神经突起因子酵母双杂交诱饵质粒构建和转化

目的构建和转化神经突起因子（Neuritin）的酵母诱饵重组质粒，为通过酵母双杂交研究Neuritin的功能及作用机制奠定基础。方法用PCR扩增neuritin全长eDNA中编码开放读框的基因片段；将该基因片段与pLexA载体定向重组；用酶切和测序鉴定重组质粒；将核苷酸序列正确的重组质粒转化入EGY48[p8op—LaeZ]酵母菌株。结果成功构建pLexA-neufitin重组质粒。转化有重组质粒和pLexA空载体的2种EGY48[p8op—LaeZ]酵母都能在SD／Gal／Raf／-His／-Ura培养基中长成白色菌落，同时，转化pLexA-pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落，但都不能在SD／-His／-Leu／-Ura培养基中生长，在SD／-His／-Ura液中培养16h后，A600均值均为0．9。表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和laeZ酵母报告基因表达的活性，也没有酵母毒性作用。结论构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选。     

复方盐酸罂粟碱-甲磺酸酚妥拉明凝胶剂的HPLC测定

盐酸罂粟碱（papaverine hydrochloride，1）是非特异性磷酸二酯酶抑制剂，能增加阴茎勃起组织中环磷酸腺苷（cAMP）和环磷酸鸟苷（cGMP）浓度。甲磺酸酚妥拉明（phentolamine mesylate，2）是α-肾上腺素受体的竞争性拮抗剂，对中枢和外周均有作用。临床通常将1、2合用，通过阴茎海绵体注射给药治疗男性性功能障碍，但存在较大的不良反应。采用透皮给药可避免或降低海绵体注射引起的很多毒副作用，使用方便。本研究参考文献建立了HPLC法同时测定自制复方透皮凝胶剂中1、2含量，方法灵敏准确。     

Caspase-3 mRNA反义核酸对γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡及caspase-3表达的抑制

为进一步研究caspase-3在γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡中的作用，探索细胞凋亡过度疾病基因治疗的新途径，本实验将我们初选的两条caspase-3 mRNA反义寡核苷酸(ASODN-1，针对5′-非编码区；ASODN-2，针对翻译起始区)用脂质体转染入HL-60细胞，10Gy γ-射线照射诱导细胞凋亡，     

血管紧张素转换酶基因插入/缺失多态性与维吾尔族人群高血压病的关系

目的探讨血管紧张素转换酶基因的插入/缺失多态性与新疆维吾尔族人群高血压病之间的关系。方法应用聚合酶链反应对361例维吾尔族高血压病患者和400例正常血压者的血管紧张素转换酶基因16内含子插入/缺失多态性进行检测,测定血清总胆固醇、甘油三酯、血糖和总胆红素等生物化学指标,Logistic回归分析各基因型和等位基因频率与新疆维吾尔族原发性高血压的关系。结果将维吾尔族人群用Logistic回归模型校正年龄、性别、肥胖指数、腰围、臀围、盐摄入量、血糖、甘油三酯及总胆固醇之后,血管紧张素转换酶基因插入/缺失多态性与高血压病的发生相关,偏回归系数β值为0.246(P=0.0302),携带突变型纯合子DD个体患高血压的风险为II基因型的1.51倍(P=0.038)。结论血管紧张素转换酶基因插入/缺失多态性与新疆维吾尔族人群高血压发病相关,DD基因型可能是维吾尔族人群高血压发病的风险因子。     

BDNF的酵母双杂交诱饵载体的构建和初步鉴定

目的：构建和转化脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究BDNF的功能及作用机制奠定基础。方法：用PCR扩增BDNF基因cDNA中编码完整开放阅读框的基因片段;将该基因片段与plexA载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;将核苷酸序列正确的重组质粒转化人EGY48(p8op-LacZ)酵母菌株。结果：成功构建pLexA-BDNF重组质粒。转化有重组质粒和pLexA空载体的两种EGY48(p8Op—LacZ)酵母都能在SD／Gal／Raf／-His／-Ura培养基中长成白色菌落(同时,转化pLexA-pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落),但都不能在SD／-His／-Leu／-Ura培养基中生长,在SD／-His／-Ura液中培养16h后,OD_(600)均值均为0.9±0.1。这表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,电没有酵母毒性作用。结论：构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选。