小鼠TERT启动子调控的CD80-SEA基因重组腺病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达鉴定

目的:构建小鼠端粒酶反转录酶(mTERT)启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)和CD80基因共表达重组腺病毒载体,并观察其介导的SEA和CD80在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中的表达情况。方法:采用AdEasy腺病毒体系,亚克隆mTERT核心启动子区至穿梭质粒pShuttle2,并在其上游插入myc-Max反应元件MMRE,用来调控SEA及CD80基因的表达,构建SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体Ad-MMRE-mTERT-BIS,制备病毒并纯化,然后将病毒以感染复数为100的浓度分别感染肝癌细胞系Hepa1-6和成纤维细胞系NIH3T3。采用免疫荧光染色法检测SEA和CD80在细胞膜表面的表达情况。结果:重组腺病毒载体Ad-MMRE-mTERT-BIS感染的Hepa1-6肝癌细胞膜上能够共表达SEA和CD80;而病毒感染的NIH3T3细胞不能表达SEA和CD80。结论:成功地构建了mTERT启动子调控的SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体,能够调控SEA和CD80基因在肝癌细胞中的靶向表达,为进一步研究肝癌的靶向基因治疗奠定了基础。     

牛骨胶原蛋白肽促进HOB增殖

目的 研究牛骨胶原蛋白肽(Bovine Collagen peptides,BCP)对人成骨细胞(Human Oseoblast,HOB)增殖的影响.方法 分离培养HOB,茜素红染色鉴定HOB的成骨特性,利用MTT实验检测胶原蛋白肽对HOB的增殖,流式细胞仪测定胶原蛋白肽对HOB细胞周期.结果 茜素红矿化染色结果表明,HOB具有成骨能力.MTT实验表明0.3 mg/ml胶原蛋白肽能显著促进细胞的增殖,并能增加G2 +S期的百分含量.结论 牛骨胶原蛋白肽能够促进HOB增殖,为骨质疏松的预防和治疗提供理论依据.     

乳腺动态增强MRI参数与肿瘤血管的相关性及其鉴别诊断价值

目的探讨乳腺动态增强（DCE）MRI的各项参数：时间-信号强度曲线（TIC）、早期增强率（EER）、最大线性斜率（slope）、最大强化率（Slmax）、达峰时间（Tpeak）、MIP图血管计数（NTV）与微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）之间的相关性及其对乳腺良、恶性病变的鉴别价值。方法对52例确定一周内手术治疗的乳腺疾病患者行术前DCE-MRI扫描,记录上述参数。对切除病变行常规病理和免疫组化检查,观察边缘MVD（mMVD）、中心MVD（cMVD）和VEGF的表达。将DCE-MRI各项参数与免疫组化结果进行相关性分析。结果乳腺病变的mMVD、VEGF表达与TIC类型、Tpeak、及NTV育相关性;其中TIC类型与mMVD关系最为密切,Tpeak与VEGF之间的关系最密切;cMVD与各参数间无明显线性关系。52例患者中乳腺癌22例,良性病变30例。恶性病变的TIC呈Ⅲ或Ⅱ型,EER、NTV和DMVD、VEGF的表达明显高于良性病变,而Tpeak及SImax显著低于良性病变（P〈0．005）。Slope在良、恶性病变中无显著性差异。结论乳腺DCE—MRI多项参数中,TIC类型、NTV、Tpeak与MVD和VEGF有相关性,反映了良、恶性病变的血管生长差异,具有很大的鉴别诊断价值。     

小鼠TERT启动子的克隆及在肿瘤细胞中的转录活性研究

目的：克隆不同长度的小鼠端粒酶逆转录酶（mouse telomerase reverse transeriptase,mTERT）启动子,研究其在小鼠肝癌细胞Hepal-6、结肠癌细胞CT26、恶性黑色素瘤细胞B16和小鼠成纤维细胞NIH3T3中的转录活性。方法：以Hepal-6细胞的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增不同长度的mTERT启动子片段,分别命名为mTERT1至7;然后分别克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3～Basic构建真核表达载体;采用脂质体Lipofectamine2000将重组质粒分别和pRL—CMV共转染Hepal-6、CT26、B16和NIH3T3细胞,采用双荧光素酶法检测不同长度的mTERT启动子片断在细胞中的转录活性。结果：双酶切和测序鉴定均显示不同长度的mTERT启动子克隆成功及其表达载体构建成功;荧光素酶活性检测显示mTERT1至5在3种肿瘤细胞中有较高的转录活性,而在NIH313细胞中的活性较低,mTERT6和mTERT7在所有细胞中均很低;同一片断在不同肿瘤细胞株中活性不同。结论：mTERT核心启动子区位于ATG上游333bp内,且具有肿瘤特异性。