庚型肝炎病毒NS3区聚合酶链反应临床RNA检测

庚型肝炎病毒 ( HGV)在自然人群中有较高的感染率 ,主要以携带者形式存在 ,也广泛存在于输血后肝炎、非甲～戊型肝炎患者中。为了解 HGV在我国乙型肝炎、丙型肝炎及非乙非丙型肝炎患者中的存在状况 ,我们采用 HGV NS3区逆转录 -套式-聚合酶链反应 ( RT- Nested- PCR)法检测了 1     

丙型肝炎病毒非结构基因5b区RNA检测临床应用研究

丙型肝炎病毒 (HCV)感染属世界性的传染病 ,HCV感染的检测主要依靠抗 - HCV和 HCV RNA两类检测系统。由于抗- HCV仅能说明是否有过 HCV感染 ,而不能确切地反映患者的病毒血症。 HCV RNA检测是判断 HCV感染的直接依据 ,而且逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)检测 HCV RNA是目前唯一直接检查病毒血症的方法 ,因此临床和科研工作中多采用 PCR技术直接检测血清 HCV RNA。但是 ,由于 PCR敏感性太高 ,操作步骤多而且复杂 ,因而常规 HCV RNA检测 (多选自 5′-非编码区 ,即 5′- NCR)存在极少量的污染即可造成假阳性 ,影响结…     

HCV 不同感染状态下患者外周血NK 细胞活性及T 细胞亚群的研究

ＨＣＶ感染后,能刺激机体产生体液免疫和细胞免疫应答,尽管能产生针对ＨＣＶ的各种抗体,而体液免疫并未产生有效的免疫保护作用,因此,细胞免疫显得十分重要。我们对ＨＣＶ感染后,外周免疫细胞发生的变化作了如下研究。材料与方法研究对象：２４例慢性丙型肝炎患者,１６例急性患者来自本院临床,其诊断符合１９９５年５月全国第五次传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准。连续观察１８个月,血清ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ连续３次阴性,判为ＨＣＶＲＮＡ阴转;均为阳性判为持续阳性;交替出现者为间歇阳性。２１例正常献血员来自协和医院…     

丙型肝炎病毒不同基因区的聚合酶链反应扩增

目的探讨提高聚合酶链反应（ＰＣＲ）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）病毒血症的检出率和对变异较大区域的扩增效率的方法。方法分别以ＨＣＶ基因组５＇端非编码区（５＇ＵＴＲ）、非结构基因４区（ＮＳ４）及ＮＳ５ｂ区的引物检测ＨＣＶ，并比较双退火温度与单一退火温度对ＨＣＶ基因扩增效率的影响。结果ＨＣＶ不同基因区（５′ＵＴＲ、ＮＳ４、ＮＳ５ｂ）引物的ＰＣＲ扩增阳性率分别为９２％、６２％、５９％。以双退火温度扩增ＮＳ４区与ＮＳ５ｂ区基因，扩增阳性率分别提高到７７％与７９％。将血清按原血清、１０－１～１０－１０系列稀释后检测，发现２份血清单退火温度ＰＣＲ的检出水平分别为１０－５与１０－７，双退火温度ＰＣＲ检出水平则分别提高至１０－８与１０－９稀释血清。结论５′ＵＴＲ引物对ＨＣＶＲＮＡ的检出率明显高于ＮＳ４区与ＮＳ５ｂ区引物。双退火温度ＰＣＲ可显著提高ＨＣＶＲＮＡ检出的敏感性     

我国病毒性肝炎免疫学检测史的回顾与展望

建国５０年来,病毒性肝炎的免疫学检测发展迅速,特别在１９７８年以后的几个五年计划期间,我国与发达国家同步,也开展了先进技术及试剂的研究,为病毒性肝炎的防治工作作出了应有的贡献。一、甲型肝炎１９６５年Ｄｅｉｎｈａｒｄｔ首先发现甲型肝炎可感染狨猴以后,１９７３年又分离出甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）,并确定其为单链ＲＮＡ病毒。甲型肝炎发病早期,在粪便中通过免疫电镜及聚合酶链反应（ＰＣＲ）,可检出ＨＡＶ颗粒及ＨＡＶＲＮＡ,而在血液中很难检出。患者血清中抗ＨＡＶＩｇＭ于发病数日的黄疸前期即可检出,急性期时达高峰…     

