穴位注射葛根素对布比卡因中毒大鼠心肌线粒体能量代谢的影响及其机制研究

背景 布比卡因是临床中广泛使用的麻醉药物,但其具有心脏毒性,目前尚没有安全有效的解毒方法。本课题组前期实验结果显示穴位处理用于治疗布比卡因所引起的心脏毒性有一定作用,但其具体的作用机制还有待进一步研究。 目的 观察穴位注射葛根素对布比卡因中毒大鼠心肌线粒体能量代谢的影响,并探究其作用机制。 方法 实验时间为2019年1—12月,选取6月龄SPF级Wistar雄性大鼠40只,依据随机数字表法将大鼠分为空白组（C组）、模型组（B组）、治疗组（T组）、预防组（P组）,每组10只。P组：双侧内关穴分别注入0.1 ml的葛根素注射液。5 min后,开始建立布比卡因中毒模型（C组除外）,建模具体方法为经股静脉2 min内静脉滴注0.5%布比卡因10 mg/kg。C组不建模,于双侧内关穴分别注入0.1 ml 0.9%氯化钠溶液。B组：建模成功后即刻取双侧内关穴分别注入0.1 ml 0.9%氯化钠溶液。T组：建模成功后即刻取双侧内关穴分别注入0.1 ml葛根素注射液。C组在静脉滴注0.9%氯化钠溶液的第8分钟,B组、T组、P组分别在静脉滴注利多卡因的第8分钟处死大鼠,提取所有大鼠左室心肌,分离心肌细胞线粒体。采用透射电镜观察线粒体结构,Flameng评分法评价线粒体半定量结构,酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定心肌线粒体三磷酸腺苷合成酶（ATPase）活性,比色法测定三磷酸腺苷（ATP）含量,荧光比色法测定线粒体膜电位（MMP）,Western blotting法测定心肌线粒体过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（PGC-1α）、核呼吸因子（NRF1）、线粒体转录因子A（mtTFA）蛋白水平。 结果 B组、T组、P组大鼠Flameng评分法得分高于C组,P组大鼠Flameng评分法得分低于B组、T组（P<0.05）。B组、T组大鼠ATPase活性低于C组,P组大鼠ATPase活性高于B组、T组（P<0.05）。B组、T组、P组大鼠ATP含量、MMP及PGC-1α、NRF1、mtTFA蛋白水平低于C组（P<0.05）。T组、P组大鼠ATP含量、MMP、PGC-1蛋白水平高于B组（P<0.05）。P组大鼠NRF1蛋白水平高于B组、T组（P<0.05）。T组、P组大鼠mtTFA蛋白水平高于B组,P组大鼠mtTFA蛋白水平高于T组（P<0.05）。 结论 穴位注射葛根素可减轻布比卡因致心肌线粒体的损伤,其作用机制可能为调节线粒体内ATP合成相关蛋白PGC-1α、NRF1、mtTFA含量来保护线粒体能量代谢。     

靶控输注异丙酚对心脏瓣膜置换术患者中性粒细胞NF-кB、bcl-2表达的影响

目的探讨体外血循环下心脏瓣膜置换术靶控输注异丙酚后对患者外周血中性粒细胞NF-кB、bcl-2表达的影响.方法择期行心脏瓣膜置换术患者60例(ASAⅡ～Ⅲ级),随机分为实验组和对照组,每组30例.实验组在麻醉诱导后靶控输注初始血药浓度为2.5μg/L的异丙酚,根据患者麻醉深度调整异丙酚血浆靶浓度,最大可达3.4μg/L,同时复合枸橼酸芬太尼、维库溴铵维持麻醉;对照组术中间断静注咪唑安定、枸橼酸芬太尼、维库溴铵维持麻醉,分别于麻醉诱导后即刻和CPB停机后30min抽取患者中心静脉血,用流式细胞仪测定外周血中性粒细胞NF-кB、bcl-2的表达.结果中性粒细胞NF-кB、bcl-2表达,两组在CPB后均显著升高(P＜0.05、P＜0.01),且对照组明显高于实验组(P＜0.01).中性粒细胞数,两组在CPB后均显著升高(P＜0.01),对照组明显高于实验组(P＜0.01).结论异丙酚可通过抑制中性粒细胞NF-кB、bcl-2的活化而减少炎性介质的合成,从而拮抗过度的全身炎症反应,对机体发挥保护作用.     

