军团菌PCR检测中模板制备优化

对8种常见的模板制备方法进行了探讨和改良,结果显示在军团菌PCR检测中,对临床血标本的处理以煮沸-离心法最优,它可促使军团菌PCR操作步骤简化,时间缩短,成本降低,且敏感、稳定.     

鼠疫耶尔森氏菌16S-23S rRNA基因间区的酶切位点分析

目的：了解鼠耶尔森氏菌１６Ｓ－２３ＳｒＲＮＡ基因间区的酶切位点分布情况。方法：ＰＣＲ扩增及限制性内切酶分析。结果：对ＥＶ菌及不同来源的１０３株鼠疫耶尔森氏菌１６Ｓ－２３ＳｒＲＮＡ基因间区进行了扩增,选用限制性内切酶Ｔａｑ、１ｅｙ Ｍｓｐ１对扩增产物进行酶切分析,结果发现所用鼠疫耶尔森氏菌该间区扩增产物及酶切图谱一致,选用Ｔａｑ１＋Ｍｓｐ,Ｈｉｎｆ１＋Ｍｓｐ１对ＥＶ菌１６Ｓ－２３ＳｒＲＮＡ基因间区扩     

首次调查发现山东省存在莱姆病自然疫源地

目的：调查山东省的莱姆病自然疫源地。方法：于１９９２￣１９９９年,在山东省的山林地区设点,用间接免疫荧光抗体试验进行人群莱姆病感染调查,结合流行病学史,临床表现和实验室检查结果进行莱姆病病例诊断;对主要媒介蜱进行调查,用布旗法采集蜱类、分类鉴定,直接免疫荧光抗体法进行中肠带螺旋体率的调查,用ＢＳＫ培养基分离病原,宿主动物调查,用鼠笼和鼠夹捕获鼠类,分类,解剖,取明脏,膀胱等,用ＢＳＫ培养基分离病原     

嗜酸乳杆菌对致泻性大肠埃希氏菌上皮细胞粘附和侵袭的抑制作用

目的 研究嗜酸乳杆菌DOM La菌株是否对致泻性大肠埃希菌对上皮细胞粘附和侵袭能力具有抑制作用.方法 使用了Hep-2细胞粘附实验和Hep-2细胞侵袭实验.结果 发现嗜酸乳杆菌DOM La菌株对Hep-2细胞粘附平均达222.48±30.7个细菌/细胞.thyA基因突变菌株DOM LaF84 对Hep-2细胞的粘附为61.96±10.27个细菌/细胞.将嗜酸乳杆菌DOM La菌株与肠产志贺氏样毒素且具有侵袭力的大肠埃希氏菌(ESIEC)F171菌株共同孵育后, 可将后者的粘附和侵袭菌数分别由273.4±24.7个细菌/细胞和13.4±4.9个细菌/细胞,降低到65.3±13.1个细菌/细胞和6.82±1.6个细菌/细胞, 差异有显著性(P＜0.01).将DOM La菌株与肠侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC) 8401菌株共同孵育后,可将后者对Hep-2细胞的粘附和侵袭数分别由269.2±26.5个细菌/细胞和34.0±5.3个细菌/细胞降到70.7±14.0个细菌/细胞和6.82±2.9个细菌/细胞,差异有显著性(P＜0.01).结论 嗜酸乳杆菌DOM La菌株对ESIEC F171菌株和EIEC 8401菌株的Hep-2细胞的粘附和侵袭能力均具有明显的抑制作用,这可能是嗜酸乳杆菌对感染性腹泻具有非特异性预防和治疗作用的机理之一.     

肠出血性大肠埃希氏菌的多重PCR检测方法

目的开发肠出血性大肠埃希氏菌（ｅｎｔｅｒｏ－ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃＥ．ｃｏｌｉ,ＥＨＥＣ）的多重ＰＣＲ检测方法。方法以溶血素（ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ,ｈｌｙ）基因和志贺样毒素（Ｓｈｉｇａｌｉｋｅｔｏｘｉｎ,ＳＬＴ）基因为靶基因,进行了研究。结果发现ＳＬＴ１－ｈｌｙ组合能够检测出产生ＳＬＴ１毒素的ＥＨＥＣ菌株,ＳＬＴ２－ｈｌｙ组合能够检测出产生ＳＬＴ２的ＥＨＥＣ菌株,ＳＬＴｓ－ｈｌｙ组合能够检测出所有产生ＳＬＴ１和ＳＬＴ２的ＥＨＥＣ菌株。结论实验证明,把这３种多重ＰＣＲ方法结合使用,能够快速地检测和鉴定ＥＨＥＣ菌株,能够比较准确地了解所检测菌株产生志贺样毒素的情况,为ＥＨＥＣ的检测工作提供了一种更加方便易行的技术     

