人胶质细胞源性神经营养因子基因工程细胞保护多巴胺能神经元的实验研究

目的 构建一种可分泌人胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的基因工程细胞,并探讨其在基因治疗帕金森病中的可能作用。方法 克隆含Kozak序列的人GDNF cDNA,并将其转染至人类神经母细胞瘤细胞系SH－SY5Y细胞,用RT－PCR方法筛选阳性细胞克隆,将此工程细胞与大鼠原代多巴胺能神经元共培养,免疫组织化学检测多巴胺能神经元。结果 （1）基因工程细胞可防止多巴胺能神经元退变死亡,与对照组比较,最多增加了95．4％,P＜0．01。（2）工程细胞可抵抗MPP^ 对多巴胺能神经元的毒性损伤作用,与对照组相比,细胞数目增加了9．5－10．8倍,P＜0．01。结论 首次构建了可分泌人GDNF的工程细胞,其对多巴胺能神经元具有明显的营养保护作用,其在帕金森病的基因治疗中可能具有重要的应用价值。     

不同频度电针治疗大鼠慢性神经源性痛的疗效比较

慢性疼痛 ,尤其是慢性神经源性疼痛持续时间长 ,恢复较慢 ,对人身心健康危害很大 ,且难以控制。因此慢性神经源性痛的研究成为疼痛领域的研究热点与重点。本所在正常大鼠镇痛模型和慢性炎症痛模型中观察到 ,多次电针或ＴＥＮＳ的镇痛作用不仅与刺激参数有关 ,而且主要取决于两次电针之间的时间间隔。本实验将大鼠右侧Ｌ5/Ｌ6 脊神经结扎造成慢性神经源性痛模型 ,用引起缩足的机械刺激阈值 (50 % )来评价机械性痛觉超敏。用大鼠 5ｍｉｎ内在 5± 1℃冷板上的抬脚次数来反映冷诱发的持续性疼痛。采取四种时间间隔 (每天 1次、2天 1次、3天 1次…     

低频电针可取消药物点燃与应激诱发的大鼠条件性位置偏爱重建的作用

复吸是戒毒工作中最棘手的难题。寻找有效的防治复吸的方法 ,是摆在神经科学工作者面前一项艰巨而紧迫的任务。本实验室已经成功建立了吗啡诱导的大鼠条件性位置偏爱 (ＣＰＰ)消退 重建模型。本工作在大鼠建立吗啡条件性位置偏爱消退之后 ,用足底电击 (0 .5ｍＡ ,0 .5ｓｅｃｏｎ ,1 0～ 70ｓｅｃｏｆｆ)或小剂量吗啡点燃 (0 .2 5ｍｇ/ｋｇ ,ｓ.ｃ.)诱发重建前在检测前 1 8ｈｒ,分别给以 2Ｈｚ、2 / 1 0 0Ｈｚ及 1 0 0Ｈｚ的电针处理。结果发现 ,低频电针 (2Ｈｚ、2 / 1 0 0Ｈｚ)可完全阻断药物点燃和应激 (间断、随机、不可躲避的足底电击 )…     