沉默信息调节因子1在肠道疾病中的作用及药物干预研究现状

沉默信息调节因子1(SIRT1)作为一种去乙酰化酶,可以脱去多种靶蛋白赖氨酸残基的乙酰基。近年来,越来越多的研究证实SIRT1在肠道疾病的发病机制中占有重要的地位。因此,SIRT1可能成为治疗肠道疾病的潜在靶点。本文综述了SIRT1对氧化应激,炎症与细胞凋亡等生物效应的调控作用;归纳总结了SIRT1在脓毒症肠损伤,肠缺血再灌注损伤,放射性肠损伤,肠道炎症性疾病等疾病中的变化和作用,以及靶向SIRT1治疗肠道疾病的药物研究进展,旨在探讨肠道疾病新的防治策略。     

丁酸盐在肠道疾病中作用和机制的研究进展

丁酸盐是结肠和盲肠部位的微生物群酵解膳食纤维和部分氨基酸的主要产物,可减轻肠道炎症,调节肠道菌群平衡,改善肠黏膜屏障等。近年来国内外诸多研究表明丁酸盐在炎症性肠病、肠易激综合征、肠缺血再灌注损伤、结直肠癌、短肠综合征等肠道疾病中发挥作用。本文就丁酸盐在肠道疾病中作用和机制的研究进展作一综述。     

脂肪乳对布比卡因中毒大鼠心肌线粒体能量代谢损伤的影响

目的探讨脂肪乳对布比卡因中毒大鼠心肌线粒体能量代谢损伤的影响。方法雄性Wistar大鼠40只,6月龄,体重250～300 g。采用随机数字表法分为四组:空白对照组(C组)、布比卡因中毒模型组(B组)、脂肪乳治疗组(T组)、脂肪乳预防组(P组),每组10只。C组经股静脉输注生理盐水3 ml/kg; B组经股静脉输注0.5%布比卡因10 mg/kg,出现心律失常后立即输注生理盐水3 ml/kg; T组经股静脉输注0.5%布比卡因10 mg/kg,出现心律失常后立即输注20%脂肪乳3 ml/kg; P组经股静脉输注20%脂肪乳3 ml/kg后5 min,输注0.5%布比卡因10 mg/kg。C组在开始输注生理盐水的第8分钟,B组、T组和P组在开始输注布比卡因的第8分钟处死大鼠。取左室心肌组织,分离心肌细胞线粒体。采用ELISA法测定心肌线粒体ATP酶(ATPase)活性,磷钼酸比色法测定ATP浓度,荧光比色法测定线粒体膜电位(MMP),Western blot法测定心肌线粒体过氧化物酶体增生物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子A(mtTFA)蛋白含量,透射电镜观察线粒体结构。结果与C组比较,B组、T组和P组心肌线粒体ATPase活性、ATP浓度、MMP和PGC-1α、NRF1蛋白含量均明显降低(P0.05),B组和T组心肌线粒体mtTFA蛋白含量均明显降低(P0.05),P组心肌线粒体mtTFA蛋白含量差异无统计学意义。与B组比较,T组和P组心肌线粒体ATP浓度、MMP、PGC-1α、NRF1、mtTFA蛋白含量均明显升高(P0.05),P组心肌线粒体ATPase活性均明显升高(P0.05),T组心肌线粒体ATPase活性差异无统计学意义。与T组比较,P组心肌线粒体ATPase活性、PGC-1α、NRF1、mtTFA蛋白含量均明显升高(P0.05),心肌线粒体ATP浓度和MMP差异无统计学意义。电镜下C组心肌纤维排列紧密,线粒体丰富,包膜完整;B组心肌纤维排列紊乱,线粒体分布不均匀,部分线粒体变形;T组和P组心肌纤维排列尚可,线粒体较丰富,部分线粒体变形。结论脂肪乳可以升高心肌线粒体ATPase活性、ATP浓度、MMP及线粒体内ATP合成相关蛋白PGC-1α、NRF1、mtTFA含量,减轻布比卡因中毒大鼠心肌损伤,预防使用脂肪乳效果更优。     

