一种无RNA纯化步骤TaqMan RT-PCR方法用于快速检测登革病毒

目的 建立一种简便、快速的登革病毒核酸检测方法.方法 设计合成LNA探针,替代MGB探针,建立一步法TaqMan RT-PCR方法,并用已知的登革病毒标准毒株进行方法的优化;用商品化的纯化试剂盒和简单的热释放法获取登革病毒细胞培养液和模拟含登革病毒血清中RNA,以优化的TaqMan RT-PCR方法进行检测,比较有或无RNA纯化步骤检测的敏感性和重复性.结果 LNA探针TaqMan RT-PCR有较好的PCR扩增效率(104%)、较广的线性范围(10 0～10-7样品稀释度)、较高的敏感性(0.003TCID50/反应)和较好的重复性(CV值小于4.53%),新方法检测经简单热释放RNA的细胞培养液和模拟含登革病毒血清中登革病毒也有较高的敏感性(0.03TCID50/反应)和较好的重复性(CV值小于6.36%).结论 新型LNA探针可替代MGB探针用于TaqMan RT-PCR反应,简便的热释放RNA方法结合高敏感性的TaqMan RT-PCR可满足登革病毒快速检测的需要.     

肠源性高草酸尿大鼠模型的建立

目的：建立肠源性高草酸尿的大鼠模型。方法随机选取30只雌性SD大鼠置于大鼠代谢笼中适应性喂养7 d之后收集24 h尿,记录尿量,采用离子色谱仪测定其草酸浓度,计算正常大鼠在该条件下24 h尿草酸排泄量。菠菜汁灌胃处理大鼠,再测定灌胃后24 h尿草酸排泄量。对比灌胃菠菜汁前后,大鼠24 h尿草酸排泄量的差别;分组对照实验,随机选取20只雌性SD大鼠,随机分成A组和B组,B组灌胃菠菜汁,A组灌胃等量纯净水,其他条件相同,比较两组24 h尿草酸排泄量。结果反复测定,正常大鼠灌胃菠菜汁前24 h尿草酸排泄量为（0.53±0.18） mg,灌胃菠菜汁后第1天为（1.93±0.36） mg,第3天为（1.85±0.38） mg,第7天为（2.03±0.39） mg;A组（0.44±0.12） mg,B组（1.68±0.38） mg。结论大鼠在灌胃菠菜汁之后其尿液24 h草酸排泄量明显增加,大概增加3~4倍,说明每天对大鼠进行定量定浓度的菠菜汁灌胃,可以使其保持长期的高草酸尿状态,该方法建立的肠源性高草酸尿大鼠模型简便可行,可广泛用于其他方面的研究。     

血清CA125、CA153、CA72-4及CEA在卵巢癌诊断中的价值

目的探讨癌抗原CA125、CA153、CA72-4及癌胚抗原(CEA)对卵巢癌的诊断价值。方法采用电化学发光方法测定242例拟诊卵巢癌并行手术探查患者血清中CA125、CA153、CA72-4的水平,采用酶联免疫吸附测定方法(定量ELISA)测定各组CEA水平,同时设健康对照组40例。比较分析检测结果的敏感度、特异度、准确度以及不同临床分期、病理类型各指标的差异。结果 4个指标联合检测的敏感性(85.19%)高于单个指标检测。在卵巢癌早期(Ⅰ和Ⅱ期),血清CA125水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),其他3项指标与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),在中晚期(Ⅲ、Ⅳ期),4项指标与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。CA125对浆液性腺癌的检出率明显高于黏液性腺癌的检出率,CA72-4对黏液性腺癌的检出率明显高于对浆液性腺癌的检出率,CA153、CEA在两者中的检出率差别不大。结论 CA125是卵巢癌较理想的肿瘤标志物,但对卵巢癌的筛查诊断特别是对于早期以及不同类型的卵巢癌,联合检测能进一步提高其检出率。     

