌株类型及耐药特点。方法对医院肠道门诊腹泻患者的粪便标本进行细菌分离培养、鉴定和血清分型,并以K-B琼脂法进行药敏实验。结果在检出的70株志贺菌属中,弗氏志贺菌37株、宋内志贺菌33株,未分离出志贺菌属的其他型别;70例菌株对传统抗菌药物中的四环素、复方新诺明、氨苄西林、利福平、萘啶酸的耐药率均>62%,对喹诺酮类的常用药诺氟沙星耐药率较低为12.8%,而头孢类的耐药率<10%。结论医院细菌性痢疾流行株主要是弗氏志贺菌和宋内志贺菌,多重耐药率较高,达到77.1%,临床治疗可首选头孢菌素类药物,庆大霉素和诺氟沙星次之。     

山西省泽州县晋庙铺镇肺吸虫病流行病学调查

目的 调查山西省泽州县晋庙铺镇肺吸虫病的流行环节及态势,掌握当地居民对肺吸虫病知识的了解,为进一步预防肺吸虫病提供开展健康教育的依据.方法 采用问卷方法调查农村居民(2172名)对肺吸虫病的认识,及有无食蟹史、食蟹方式;以皮内试验方法过筛,酶标免疫法进一步检测抗体;并调查中间宿主的感染情况.结果 肺吸虫病知晓率0%,人群食蟹率67.7%(1471/2172),蟹的带囊率96.7%(29/30),人群皮试阳性率11.1%(241/2172);血清阳性率4.1%(89/270).结论 肺吸虫病的传播和流行与人们的饮食行为密切相关,大力开展肺吸虫病科普知识的宣传,改变不良的生活和饮食习惯,以减轻寄生虫病的危害.     

恶性疟原虫自噬相关蛋白8基因原核重组表达及多克隆抗体制备

目的 通过pET-41 Ek/LIC载体在大肠杆菌工程菌中重组表达恶性疟原虫自噬相关蛋白8（PfAtg8）基因的重组蛋白GST-PfAtg8-6×His,并用蛋白免疫法制备小鼠抗自噬相关蛋白8（PfAtg8）的多克隆抗体,并验证其效价。 方法 体外培养恶性疟原虫3D7株,并提取DNA,PCR扩增PfAtg8序列全长,与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌Rosetta^TM（DE3）PLysS工程菌中诱导表达重组蛋白GST-PfAtg8-6×His,蛋白免疫法制备鼠抗PfAtg8的多克隆抗体并用Western blots和酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）进行效价验证。 结果 PCR扩增PfAtg8基因并插入pET-41 Ek/LIC载体,转化入大肠杆菌。诱导表达并纯化重组蛋白,进而利用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,经验证该抗体可对重组蛋白进行特异性识别,且效价可达1∶100 000。结论 成功表达、纯化了GST-PfAtg8-6×His重组蛋白,并免疫小鼠获得多克隆抗体血清。