大麻素2 型受体激动剂对脓毒症大鼠急性肾损伤的影响*

目的 探讨大麻素2型受体激动剂对脓毒症大鼠急性肾损伤的影响。方法 选取健康成年雄性SD 大鼠24 只,按照随机数字表法将大鼠分为假手术组（Sham 组）、脓毒症组（Sep 组）、脓毒症+CB2R 激动剂 JWH133组（Sep+JWH133组）,每组8只。采用盲肠结扎穿孔法复制脓毒症大鼠模型,Sep+JWH133组于术后 1 h腹腔注射JWH133 1.5 mg/kg,Sham组和Sep组分别于上述时间点腹腔注射等量生理盐水,模型复制24 h后, 心脏采血。采用ELISA法检测血清肌酐（Scr）水平;HE染色法观察小肠组织及肾脏组织病理改变;免疫组织化 学法测定肾脏自噬相关蛋白Beclin-1、Atg5的表达水平。结果 光镜下Sham组为正常小肠和肾脏组织,无出血 及炎症浸润,小肠组织损伤程度为0级。Sep组小肠绒毛上皮组织缺失或连续性中断,黏膜血管出血,炎症细胞 大量浸润,组织损伤程度≥3级;肾脏近端小管上皮细胞排列紊乱,肾小球体积明显增大,系膜细胞肿胀,间 质有明显出血及大量炎症细胞浸润。Sep+JWH133组病理改变明显减轻,小肠绒毛上皮组织较完整,仅有少许 血管出血,少量炎症细胞浸润,组织损伤程度≤2 级;肾脏结构较完整,间质仅有少量出血及炎症细胞浸润。 Sep 组和Sep+JWH133 组Scr、肾小管Paller 评分较Sham 组升高（P <0.05）,Sep+JWH133 组SCr、肾小管Paller 评分较Sep 组降低（P <0.05）。Sep 组和Sep+JWH133 组自噬相关蛋白Beclin-1 和Atg5 的表达较Sham 组上调 （P <0.05）,Sep+JWH133 组Beclin-1 和Atg5 的表达较Sep 组上调（P <0.05）。结论 大麻素2 型受体激动剂可 以减轻脓毒症大鼠急性肾损伤,其作用机制可能与诱导肾脏自噬表达上调有关。     

异丙酚后处理联合缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨异丙酚后处理联合缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性sD大鼠30只,体重200～250 g,随机分为5组(n=6),假手术组(Ⅰ组)仅开腹;缺血再灌注组(11组)肝脏缺血1 h再灌注4 h;缺血后处理组(Ⅲ组)肝脏缺血1 h后,再灌注10 8,缺血10 8,重复6次进行缺血后处理;异丙酚后处理组(Ⅳ组)肝脏缺血1 h后经尾静脉注射异丙酚10 mg/kg,随后静脉输注异丙酚40 mg·kg~(-1)·h~(-1) h;异丙酚后处理+缺血后处理组(V组)肝脏缺血1 h后进行异丙酚后处理及缺血后处理.于再灌注4 h时测定血清ALT活性、肝组织MDA含量、SOD活性、Bcl-2及Bax的蛋白表达水平,电镜下观察肝细胞超微结构.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组～Ⅴ组血清ALT活性及肝组织MDA含量升高,肝组织Bcl-2蛋白表达上调,Ⅲ组-Ⅴ组肝组织SOD活性升高,Ⅱ组、Ⅲ组及Ⅴ组肝组织Bax蛋白表达上调(P<0.05或0.01);与Ⅱ组比较,Ⅲ组-Ⅴ组血清ALT活性及肝组织MDA含量降低,肝组织SOD活性升高,Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调(P<0.05或0.01);与Ⅲ组比较,Ⅳ组血清ALT活性及肝组织MDA含量降低(P<0.05或0.01).Ⅲ组-Ⅴ组肝组织病理学损伤较Ⅱ组明显减轻.结论 异丙酚后处理联合缺血后处理可减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤,与异丙酚后处理单独应用时效果相同,其机制可能与抑制肝组织脂质过氧化反应及细胞凋亡有关.     