新疆出血热病毒S基因片段的测序和分析

目的　认识新疆出血热（ ＸＨＦ） 病毒不同分离株基因区别的本质,从分子水平揭示其基因结构与功能的关系,寻找传播及流行的原因。方法　对１９６５ 年自我国首例病人及１９８４ 年自蜱分离的两株ＸＨＦ 病毒进行了Ｓ 基因片段的克隆测序和分析。结果　两株病毒核苷酸序列同源性为９６ ．７ ％ ,与已经发表的１９６８ 年分离自我国蜱（ＨＹ１３） 和羊（Ｃ６８０３１） 的两株病毒核苷酸序列同源性均较高（９６ ．７ ％ ～９９ ％ ） ;与其它ＣＣＨＦ 病毒相比Ｓ 基因同源性为７７ ．４ ％ ～９２ ．７ ％ 。结论　计算机绘出的系统发生树状图显示我国分离的４ 株病毒形成一单个群体并进一步分为三组,提示流行源自我国。     

脑膜炎奈瑟菌A群荚膜多糖与B群外膜蛋白复合物偶联物的制备和免疫原性

目的　脑膜炎奈瑟菌 (Nm)A群荚膜多糖与B群菌株 34 0 7或 5 42 85 2外膜蛋白复合物偶联 ,希望获得 1种对A和B群Nm感染皆有预防效果 ,并可提高A群荚膜多糖对婴幼儿免疫力的偶联物。方法　用饱和硫酸铵沉淀细菌培养上清液 ,沉淀物再经SephacrylS 30 0纯化获得外膜蛋白复合物。通过碳化二亚铵 (EDC)介导的缩合反应将B群外膜蛋白复合物与A群荚膜多糖偶联。偶联物、未偶联的荚膜多糖、B群外膜蛋白复合物及A群荚膜多糖和B群外膜蛋白复合物简单混合物按相同程序免疫小鼠获得抗体 ,经ELISA、杀菌力试验和Westernblotting测定了偶联物的免疫原性。结果　偶联物比未偶联的荚膜多糖或者荚膜多糖同B群外膜蛋白复合物简单混合抗原的免疫原性增强 2 1～32 0倍 ;其中以B群 34 0 7菌株的外膜蛋白复合物与A群荚膜多糖偶联的效果更好。偶联物免疫血清不仅对A群代表菌株 (2 90 19)和B群菌株 (34 0 7,5 42 85 2和 2 90 2 1)均有较强的杀菌活性 ,而且还对所试的具有不同菌型特征的其它 8株B群菌株仍有较强的交叉反应性。Westernblotting初步分析发现上述两种偶联物免疫的血清与各自的外膜蛋白复合物在相对分子质量约 42× 10 3 、39× 10 3 和 2 6× 10 3 处有相同的反应带 ,其中 42× 10 3 左右的条带为 1类外膜蛋白。结论     

部分ESIEC菌株存在耶尔森氏菌HPI毒力岛

本文应用小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力岛HPI上的irp2、fyuA基因和大肠杆菌染色体上asnT -tRNA位点检测的引物 ,对 43株肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠杆菌 (ESIEC)进行了PCR检测。发现约 34 9%的菌株irp2、fyuA引物扩增阳性 ,而这部分菌株asnT -tRNA位点引物扩增为阴性 ,证实ESIEC中确有耶尔森氏菌毒力岛的irp2、fyuA基因 ,并且也在染色体上asnT -tRNA位点插入。     

戊二醛复方消毒液对布鲁氏菌杀灭效果的观察

各类传染病实验室感染中布鲁氏菌病 (布病 )感染居第二位 ,为防止布鲁氏菌污染和实验室工作人员的感染 ,对消毒剂的选择尤为重要。不仅实验室如此 ,对布病的现场消毒也是布病预防措施中不可缺少的环节之一。目前所用的消毒剂多是含酚类物质的复方消毒液 ,虽然这种消毒剂的灭菌效果较好 ,但仍有一些缺陷和不足。最近新研制的卫康消毒液是以戊二醛为主的复方消毒液 ,除含有戊二醛外 ,还有醇类、阳离子表面活性剂和非离子表面活性剂 ,有资料说明该消毒剂的原液在 5分钟内可破坏乙肝病毒 ,稀释 10倍可用于表面消毒 ,预防各种细菌性传染病 ,但对…     

斑点热群立克次体中国分离株HL-93和HLJ-054亲缘关系的研究

目的　通过斑点热群立克次体 (spottedfevergrouprickettsiae ,SFGR)rOmpA基因片段的序列分析对HL 93和HLJ 0 5 4的亲缘关系进行研究。方法　用PCR分段扩增rOmpA基因重复区后 1 9kb片段 ,PCR产物直接测序 ,用WinstarDNA分析软件包进行同源性比较、进化树分析及酶切位点的分析。　结果　HL 93株和HLJ 0 5 4株核苷酸及推定氨基酸的同源性均在 99%以上 ,在树形图上单独聚为一类。常用酶的酶切位点完全一致。结论　HL 93株和HLJ 0 5 4株为同一种SFGR ,建议均命名为黑龙江立克次体 ,但可能存在株间差异性。