原位PCR技术及其进展

原位聚合酶链反应(ISPCR)是1990年由Haase创立的，它是PCR与原位杂交两种方法的结合。该方法不仅使组织细胞内的靶基因扩增，而且不改变靶基因的定位，它集PCR的敏感性、特异性及原位杂交的定位性于一体。ISPCR包括直接法、间接法和标记引物法，近年来很多学者用此方法进行了爱滋病毒和肝炎病毒等的研究；并不断使之完善。影响ISPCR敏感性及特异性的因素较多，如标本固定的时间、蛋白酶的浓度及PCR的条件等，因此掌握好每一技术环节十分必要。     

MAGE-1基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的:研究MAGE-1基因在肝细胞肝癌组织中的表达,结合临床资料分析,探讨MAGE-1基因与肝细胞肝癌(HCC)患者临床指标及转移与复发的关系,为MAGE-1基因编码蛋白用于HCC患者免疫治疗提供依据。方法:用RT-PCR的方法对31例HCC患者癌组织及相应癌旁组织MAGE-1基因表达进行检测,随机对6例RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序以证实其为MAGE-1基因,所有患者均测定并统计AFP、AFU、抗HCV、HBsAAg、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标。结果:31例HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率64.5％(20/31)明显高于癌旁组织2％(1/31),P<0.01。HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与患者AFP、AFU、抗HCV、乙肝标志物、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标均无关,P>0.05。结论:MAGE-1基因在HCC患者肝癌组织中特异高表达,HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与HCC患者AFP、AFU、AFPmRNA肿瘤转移、复发均无关。     

树鼩感染人乙肝病毒动物模型研究中的非特异性反应

目的：观察树是否可成为感染人ＨＢＶ的动物模型。方法：应用免疫组化及原位杂交技术，对实验组及对照组树肝组织进行研究分析。结果：应用羊抗－ＨＢｓ多抗检测树肝组织中的ＨＢｓＡｇ时，出现假阳性反应，阳性物为非目的抗原，应用生物素标记的ＨＢＶＤＮＡ探针进行肝组织原位杂交时，出现非特异性的显色反应，结论：提示在动物模型实验中，应设立严格的对照实验和应用不同反应系统进行校对考核。     

北京地区发生庚型肝炎病毒感染的初步研究

庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）是最近被证实的一种致人类肝炎病毒，用ＲＴ－ＰＣＲ法以ＧＢＶ－Ｃ的５′端非编码区的序列为引物，对北京地区４１例非Ａ～Ｅ病毒性肝炎患者检测，发现２６．８％的ＧＢＶ－Ｃ感染，他们的临床表现为，ＡＬＴ反复低水平异常，具有轻型慢性肝炎的表观，值得注意的是，虽然ＧＢＶ－Ｃ可通过血液传播但本组大部分ＧＢＶ－Ｃ患者无输血史，说地区较高ＧＢＶ－Ｃ感染率值得重视。     

中国HCV一株NS5区部分基因克隆及序列分析

研究HCVNS5基因的结构与功能，为进一步研制适合我国使用的第3代抗-HCV试剂打下基础。方法：自行设计引物，从河北固安县慢性丙型肝炎患者血中，用逆转录-聚合酶链反应扩增出HCVNS5基因，并将其克隆到载体pKPL-3α，经Dotblot、Southernblot和限制性内切酶分析筛选出阳性克隆pKHC－5α，进行序列测定。结果：核苷酸序列分析表明，克隆的HCVNS5基因与HCVⅡ／1b的核苷酸同源性约90％。结论：所克隆的HCV属于我国常见的HCVⅡ／1b基因型。