促红细胞生成素后处理在兔蛛网膜下腔出血中的作用

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)后处理对家兔蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛的逆转作用.方法 30只新西兰白兔按照随机数字表法分为5组:Sham组、SAH0组、SAH1组、SAH2组、SAH3组.Sham组假穿刺,其他4组行枕大池穿刺注血的方法造模.Sham组和SAH0组造模24 h后静脉单次注入生理盐水0.1 mL/kg,SAH1组、SAH2组、SAH3组分别静脉单次注入EPO 500 IU/kg、1000 IU/kg、2000 IU/kg.所有动物存造模完成后48 h处死,使用Image Pro Plus 6.0图像分析系统测量分析并比较不同组问基底动脉管腔面积、基底动脉收缩系数以及海马CAI区神经元密度.结果基底动脉形态学观察结果可见Sham组血管管壁无增厚、无增生或坏死:SAH0组、SAH1组血管壁明显增厚,结构紊乱,中膜明显变厚,平滑肌排列紊乱;SAH3组血管内弹力膜皱折,SAH2组血管改变介于SAH1和SAH3组之间.基底动脉管腔面积SAH2组[(0.10±0.01)mm2]、SAH3组[(0.16±0.02)mm2]较SAH0组[(0.07±0.02)mm2]明显增大,基底动脉收缩系数SAH2组(1.22±0.06)、SAH3组(1.15±0.03)较SAH0组(1.31±0.09)明显减小,海马神经元密度SAH3组[(126.8±5.7)个/mml较SAH0组[(99.3±9.6)个/mm]明显增大,差异均有统计学意义(p<0.05).结论 在SAH后24h,单次静脉注射EPO不仅可以逆转家兔基底动脉痉挛,还可以减轻其脑神经细胞损伤.     

盐酸戊乙奎醚对肢体缺血再灌注大鼠肾脏的保护作用

目的 探讨盐酸戊乙奎醚后处理对肢体缺血再灌注后肾脏的保护作用及其机制.方法 健康成年雄性Wistar大鼠72只,体重220～250 g,随机数字表法分为3组:对照组(C组)、肢体缺血再灌注组(I/R组)、盐酸戊乙奎醚后处理组(P组),根据缺血后再灌注时间点各组又分为缺血3 h(T0)、再灌注1 h(T1)、3 h(T2)、6 h(T3)四个亚组(n=6).除C组外,各组在大鼠双后肢根部用橡皮筋结扎,完全阻断血流3 h.P组在再灌注前3 min尾静脉注射盐酸戊乙奎醚0.15 mg/kg(0.8ml).比色法检测血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)的含量、肾脏组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量,酶联免疫吸附法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,免疫组织化学SABC法测定肾脏组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达,光镜下观察肾脏组织的病理学改变.结果 I/R组和P组血清BUN、Cr水平、SOD的活性、MDA水平、TNF-α水平、HIF-1α的表达均高于C组(均P<0.05);P组血清BUN、Cr、MDA、TNF-α水平及、HIF-1α表达均低于I/R组[T2时间点:(15.10 ±1.88)mmol/L比(19.46±2.76)mmol/L、(113±10)μmol/L比(143±11)μmol/L、(13.8 ±1.7)nmol/g比(15.5±1.8)nmol/g、(53.1±3.1)ng/L比(53.9±4.8)ng/L、0.298±0.015比0.471±0.032,均P<0.05],SOD的活性高于I/R组(P<0.05).结论 盐酸戊乙奎醚后处理可以下调HIF-1α的表达,减轻肢体缺血再灌注后肾脏的损伤.其机制可能是抑制了炎症反应及氧自由基的释放,改善了肾脏组织的缺血、缺氧状态.