广州市黄埔区2010-2011年妇女病普查结果分析

目的了解广州市黄埔区妇女病患病状况,为制订保障育龄妇女生殖健康的有效措施提供科学依据。方法对2010—2011年黄埔地区妇女病查治报表进行分析。结果妇女病普查率为81.12%,宫颈细胞涂片率为81.92%,妇女病检出率为44.70%,宫颈炎、子宫肌瘤、宫颈癌和乳腺癌检查率分别为30.15%、7.11%、8.73/10万和15.27/10万。液基薄层细胞检测(TBS分类法)明显提高了宫颈异常上皮细胞的检出率(P<0.01)。结论应该将促进育龄妇女生殖健康作为社区妇女保健的重要任务,加强妇女病普查普治的规范化管理,并大力推广TBS分类,提高妇女病普查工作质量。     

CEUS鉴别诊断肾脏高回声局灶性病变

目的 探讨CEUS鉴别诊断肾脏局灶性高回声良恶性病变的价值。方法 回顾性分析56例肾脏单发高回声局灶性病变患者的常规超声（US）及CEUS声像图资料,对其进行定性诊断;以病理诊断为金标准,计算并比较两者的诊断效能。结果 US及CEUS诊断肾恶性高回声病变的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率为70.00%（14/20）、75.00%（27/36）、60.87%（14/23）、81.82%（27/33）、73.21%（41/56）和80.00%（16/20）、94.44%（34/36）、88.89%（16/18）、89.47%（34/38）、89.29%（50/56）,CEUS的诊断准确率、特异度和阳性预测值均高于US（P均<0.05）。CEUS结果与病理诊断一致性好（Kappa值=0.761）,US与病理诊断一致性一般（Kappa值=0.435）。结论 CEUS可提高对于肾脏局灶性高回声良、恶性肿物的诊断及鉴别诊断效能。     

输尿管负压吸引鞘在输尿管软镜碎石术中的价值探讨

目的探讨输尿管负压吸引鞘在输尿管软镜碎石术治疗肾结石中的安全性及有效性。方法回顾性分析96例行输尿管软镜碎石术治疗肾结石患者的临床资料,应用输尿管负压吸引鞘46例(治疗组),未应用50例(对照组),比较两组患者的结石清除率、手术时间、肾盂内压、术后肾绞痛、石街形成情况、术后全身炎症反应综合征(SIRS)、降钙素原(PCT)浓度、白细胞计数、住院时间、住院费用和治疗有效率。结果治疗组肾盂内压在最小值、最大值和平均值方面均明显小于对照组(P0.05);在1个月后检查发现,对照组患者治疗有效率为70.0%,清除率为82.0%,而治疗组患者治疗有效率为84.7%,清除率95.6%,治疗组患者结石治疗有效率和清除率明显优于对照组(P0.05);治疗组和对照组手术时间分别为(86.3±5.2)和(108.6±3.5)min,治疗组明显短于对照组(P0.05);对照组和治疗组术后肾绞痛例数分别为13和2例(P0.05);对照组和治疗组术后石街形成例数分别为11和2例(P0.05);对照组和治疗组术后SIRS分别为10和2例,治疗组术后肾绞痛和石街形成、SIRS例数均明显低于对照组(P0.05);对照组和治疗组住院时间分别为(8.8±1.1)和(7.7±1.2)d,住院费用分别为(23 067.5±392.8)和(21 957.3±378.6)元,治疗组住院时间和住院费用与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);对照组和治疗组术后PCT分别为(1.5±0.3)和(0.3±0.1)ng/ml,白细胞计数分别为(14.6±0.5)×109/L和(6.4±0.6)×109/L,术后治疗组患者PCT和白细胞计数明显低于对照组(P0.05)。结论输尿管负压吸引鞘在输尿管软镜碎石术治疗肾结石中安全、有效,缩短手术时长,同时提高结石清除率,减少不良反应发生,应当推广。     

