人骨形态发生蛋白2与血管内皮生长因子165双基因真核表达质粒的构建及体外表达

目的:构建人骨形态发生蛋白2与血管内皮生长因子165双基因真核表达质粒。方法:实验于2005-03/2005-10在华中科技大学同济医学院公共实验平台完成。①通过聚合酶链反应对pcDNA3.1-BMP2及pUC-CAGGS-VEGF165的目的基因片段亚克隆并引入新的酶切位点,将其分别定向连入真核双表达载体pIRES,构建同时表达两个目的基因的双顺反子,通过聚合酶链反应、酶切分析及DNA序列测定鉴定重组质粒。②重组质粒经脂质体介导体外转染小鼠骨髓基质细胞,通过反转录-聚合酶链反应检测骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165mRNA的表达。结果:①pIRES-BMP2-VEGF165双基因表达质粒的构建和鉴定:将重组质粒pIRES-BMP2-VEGF165分别作XhoI/MluI和XbaI/NotI双酶切,经10g/L琼脂糖凝胶电泳可见1.2kbp的人骨形成蛋白2条带和592bp的血管内皮生长因子165条带,酶切条带与聚合酶链反应产物电泳带处于相同位置。经聚合酶链反应、酶切分析及DNA序列测定证实,目的基因插入片段方向正确,DNA序列无突变。②骨形成蛋白2、血管内皮生长因子165mRNA的表达:以转染pIRES空质粒为阴性对照,48h后提取转染细胞的RNA分别用P1,P2和P3,P4作为引物进行反转录-聚合酶链反应。结果表明转染pIRES-BMP2-VEGF165的小鼠骨髓基质细胞扩增出1.2kbp及592bp两条带。证实该重组质粒能在体外同时表达骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165mRNA。结论:成功构建了可同时表达骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165的双基因真核表达质粒,为进行联合基因治疗骨缺损的实验研究奠定了基础。     

后路器械复位内固定短节段脊柱融合治疗腰椎滑脱症19例报告

腰椎峡部不连或退行性腰椎滑脱是腰腿痛常见的病因之一,而脊柱外科技术的迅速发展,使其治疗效果有了很大的改善。我科1999年7月至2003年2月共收治腰椎滑脱症患者30例,其中19例采用后路器械复位内固定短节段脊柱融合获得良好效果,现报告如下。1临床资料1.1一般资料本组19例中男1     

持续髂筋膜间隙阻滞用于股骨粗隆间骨折术后镇痛的效果

目的评价髂筋膜间隙置管持续性阻滞用于股骨粗隆间骨折患者的术后镇痛效果。方法行股骨粗隆间骨折内固定术患者60例,采用髂筋膜间隙置管持续阻滞作为术后镇痛的主要手段,观察术后各时点VAS评分及并发症和使用补充镇痛例数。结果术后疼痛均有效缓解,VAS〈2,但需要补充镇痛者有24例（40．0％）,患者术后出现谵妄者有10例（16．7％）。结论髂筋膜间隙置管持续阻滞可有效缓解股骨粗隆间骨折术后疼痛。     

形状记忆合金接骨板治疗锁骨中断粉碎性骨折45例报告

目的探讨形状记忆合金接骨板治疗锁骨中断粉碎性骨折的手术方法及疗效。方法对2000年1月～2006年12月收治的45例锁骨中断粉碎性骨折患者应用TiNi形状记忆合金接骨板进行内固定治疗。其中男31例,女14例,年龄23～72岁,均为闭合性粉碎性骨折。结果45均顺利进行了手术,42例获得到随访。随访时间4-18个月。治愈40例,好转2例,差0例。本组病例治愈率达95．23％。骨折平均愈合时间8周,较通常时间早2周。结论TiNi形状记忆合金接骨板是一种适用于锁骨中断粉碎性骨折的内固定材料,治疗效果确切,手术操作简单,手术时间短,不需2次手术取出等优点。     

心俞穴位注射丹参对冠心病心绞痛患者血浆中ET-1、MDA的影响

目的：研究心俞穴位注射丹参对冠心病心绞痛患者血浆中ET－1、MDA的影响，从而探讨该病发生的体液机制。方法：观察30例冠心病心绞痛患者心俞穴位注射丹参前后血浆中ET－1、MDA的含量，与正常对照组作比较。结果：冠心病心绞痛患者血浆中ET－1、MDA的含量显著高于正常对照组（P＜0．01），经心俞穴位注射丹参治疗后显著下降至正常水平（P＜0．05或P＜0．01），心绞痛亦有效控治。结论：心俞穴位注射丹参可以缓解冠心病心绞痛患者血管内皮细胞损伤或促进其修复，抑制脂质过氧化，缓解心绞痛。     