八肽胆囊收缩素对针刺镇痛的影响及其机制

目的:观察八肽胆囊收缩素对抗电针对大鼠束旁核中痛反应神经元放电和甩尾潜伏期痛阈的同时影响及其作用机制。方法:实验于2004-06/2005-04在哈尔滨医科大学神经痛觉电生理研究室完成。选择雄性的Wistar大鼠128只,随机分4组:对照组32只,不给大鼠任何处理。电针组32只,用G-6805型治疗仪给电压6V,频率15Hz,连续的电脉冲刺激双侧“足三里”15min。电针 八肽胆囊收缩素组32只,在电针双侧“足三里”15min后,借助自动微量推进器立即向脑室注入八肽胆囊收缩素(1.5kg/L),2min注射完毕。电针 八肽胆囊收缩素 L-364,718组32只,在注射八肽胆囊收缩素后2min,右侧束旁核内注入八肽胆囊收缩素-A受体拮抗剂L-364,718(100kg/L),2min注射完毕,其他操作同电针 八肽胆囊收缩素组。以辐射热照大鼠尾部背侧下1/3处作为伤害性刺激,引导痛反应神经元的放电。以痛兴奋神经元、痛抑制神经元和甩尾潜伏期的变化作为痛阈的观察指标。当辐射热照大鼠尾开始或甩尾发生时,用SEN-3301电刺激器的电脉冲记号作为照尾和甩尾的标记,与痛兴奋神经元或痛抑制神经元的放电同时显示在VC-9示波器上,从而观察大鼠束旁核中痛反应神经元放电和甩尾潜伏期的同时变化。用GF-777型双道录音机记录这些变化,并输入DAB-1100直方图仪绘制直方图,最后用Z3-304函数记录仪打印。结果:纳入动物128只,均进入结果分析。①辐射热照大鼠尾可使痛兴奋神经元诱发放电增加或痛抑制神经元诱发放电减少的同时发生甩尾反射,表现出辐射热致疼痛效应。②电针双侧“足三里”15min,可抑制痛兴奋神经元的电活动或加强痛抑制神经元的电活动,同时使甩尾潜伏期延长。16个痛兴奋神经元平均净增值从电针前的(12.14±1.31)Hz减少到(3.38±1.92)Hz、同时甩尾潜伏期从(4.79±0.22)s延长到(8.65±0.34)s。9个痛抑制神经元平均抑制时程从电针前(5.34±0.56)s减少至(2.41±0.89)s,甩尾潜伏期从(4.11±0.38)s延长到(8.01±0.59)s,即呈现出电针的镇痛效应。③脑室注射八肽胆囊收缩素能同时对抗电针所引起痛兴奋神经元或痛抑制神经元和甩尾潜伏期的镇痛作用。在电针后立即,15个痛兴奋神经元的平均净增值从电针前100%减少到(17.73±3.05)%,抑制率为(82.27±5.47)%;甩尾潜伏期延长率为(72.83±3.38)%。脑室注射八肽胆囊收缩素后立即,平均净增值的抑制率下降到(15.86±1.82)%;甩尾潜伏期的延长率减少到(13.93±2.12)%。而11个痛抑制神经元平均抑制时程从电针后立即的缩短率为(64.99±8.23)%减少到(11.41±1.58)%;甩尾潜伏期延长率为(60.84±6.28)%下降到(8.63±0.92)%。④束旁核内注入胆囊收缩素-A受体拮抗剂L-364,718能翻转八肽胆囊收缩素对抗电针的镇痛作用。结论:八肽胆囊收缩素的抗电针镇痛作用,在中枢痛反应神经元电活动和整体行为反射水平上是协调一致的,推测该作用是通过胆囊收缩素-A受体而实现的。揭示降低脑内八肽胆囊收缩素的含量或阻断胆囊收缩素-A受体的作用均能提高临床针刺的镇痛疗效以及痛兴奋神经元和痛抑制神经元的电活动作为疼痛和镇痛指标是确实可行的。     

预期作用对大鼠皮层-丘脑神经元伤害性反应的调节

目的:探索与痛觉预期特异相关的脑区,并研究预期作用对大鼠丘脑-皮层神经元伤害性反应的影响。方法:采用经典的声音-激光条件反射模型使大鼠产生痛觉的确定性预期,同时采用多通道单位放电同步记录技术观察预期状态下前扣带回(ACC)、中央杏仁核(CeA)、丘脑背内侧核(MD)以及初级躯体感觉皮层(SI)的神经元群对预期信号和随后伤害性激光刺激的反应模式。结果:(1)ACC和MD对预期信号的反应幅度和比例以及SI的抑制性反应比例在条件化后显著增加;(2)条件化能够显著增强四个脑区神经元对伤害性反应的幅度和比例,且在训练过程中增强的幅度最大。结论:ACC、MD和SI可能是参与预期信号编码的特异性脑区;预期效应,特别是预期形成过程能显著增强中枢的痛反应。     

人酪氨酸羟化酶和神经营养因子双转基因工程细胞对原代多巴胺能神经元的保护作用

目的　将人的酪氨酸羟化酶(hTH)和胶质细胞源性神经营养因子(hGDNF)基因共同转染SH SY5Y细胞,筛选可同时高效稳定表达 TH和 GDNF的工程细胞,探讨其在帕金森病(PD)基因治疗中的作用。　方法　将 hTH和 hGDNF cDNA插入表达载体 pcDNA3 .0 和 pcDNA3 .1,构建重组真核表达载体 pcDNA3 1/hGDNF和 pcDNA3 0/hTH,然后转染至 SH SY5Y细胞系,利用RT PCR鉴定和筛选出高效稳定表达阳性克隆。将此工程细胞与大鼠原代多巴胺能神经元共培养,免疫细胞化学检测观察多巴脂能神经元的数目和生长状态。　结果　(1)双转基因工程细胞可防止多巴脂能神经元退变死亡,与对照组比较,神经元数目最多提高了 2 8 倍(P<0 .01);(2)工程细胞可抵抗N 甲基 苯基吡啶(MPP+)对多巴脂能神经元的毒性损伤作用,与对照组比较,细胞数目增加了83 .6%(为7 6倍,P<0. 01)。　结论　首次成功建立了可同时高效稳定表达人 TH和 GDNF双基因的工程细胞,对多巴脂能神经元有防、治兼顾的保护作用。     

