石蜡包埋肝组织中丙型肝炎病毒的原位PCR检测

以丙型肝炎病毒（HCV）为研究对象探讨原位PCR这一新技术。用原位PCR和原位杂交检测石蜡包理肝组织中的HCV。7例肝硬变及8例肝细胞癌痛旁组织HCV的检出率分别为86％（6／7例）和50％（4／8例），明显高于同组原位杂交的42％（3／7例）和12．5％（1／8例），并且显示了良好的特异性。研究发现HCV主要分布于肝细胞浆中，并且在胆小管上皮细胞及单核细胞中也出现阳性信号。我们的研究表明原位PCR是一项敏感、特异的方法，它的广泛应用不仅可以提高丙型肝炎的诊断率，同时有助于其分子病理学的研究。     

HCV感染的细胞免疫

目前，对ＨＣＶ感染的致病机制尚不清楚，免疫机制被认为起重要作用。本文就ＨＣＶ感染引起的细胞免疫方面作一综述。     

丙型肝炎病毒非结构基因5b的变异及与干扰素治疗的关系

以聚合酶链反应直接序列分析方法测定了４例无症状慢性丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者，与９例接受干扰素治疗的慢性丙型肝炎患者血清中ＨＣＶ非结构基因５ｂ（ＮＳ５ｂ）ｃＤＮＡ的序列。发现，与已发表的Ⅱ／１ｂ型ＨＣＶ序列相比，无症状慢性ＨＣＶ感染者的ＨＣＶ在核苷酸水平的同源性高于干扰素治疗有效的慢性丙型肝炎患者（９５．６５％±２．６１％比９４．３５％±２．２９％），后者又高于干扰素治疗无效的慢性丙型肝炎患者（９２．７０％±１．９０％）。还发现在干扰素治疗后，治疗无效者血清中ＨＣＶＮＳ５ｂｃＤＮＡ序列发生明显变化，在所测定的３８０个核苷酸中有９～４８个发生碱基替换，从而导致所编码的氨基酸中有６～２０个发生突变。结果提示，ＨＣＶＮＳ５ｂ基因变异与病情及干扰素治疗有一定关系。变异较大者常出现明显的临床表现，且干扰素治疗可能趋势于失败。     

原位PCR技术检测石蜡包埋肝组织中HBV DNA

采用原位PCR技术对22例石蜡包埋肝组织中HBV DNA进行检测,并与提取组织DNA PCR技术及原位杂交技术进行比较。结果表明,22例标本经原位PCR检测有9例为阳性;经提取组织DNA PCR检测有7例阳性,两者敏感性相近,符合率达80％;经原位杂交检测有4例阳性,其敏感性只及原位PCR的44％。提示原位PCR是项快速、敏感及特异性较高的检测技术。     

乙型肝炎病毒前S2抗原／抗体检测方法的改进及其应用

通过改进乙型肝炎病毒表面前Ｓ２抗原（Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｇ）、前Ｓ２抗体（Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｂ）的检测方法,对１２８份正常人标本Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｂ进行测定,确定了Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｂ抑制率的阳性界值。用改进后的方法检测不同人群中的Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｇ及Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｂ,发现在慢性乙型肝炎患者中Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｇ比ＨＢｅＡｇ／Ａｂ系统更能反映机体的ＨＢＶＤＮＡ复制水平（Ｐ＜０．０１）,而Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｂ的检出则与急性乙型肝炎的预后密切相关,同时,Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｂ也可作为评价含有Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｇ的乙肝疫苗主动免疫效果的指标。     

胎儿肝内丙型肝炎病毒感染的检测

胎儿肝内丙型肝炎病毒感染的检测陈伟红，周永兴，闫荣，杜绍财，姚志强内型肝炎病毒（ＨＣＶ）主要传播途径是经输血或血制品，但约有４０％～５０％的散发病例并无明确输血或接触血液史，可能存在其它的传播途径〔１〕。近几年来国外报道了母婴垂直传播的若干病例，但尚...     