Abstract：

Objective To evaluate the protection of penehyclidine hydrochloric postconditioning on HIF-1α (hypoxia-inducible factor -1α) in renal tissue injury induced by lower limb ischemia/reperfusion (I/R). Methods A total of 72 adult male Wistar rats weighing 230 - 250 g were randomly divided into 3 groups: control ( group C ) , limb ischemia-reperfusion ( group R/I) and penehyclidine hydrochloride postconditioning (group P). The animals were anesthetized by inhaling 2% isoflurane and blood flow of bilateral lower limbs was blocked with rubber bands for 3 h in groups P and R/I. In group P, penehyclidine hydrochloride 0. 15 mg/kg was injected via caudal vein at 3 min pre-reperfusion. After sacrificing, their kidneys were removed at 3 h of ischemia and 1, 3, 6 h of reperfusion respectively. The blood urea nitrogen (BUN) and creatinine ( Cr) were detected by colorimetric method, plasma tumor necrosis factor-α (TNF-α) by ELISA ( enzyme-linked immunosorbent assay ) and HIF-1α of renal tissue by immunohistochemistry. Renal pathological changes were observed under light microscope. Results Compared with group C, the serum levels of BUN and Cr increased while TNF-α and HIF-1α were upregulated in groups I/R and P (P < 0. 05). As compared with group I/R, the serum levels of BUN, Cr and MDA decreased while TNF-α and HIF-lα were down-regulated in group P . [at T2: (15. 10 ± 1. 88) mmol/L vs(19.46±2. 76) mmol/L, (113 ±10) μmol/L vs(143 ± 11) μmol/L, (13. 8 ±1.7) nmol/g vs (15.5 ±1.8) nmol/g, (53.1 ±3. 1)ng/L vs(53.9 ±4. 8) ng/L, 0.298 ±0.015 vs 0.471 ±0.032, all P<0.05 ]. Conclusion Penehyclidine hydrochloride can down-regulate the expression of HIF-lα and attenuate the renal injury induced by lower limb I/R. And the mechanisms may be through inhibiting the inflammatory reactions, reducing the release of oxygen free radicals and improving the conditions of hypoxia and ischemia.     

舒芬太尼复合异丙酚靶控输注对单肺通气肺内分流的影响

目的:研究舒芬太尼-异丙酚靶控静脉麻醉与异氟醚麻醉对单肺通气(One-lung ventilation,OLV)肺内分流和肺顺应性(Dynamic compliance of lung,Cdyn)的影响。方法:择期行中、下段食管癌根治手术患者20例,ASAⅠ～Ⅱ级,随机分为2组(n=10):舒芬太尼-异丙酚组(SUF组),靶控输入效应室浓度为0.5 ng/ml舒芬太尼和3μg/ml异丙酚麻醉;异氟醚组(ISO组),吸入1%～3%异氟醚维持麻醉。分别于麻醉后双肺通气30 min(T0)、单肺通气30 min(T1)、60 min(T2)、90 min(T3)等4个时间点经桡动脉、颈内静脉采血做血气分析,计算肺内分流率(Qs/Qt)和Cdyn。结果:与T0时点相比,2组Qs/Qt在T1～T3时点显著增加(P<0.05),Cdyn在T1～T3时点显著降低(P<0.05);与ISO组相比,SUF组Qs/Qt在T1～T3时点降低(P<0.05),Cdyn在T1～T3时显著增加(P<0.05)。与T0时点相比,PaO2在OLV后明显下降(P<0.05),组间相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:舒芬太尼-异丙酚靶...