汉防己甲素对大鼠急性脊髓损伤的作用及意义

目的：探讨汉防己甲素（Tet）对急性脊髓损伤（ASCI）的保护作用及作用机制。方法：81只大鼠随机分为三组：生盐水对照组（NS组）、汉防己甲素治疗组（Tet组）和甲基强松龙治疗组（MP组），每组27只，用加速型Allen′s打击法制成脊髓急性损伤模型，监测大鼠ASCI后及用药后的血压变化，测定损伤区脊髓Ca^2 、MDA含量；采用氢清除法测定脊髓伤区血流量（SCBF）的变化；连续观测6周ASCI后运动功能评分情况，ASCI后4h,8h、6周取伤区标本进行组织病理检查，结果：ASCI后10s各组动物的MABP显著升高，1min内迅速降至正常水平，之后Tet组舒张压，平均动脉明显降低（P＜0．05），而收缩压降低不明显（P＞0．05）；ASCI后SCBF下降，但Tet组和MP组的SCBF较NS组高（P＜0．05）；损伤区Ca^2 及MDA含量Tet组和MP组均较NS组低，神经功能评分均较NS组高。结论：Tet能改善微循环，防止SCBF的减少；抗脂质过氧化损伤，减少脂质过氧化物MDA的生成；减轻Ca^2 的局部积聚，防止钙超载，阻断继发性损伤的链式反应，减轻组织继发性损伤。对实验性急性脊髓损伤有保护作用。     

灌洗加有效固定治疗严重胫腓骨开放性骨折

胫腓骨开放性骨折多较严重而复杂,因感染而致骨髓炎,骨不愈合者较多。2000年3月以来我院应用局部抗生素液冲洗加有效固定治疗严重开放性胫腓骨骨折取得较好疗效。报告如下。     

多孔聚乙烯醇/明胶软骨组织工程支架复合材料的制备及其生物相容性

背景：以明胶为基体制备的组织工程支架材料具有良好的生物相容性和生物降解性能,但存在力学性能低,降解速率难以控制的缺陷。目的：制备一种软骨组织工程支架材料多孔聚乙烯醇/明胶复合物,并检测其理化性能和生物相容性。方法：采用乳化发泡法制备聚乙烯醇/明胶多孔支架,并通过电镜分析、力学测试、皮下植入实验,检测材料孔径和孔隙率、IR光谱、力学性能和生物相容性。结果与结论：多孔材料内部呈三维网状多孔结构,孔径均匀,有相似的孔隙率61.8%,含水率44.6%,抗拉强度为（5.01±0.03）MPa,抗压强度为（1.47±0.36）MPa,有较好的力学性能,IR光谱分析表明材料内部结构均匀。皮下植入后,炎症反应逐渐减轻,囊壁逐渐变薄,并趋于稳定,提示多孔聚乙烯醇/明胶支架材料具有较好的生物相容性和力学性能。     

pIRES-骨形态发生蛋白2质粒转染大鼠骨髓间充质干细胞后的 持续表达

背景：重组人骨形态发生蛋白2已被广泛应用于骨组织工程治疗骨缺损或骨不连,但是直接应用外源性骨形态发生蛋白2修复骨缺损效果不理想。 目的：观察转染pIRES-骨形态发生蛋白2的大鼠骨髓间充质干细胞持续合成并分泌骨形态发生蛋白2的情况。 方法：全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,脂质体介导下将真核表达质粒pIRES-骨形态发生蛋白2导入大鼠骨髓间充质干细胞。 结果与结论：ELISA结果显示,随着pIRES-骨形态发生蛋白2转染时间的延长,大鼠骨髓间充质干细胞分泌的骨形态发生蛋白2逐渐增多,至转染后10~12 d达高峰,转染后15 d,仍可见较多骨形态发生蛋白2的表达。说明转染pIRES-骨形态发生蛋白2的大鼠骨髓间充质干细胞可持续稳定分泌骨形态发生蛋白2。     

双基因活化纳米骨浆的体内成骨

背景：前期实验构建了骨形态发生蛋白2/血管内皮生长因子双基因活化纳米骨浆。 目的：观察骨形态发生蛋白2/血管内皮生长因子双基因活化纳米骨浆在动物体内成骨的基因表达和骨形成效果。 方法：取昆明小鼠24只,在其中12只右侧大腿后群肌袋内注入骨形态发生蛋白2/血管内皮生长因子＋纳米骨浆,左侧大腿后群肌袋内注入空白质粒＋纳米骨浆或纳米骨浆;在剩余12只小鼠右侧大腿后群肌袋内注入骨形态发生蛋白2＋纳米骨浆,左侧大腿后群肌袋内注入空白质粒＋纳米骨浆或纳米骨浆。术后2,4周取材作影像学检查、组织学观察和分子生物学检测。 结果与结论：术后各时间点骨形态发生蛋白2/血管内皮生长因子＋纳米骨浆组、骨形态发生蛋白2＋纳米骨浆组均有骨样组织形成;骨形态发生蛋白2/血管内皮生长因子＋纳米骨浆组局部有明显骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子的mRNA表达,并且碱性磷酸酶水平、成骨速度及新生骨量明显优于骨形态发生蛋白2＋纳米骨浆组（P 〈 0.05）;空白质粒＋纳米骨浆组、纳米骨浆组无明显成骨表现。表明纳米骨浆经骨形态发生蛋白2/血管内皮生长因子质粒或骨形态发生蛋白2质粒活化后,在体内具有了一定的成骨能力,且前者在成骨速度和质量方面较后者明显增强。