丙型肝炎病毒HCV E1区基因在真核细胞中的表达及表达产物的初步应用

目的:建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并对表达产物进行鉴定,同时测定表达产物与抗HCV阳性血清的反应情况。方法:用限制性内切酶XbaⅠ和EcoRⅠ从原核表达载体pMSCVE1中切下HCVE1区的基因片段,并将其克隆到真核表达载体PcDNA3.1中,阳性克隆经SmaⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定后,用磷酸钙共沉淀法将其转染入小鼠骨髓瘤细胞SP2/0中,同时利用WesternBlot方法对表达产物进行鉴定;测定表达产物与20份抗HCV阳性血清标本和10份抗HCV阴性的血清标本的反应性。结果:经酶切过夜后从原核表达载体上切下的基因片段与经过同样双酶切的真核表达载体PcDNA3.1连接,阳性克隆经SmaⅠ和XbaⅠ酶切后产生了预期大小的354bp的片段。经磷酸钙转染,产生了具有对G418抗性的细胞克隆,经WesternBlot方法用抗HCVE1区合成肽抗原的单抗检测表达产物,产生了特异的反应;并证实该表达产物与HCV患者的血清有特异反应。经WesternBlot证实在抗HCV阳性血清中有35%(7/20)可与表达产物产生特异的反应;阳性细胞经3个月传代后,仍可检测到HCVE1的表达产物。结论:此项研究所建立的能够表达HCVE1基因细胞系表达产物可与阳性血清发生特异性反应,该细胞系的建立为进一步研究抗HCVE1抗体的临床意义及进行有关HCV核酸免疫的研究创造了条件。     

乌鲁木齐市部分高危人群庚型肝炎病毒感染现状及5′ UTR区基因序列分析

新疆地处我国西部边陲 ,存在着各型肝炎散发流行的危险因素 ,庚型肝炎病毒在乌鲁木齐市的流行现状尚未见报道。在新疆医科大学第一附院收集了2 67份各类人群的血清 ,用酶标法检测血清中庚型肝炎病毒抗体 (抗 ＨＧＶ) ,再以庚型肝炎病毒ＮＳ3区为引物运用ＲＴ ＰＣＲ法对抗 ＨＧＶ(阳性 )血清进行庚型肝炎病毒核酸 (ＨＧＶＲＮＡ)的扩增检测 ,阳性扩增产物为 83ｂｐ。最后 ,选择该病毒 5′非编码区为引物对第一次ＲＴ ＰＣＲ扩增ＨＧＶＲＮＡ(阳性 )血清 ,再次进行163.ｃｏｍ)ＲＴ ＰＣＲ扩增 ,阳性扩增产物为 1 90ｂｐ ,对第二次扩增ＨＧＶ…     

丙型肝炎病毒E2基因激发小鼠细胞免疫的实验研究

目的 :研究丙型肝炎病毒E2基因接种能否诱导机体产生细胞免疫以及乙型肝炎病毒preS基因对其诱导细胞免疫能力的影响。方法 :以BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞株 (SP2 /O)为宿主细胞 ,建立表达丙肝病毒E2蛋白的靶细胞 ,将其注射于E2基因或 preS与E2融合蛋白基因免疫的小鼠腹腔 ,记录小鼠接种瘤细胞后的存活期 ,以小鼠存活期的长短作为反映基因免疫小鼠对HCVE2蛋白细胞免疫的有无或强弱的指标。结果 :靶细胞表达了相对分子质量约为 70 0 0 0的E2蛋白 ,E2基因接种小鼠的存活期长于对照组 ,单独E2基因接种组的存活期显著长于对照组 ,也长于 preS与E2融合蛋白基因免疫组。 结论 :E2基因接种能诱导细胞免疫 ,但与 preS融合后 ,其诱导细胞免疫的能力会降低。