雌激素及雌激素受体在认知障碍中的作用

雌激素受体与相应的胞内第二信号通路的关联亟待确定,这对解释雌激素作用的突触传播效应（即通过神经元突触连接而使突触后不合雌激素受体的细胞对雌激素做出应答）有指导性意义。其次,雌激素的神经保护作用已被证实,这为雌激素疗法治疗阿尔茨海默综合征提供可能。但是由于雌激素疗法在诱发乳腺癌,心脑血管疾病等方面仍存在隐患。故雌激素替代物治疗阿尔茨海默综合征仍需娶科举家曼深入的研究与探讨。     

老年跌倒综合征

跌倒是指突发的、不自主、非随意的体位改变而倒落的状态.世界卫生组织1992年发布的<国际疾病分类(第10版)>(ICD10)将跌倒分类为:①从一个平面至另一个平面的跌落;②同一平面的跌倒.进入老年期后,由于身体功能减退或疾病等原因,老年人极易发生跌倒,而且往往后果严重.老年跌倒综合征不仅造成了病人和家属的痛苦,还增加了医疗机构和社会的负担,已成为严重妨害老年人健康的公共卫生问题,对现存的医疗保障体系提出了严峻的挑战[1].     

HANS治疗仪对男性戒断期酒依赖患者心理渴求的作用

目的:评价HANS治疗仪对男性酒依赖患者戒断期心理渴求的影响。方法:将92例符合ICD-10中酒依赖诊断标准的戒断期男性患者随机分成两组:HANS组(治疗组)45例,给予2/100 Hz经皮穴位电刺激(HANS);Mock-HANS组(对照组)47例,给予模拟经皮穴位电刺激(Mock-HANS),为期15 d。比较两组酒精心理渴求评分(视觉模拟标尺,VAS)、谷氨酰转肽酶(GGT)和心率及血压变化。结果:(1)HANS组心理渴求分值(VAS)在治疗后d10(0.98±s 0.85 vs.1.6±s 1.35,P<0.05)和d15差异有显著性(0.67±s 0.76 vs.1.6±s 1.35,P<0.001),Mock-HANS组的下降差异无显著性;在治疗15 d时HANS组较Mock-HANS组的VAS分值差异有极显著性(0.67±s0.76 vs.1.84±s 0.87,P<0.001);(2)HANS组的GGT在治疗后下降差异有显著性(88.5±s 70.0 vs.198.1±s83.2,P<0.05),同时也低于Mock-HANS组的治疗后GGT的平均值(88.5±s 70.0 vs.144.0±s 85.2,P<0.05);(3)经治疗15 d后HANS组的收缩压和舒张压较治疗前下降明显(103.9±s 6.1 vs.126.7±s 14.1;68.7±s 6.0 vs.81.6±s 8.6,P均<0.05),而Mock-HANS组差异无显著性;(4)HANS组的心率在治疗15 d后下降差异有显著(70.5±s 2.8 vs.83.6±s 4.4,P<0.05),Mock-HANS组治疗后的心率变化差异无显著性。结獉论獉:HANS治疗仪能减轻戒断期酒依赖者的心理渴求程度,辅助改善血中GGT指标,降低酒依赖患者的心率、血压,对酒依赖患者的戒断期有一定的辅助治疗作用。     

阿尔茨海默病中突触病变的分子机制与治疗策略

神经突触具有高度可塑性,突触的形成和重塑是神经元活性依赖性的,是学习记忆、认知功能的基础。包括Alzheimer’sdisease（AD）在内的多种表现出认知缺陷的神经疾病,均存在突触结构或者功能的异常。AD的早期临床表现是单纯的记忆功能损伤,随病程深入,患者认知障碍进行性加重,并出现神经退行性改变。新皮质、海马的联合区的突触的完整性受损、可塑性异常、密度下降被认为是AD认知障碍的发病基础。皮质中的可溶性β—amyloidpeptide（Aβ）寡聚体,是AD中首要的突触毒素,通过多种不同的分子机制破坏海马脑片或者动物在体的Long—termpotentiation（LTP）,损害啮齿类动物的认知和记忆功能,降低器官型培养的海马脑片树突棘的密度。而不可溶的Aβ斑块,可能作为具有突触毒性的寡聚体的一种储备形式而存在。Aβ抗体或者调节Aβ聚集的小分子可以逆转寡聚体的突触毒性,降低脑内Aβ水平,尤其是具有突触毒性的寡聚体,以延缓AD病人认知功能的下降,已经进入临床试验阶段。