酶联免疫吸附试验诊断布氏菌病的研究进展

ELISA在布氏菌病(以下简称布病)诊断上的应用,首先是Carlsson(1976)用来测定牛的布病血清抗体,当时获得了较好的结果。在国内郭恒昌等(1982)首次用ELISA测定了人布病抗体,以后这方面的报道越来越多。近年来     

同工酶在蚊虫分类研究中的进展概况

蚊同工酶的研究始于六十年代,二十多年里,该领域的研究有了很大的发展。应用此项研究技术已经对许多用经典形态学分类方法难以区分的蚊虫复合体或种团内的蚊种进行了成功的鉴别。这对于确定真正的传病媒介和有效而经济地防制蚊媒具有重要意义。本文较系统地综述了同工酶在蚊分类研究中的进展概况。首先引入了同工酶的概念,阐述了同工酶作为蚊分类所具有的生化特性。然后从电泳凝胶基质的选择,电泳缓冲液的选择,酶电泳凝胶染色技术等方面,综述了蚊同工酶研究的必要技术--电泳技术,并对最新发展的等电聚焦电泳和二维电泳技术在蚊同工酶研究中的前景进行了概述。接着描述了蚊同工酶的发展过程,从最初的不同蚊种同工酶的研究,逐渐发展到对蚊复合体或种团内蚊种乃至同一蚊种不同种群的同工酶研究,并引入了遗传距离的概念,说明了遗传距离在蚊同工酶研究中的重要意义。最后本文把同工酶电泳用于蚊分类应注意的问题,如蚊样品的选择和保存,近缘蚊种同工酶用于生化分类的注意事项,以及计算遗传距离应避免的问题等进行了扼要的说明.     

幽门螺杆菌的菌种保存法

幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,HP)与慢性胃炎、消化性溃疡等胃部疾患密切相关,研究菌种保存具有重要的意义。为此,我们从89年开始研究了 HP 菌种在-70℃条件下,用新鲜脱纤维绵羊全血保存可全部存活14个月,并可保持典型的细菌形态和原有的生化反应特性。材料与方法1.菌株:10株 HP 均从各型胃病患者胃镜活检胃粘膜标本分离培养获得,经传数代稳定后,用作菌种保存。2.培养基:试验中用改良 Campy-Bap(布氏琼脂),按有关文献报道配制。3.保藏液:为新鲜脱纤维羊全血.4.保存方法:经鉴定的 HP 菌种,于混合气体中(5%氧、85%氮、10%二氧化炭)37℃培养72小时,在布氏血平皿上可得到生长丰富的菌苔。然后,在含有0.4～0.5ml 新     

鼠疫菌9.5kb质粒对假结核菌粘附、侵袭上皮细胞能力的影响

用电穿孔方法把克隆的鼠疫菌９．５ｋｂ质粒转移到不同血清型的假结核菌中，研究了不同实验条件下９．５ｋｂ质粒对假结核粘附、侵袭上皮细胞（Ｈｅｐ－２）能力的影响。结果显示，尽管９．５ｋｂ质粒不能明显改变假结核菌的粘附、侵袭特征，但相对于亲本株而言，转化后的菌体在所有实验条件下侵袭上皮细胞的能力确定有所下降，表明９．５ｋｂ质粒介导的粘附、侵袭机制有别于假结核菌。由此，分析和评价了９．５ｋｂ质粒在粘附、侵袭     

鼠疫菌外膜蛋白单克隆抗体制备及初步应用

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，蛋白免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）、单克隆抗体（ＭｃＡｂ）等技术，对鼠疫菌外膜蛋白（ＯＭＰ）组成成分及免疫学特性进行了研究、在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上，鼠疫菌锡林郭勒高原型较其他型强、弱毒菌少一条亚基分子量为３２ＫＤ的蛋白带。以ＥＶ７６ｐ、ＥＶ苗的ＯＭＰ为免疫原，所获抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，认为ＯＭＰ具有良好的免疫原性及免疫反应性。采用杂交瘤技术，得到七株抗鼠疫菌的ＭｃＡｂ。四株为ＩｇＧ，三株为ＩｇＭ。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定。四株ＭｃＡｂ抗ＯＭＰ的分子量，４Ｇ５株为２１０ＫＤ，３Ｂ９、ＩＤ１０株为４０ＫＤ，２Ｃ６株为１０ＫＤ。以七株ＭＣＡｂ对鼠疫菌强、弱毒株３２株作全菌体ＥＬＩＳＡ进行鼠疫菌分型的初步研究发现，３Ｂ９株ＭｃＡｂ与２４株强毒菌发生阳性反应，而不与弱毒菌反应；１Ｄ１０株与锡型及弱毒菌不发生反应，与其它强毒菌发生阳性反应。     

