实时定量PCR技术诊断PCP的研究进展

肺孢子菌肺炎(PCP)是一种由耶氏肺孢子菌引起的致死性肺炎,常见于免疫功能低下人群,早期诊断有助于临床治疗.目前常用的病原学检查漏诊率较高;定性PCR检测虽然敏感,但有时难以区分隐性感染和显性感染.实时定量PCR是近年来发展的一种精确、敏感、污染少的核酸定量技术.本文综述结果表明,实时定量PCR技术能快速、敏感、特异地...     

应用生物素标记与蛋白质组学方法分离鉴定弓形虫表面蛋白和分泌蛋白北大核心CSCD

目的分离和鉴定刚地弓形虫RH株速殖子表面蛋白和分泌蛋白。方法在绿猴肾Vero细胞株中体外培养弓形虫RH株速殖子,利用滤膜和Percoll细胞分离液分离纯化速殖子。将纯化的速殖子用生物素标记后,裂解虫体,采用亲和素凝胶珠分离生物素标记的弓形虫表面蛋白和分泌蛋白。对分离得到的蛋白进行浓缩和密度梯度凝胶电泳。将电泳条带分段切胶,回收蛋白后,酶切,应用液相色谱和两级质谱联用技术(LC-MS/MS)进行蛋白鉴定。结果共鉴定出785种弓形虫蛋白,其中81种为基因组注释的表面或分泌蛋白,占10.3%。785种蛋白中,检测到同一种蛋白多肽的次数(PSM值)>10的蛋白有65种,其中43种为基因组注释的表面蛋白或分泌蛋白,占66%,余22种为预测的未知蛋白。结论应用生物素标记和亲和素层析分离了弓形虫表面蛋白和分泌蛋白,并初步鉴定了一批潜在的弓形虫新表面蛋白和分泌蛋白。     

机会性感染的现状与展望

医学发展到今天,传染病的发生和流行已得到了有效的控制,某些烈性传染病有的已被消灭或接近消灭,这表明人类在同感染性疾病的斗争中取得了一定的胜利,然而随着社会和环境的变迁,人类的疾病谱也不断发生着变化,如一些先前不被重视的感染性疾病如机会性感染已成为临床比较棘手的难题,某些情况下,免疫低下导致的机会性感染比原发基础疾病更为凶险。因而,机会性感染已成为临床各项工作的重要研究课题,本文就机会性感染的现状和相关研究的发展作一概述。     

多重PCR检测方法在儿童流感样病例病原检测中的临床价值（附94例报告）

目的　探讨多重聚合酶链反应（PCR）检测方法在儿童流感样病例病原检测中的临床应用价值,了解儿童流感样病例病原情况。方法　收集2018年11月至2019年2月北京地区94例儿童流感样病例咽拭子标本,采用多重PCR核酸检测技术测定甲型流感病毒（InfA）、 甲型流感病毒H1N1（InfA-H1N1）、 甲型流感病毒H3N2（InfA-H3N2）、 乙型流感病毒（InfB）、 人副流感病毒、 呼吸道合胞病毒（RSV）、 人腺病毒（HADV）、 人鼻病毒（HRV）、 人博卡病毒、 人偏肺病毒（HMPV）、 人冠状病毒（HCoV）和肺炎支原体（MP）、 衣原体13种病原核酸。结果　94例标本中78例（82.98%）可测出病原,其中69例（73.40%）检出1种病原,9例（9.57%）检出2种病原; 94例标本中52例（55.32%）检出流感病原,26例（27.66%）检出非流感病原。单一病原检出由多到少为InfA-H1N1 31例,InfA-H3N2 10例,RSV 9例,HMPV 7例,InfA、 HRV、 HADV各3例,InfB、 HCoV及MP各1例。9例检出2种病原的标本中,6例检出流感分别合并其他病毒（HRV、 HADV、 RSV、 HCoV、 HMPV）,1例检出甲流H1N1和H3N2,2例分别检出RSV、 HRV及HCoV、 HADV。结论　非流感病原微生物引起流感样病例并不少见,多重PCR检测有助于全面了解流感样病例的病原和混合感染情况。     

卡氏肺孢子虫肺炎的治疗策略进展

卡氏肺孢子虫肺炎（pneumocystis carini ipneu-monia,PCP）是由机会性致病病原体卡氏肺孢子虫（pneumocystis carinii,PC）寄生于人体,引起的一种威胁人类健康的机会感染性肺炎。它是机体免疫功能低下时极易诱发的常见并发症和致死的主要原因．主要见于HIV感染后、器官移植后、营养不良、肿瘤化疗期间等^[1]。     