A组链球菌M蛋白重组多肽原核表达载体构建及融合蛋白的表达

目的:设计针对A组β溶血性链球菌M1和M12蛋白的复合多肽;构建含M蛋白基因(emm基因)1型和12型特异性抗原决定簇基因及其保守区J14肽基因的GST标签的重组表达载体;并诱导和优化GST融合蛋白的表达.方法:在NCBI Genebank和Olig0 6引物设计软件中选择分别编码M蛋白emm基因1型和12型信号肽后35个氨基酸及其相同的保守区14肽基因序列(全长270 bp),通过重叠PCR(Overlap PCR)合成所需的核苷酸序列,经测序确定序列完全和设计的相匹配后,将该重组片段克隆到pGEX-4T-1表达载体中,阳性克隆经双酶切和测序鉴定正确后建立稳定表达该重组质粒的大肠杆菌BL21株系(pE/B);通过聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色和Western blot来检测在不同时间(O、2、6、8、18和24小时)和温度(25℃、30℃和37℃)以及不同浓度(0.01、0.1、1 mmol/L)异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导GST融合蛋白(GST/emm)表达情况,并对诱导表达的GST/emm切胶进行质谱分析鉴定.结果:成功构建含有emml和emm12抗原决定簇及M蛋白保守区J14肽基因的原核表达载体;并诱导其稳定表达,在1 mol/L IPTG诱导6～8小时达高峰,不同温度下均有过量表达;质谱检测诱导蛋白GST/emm条带结果正确.结论:成功构建A组p溶血性链球菌的emm1型和emm12型原核表达载体,并稳定诱导GST/emm表达,为下一步研究GST/emm的纯化、酶切以及免疫原性的鉴定和疫苗研制打下夯实的基础.     

Chikungunya emergency in China: microevolution and genetic analysis for a local outbreak

A small-scale local chikungunya outbreak occurred in a Guangdong village of southern China in October 2010. The five chikungunya viruses (CHIKV) isolated from the epidemic and three other imported cases obtained from the same period were sequenced and analyzed for phylogenesis. The results demonstrated that all of the eight sequences were clustered in the Eastern, Central, Southern, and African group. However, the local strains and imported isolates showed different sequence variations. A226V in E1 gene and V264A in E2 gene were detected in all three imported isolates, the unique substitutions S250P in E1 gene and H313Y in E2 genes could be observed in four of the five local strains. These significant variations might be some of the causes for the outbreak. It would be an important event for CHIKV to have mutated adaption to the local mosquitoes in China, Aedes albopictus and Aedes aegypti.     

Presence of interleukin-17C in the tissue around aseptic loosened implants

Purpose

The most common long-term complication of joint arthroplasty is aseptic loosening. The proinflammatory cytokines secreted by macrophages are involved in aseptic loosening. Recently, a novel proinflammatory cytokine IL-17C was reported to participate in inflammatory diseases by synergising with proinflammatory cytokines. However, the relationship between IL-17C and the aseptic loosening is unclear.

Methods

The tissues around aseptic loosened implants were collected during revision surgery and handled by formalin fixation and embedded in paraffin. The presence of IL-17C in the tissues around the aseptic loosened implants was investigated in 12 aseptic loosening patients using immunofluorescence.

Results

The presence of IL-17C protein in the tissues around aseptic loosened implants was detected by immunofluorescence. There are no statistical differences between optical density of IL-17C in aseptic loosening samples and in rheumatoid arthritis samples (positive control).

Conclusions

These results suggest the presence of IL-17C in aseptic loosening. Interleukin-17C was related to the inflammation of aseptic loosening, possibly by contributing to the inflammation and osteolysis in the tissues surrounding aseptic loosened implants.     

妊娠期顽固性肾绞痛的腔内处理

目的探讨腔内诊治妊娠期肾积水合并顽固性肾绞痛的安全性和有效性。 方法回顾性分析2017年3月至2018年9月我院收治的78例妊娠期肾积水合并顽固性肾绞痛患者的病例资料。根据顽固性肾绞痛持续时间将患者分为A组（6 h以内16例）,B组（6～12 h 53例）和C组（12 h以上9例）。 结果58例术中发现输尿管结石,16例（27.6%）术前彩超未见输尿管结石,行输尿管镜碎石取石和留置输尿管双J管。输尿管结石清除率87.9%（51/58）。20例未发现输尿管结石但合并肾盂结石患者,术中留置输尿管双J管。9例（11.5%）有先兆流产表现,其中A组1例（6.25%）,B组4例（7.55%）,C组4例（44.4%）。C组先兆流产的发生率高于A和B组（P<0.05）。1例（6.25%）患者出现尿源性脓毒血症,抗感染等对症处理后痊愈。所有患者均成功通过围产期并生产健康婴儿。 结论对于妊娠期肾积水合并顽固性肾绞痛的患者,早期输尿管镜腔内处理是有效安全的诊断和治疗手段,可降低孕妇和胎儿的风险。