测定鼠疫抗体血清的敏感方法PHA—SPA试验及其应用于鼠疫感染早期诊断的展望

在被动血凝-SPA试验中,葡萄球菌A蛋白的稳定悬液用来代替PHA—Coombs’方法中的具有高度种属特异性的第二抗体。运用这一方法检查了3,155份鼠疫感染或免疫的动物血清。证实这一方法与被动血凝试验相比敏感得多(几何平均滴度为对照的4～64倍)并具有同等的特异性。利用PHA-SPA试验发现某些在被动血凝试验中的阴性血清转为阳性,阳转率为2.9～40％。发现阳转现象主要分布在实验接种后的一周之内。看来PHA-SPA方法可用于鼠疫的早期实验室诊断。在现场工作中,SPA-PHA试验可用于鼠疫监测的流行病学研究。     

从一例多细菌协同性坏疽的标本中分离到罕见芽孢杆菌

目的 确定从一例多细菌协同性坏疽患者临床标本中分离的、使用常规方法不能够鉴定的ＹＰ菌株的分类学位置。方法 使用１６Ｓ ｒＲＮＡ序列分析和同源性检索方法,及细菌的形态学和生化反应鉴定方法。结果 ＹＰ菌株为革兰氏杆菌,硝酸盐还原。在ＰＹＧ肉汤中的代谢产物主要为乙酸、乳酸以及少量的琥珀酸和异戊酸。Ｇ＋Ｃｍｏｌ％为３３。１６ＳｒＲＮＡ序列分析和同源性检索发现ＹＰ和芽孢杆菌一些种的同源性较高,可达９６％。但     

致病性钩端螺旋体限制性内切酶酶切分析分型研究

为了建立一种简便、稳定的钩体分型方法,我们采用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ对致病性钩端螺旋体八个血清群５４个血清型６４株国内外钩体参考株及２７株野生株进行限制性内切酶酶切分析（ＲＥＡ）。结果表明：９１株菌中共有５９种不同的限制性内切酶图谱（ＲＥＰｓ）,根据前５条高分子酶切片段可以区分不同的ＲＥＰｓ;除部分血清群中个别不同的血清型有相同的ＲＥＰ型外,大部份血清型都有其独特的ＲＥＰ型,同一血清群往往拥有共同的酶切片段;所研究的同一血清型的国内和国际参考株的ＲＥＰｓ不同;大多数野生株的ＲＥＡ型和参考株相同,差异仅表现为个别高分子带的缺少和增加,ＲＥＡ分型和血清分型吻合较好,通过ＲＥＡ分型基本可区分不同的血清型。     

我国腹泻病患者和家畜家禽粪便标本中携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的调查

目的　了解携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国腹泻病患者粪便标本、动物粪便标本及部分食品标本中的存在情况和所致腹泻病的临床特征。方法　使用菌落原位杂交、DNA打点杂交和PCR扩增等方法。结果　在各地送检的从腹泻病患者粪便标本中分离到的、用常规方法不能鉴定的大肠杆菌中 ,均检出带有小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌菌株 ,检出率为 2 7.0 5 % (436 / 16 12 )。从市售食品标本中分离的大肠杆菌中 ,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的检出率为 10 .2 3% (9/ 88)。从家畜家禽粪便中分离的大肠杆菌中 ,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌检出率为 5 .71% (16 / 2 80 )。携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌所致腹泻的典型临床表现为食欲不振、腹痛、寒战乏力、正常体温或低热、每日腹泻多在 6次以上、多为粘液便。结论　携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国分布广泛 ,检出率高于其他几类致泻性大肠杆菌 ,对我国人民的健康是一个潜在的威胁