脑囊虫病患者细胞因子表达不平衡——系统性回顾及Meta分析

脑囊虫病可能导致患者中枢和外周免疫系统的功能障碍,然而,在个别研究中细胞因子表达特征的结果是相互矛盾的.本研究目的是系统地分析囊尾蚴感染状态下脑囊虫病患者细胞因子表达特征研究结果,整合中枢和外周细胞因子变化的证据.我们进行了一项meta分析,针对脑囊虫病患者中枢及外周细胞因子浓度与对照组比较的研究.该研究纳入14个研究,共518例脑囊虫病和386个对照包括在内.总体而言,干扰素-γ(IFN-γ)的浓度(P值=0.0005)和IL-2(P＜0.00001)显著较低,但肿瘤坏死因子-a(TNF-α) (P＜0.000 01),IL-4(P=0.00001),IL-10(P＜0.00001)和sIL-2R(P＜0.00001)在脑囊尾蚴病的患者显著高于对照组.对IL6和IL-8表达水平在囊虫患者和对照组之间没有显著差异.sIL-2R和IL-6在脑囊虫病患者脑脊液水平显著降低,该结果仅由唯一的一项研究支持.这项分析提示TH1/TH2细胞因子表达失衡可能参与脑囊虫病患者发病机理.     

新冠肺炎疫情对于输入性热带疾病临床诊治的影响和对策

目前,输入性新冠肺炎已经成为当前疫情防控的重点。每年我国均有疟疾、登革热等热带疾病的输入性病例,这些热带疾病也均以发热为表现,若不及时诊治不仅可能危及患者生命,还可能造成继发本地传播的风险。因此,针对入境的发热患者不仅需要继续完善和落实针对新冠肺炎患者的隔离筛查工作,还需要将输入性热带疾病等因素进行统筹考虑。因此,本文着重分析新冠肺炎对输入性热带疾病临床诊治的影响及应对策略,从而为临床诊治提供参考。     

荧光定量PCR检测卡他莫拉杆菌感染的实验室诊断方法学建立及应用

目的 建立荧光定量PCR检验卡他莫拉杆菌的实验室诊断方法并检验临床样本.方法 针对卡他莫拉杆菌外膜蛋白COPB设计引物及探针;构建含卡他莫拉杆菌目的基因片段的质粒,梯度稀释后作为标准品,绘制标准曲线;验证实验方法的敏感性;通过检测7种病原体标准株验证该方法的特异性.用新建荧光定量PCR检测321例诊断为哮喘的儿童患者咽拭子标本.结果 绘制新建荧光定量PCRTaqman探针法检测质粒标准品的标准曲线,新建实验室诊断方法的敏感性可达10拷贝/反应,研究方法可成功区分卡他莫拉杆菌与其他6种病原体DNA.检测321例临床咽拭子样本,卡他莫拉杆菌阳性25例,阳性检出率为7.79%.结论 新建荧光定量PCR法具有较高的灵敏度、特异性,能简单、快速、准确、灵敏地检测卡他莫拉杆菌,可以应用于临床样本的检测.     

建立巢式PCR和异源双链法检测石蜡标本麻风菌DDS耐药株

目的：为了能检出石蜡包埋组织中麻风菌氨苯砜（DDS）的耐药基因folPl，有必要建立敏感、特异的巢式PCR，为开展回顾性麻风菌DDS耐药流行病学研究服务。方法：从石蜡组织中提取麻风菌DNA，建立巢式PCR，优化PCR条件，扩增DDS耐药基因片段。用异源双链法筛选突变菌株，并经直接测序进一步证实。结果：巢式PCR将PCR检测folPl的敏感性，从6．5％（3／46）提高到76．7％（33／43）；优化后的巢式PCR，最终使敏感性更进一步提高至90．7％（39／43）。8株folPl突变菌、两种突变型被发现。结论：巢式PCR是一项快速、简便、可行的方法。通过优化多项PCR条件，提高了石蜡包埋组织中folPl检测的敏感性和特异性。异源双链法可用于筛选DDS耐药突变菌株。     

北京市1990～2005年麻风患者分析

北京市是麻风病低流行区，但近年来人口流动频繁，至2004年流动人口已增至365万，约占全市人口的1／4。北京热带医学研究所无可非议地成为麻风病诊治中心。本文将我所近16年来确诊的26例麻风患者，分析如下。