甲状腺球蛋白抗原决定簇基因的克隆及原核表达载体的构建

目的：扩增甲状腺球蛋白抗原决定簇基因，构建可转化人大肠杆菌的重组表达载体。方法：用TRIzol一步法从甲状腺组织中提取总RNA，RT—PCR逆转录出cDNA，PCR扩增出目的基因，与pET102／D—TOPO载体进行拓扑克隆．对重组质粒进行PCR、酶切及测序鉴定。结果：甲状腺球蛋白抗原决定簇基因及其重组表达载体经鉴定准确无误。结论：成功构建了带有目的基因的原核表达载体。     

甲状腺乳头状癌中原癌基因c-fos的低表达

甲状腺乳头状癌是临床常见的肿瘤 ,约占各种甲状腺癌的 80 %。目前认为 ,原癌基因在肿瘤形成过程中起着重要作用 ,其中ｃ ｆｏｓ是核蛋白癌基因 ,它的激活是基因表达最早的变化之一。因此 ,它与细胞癌变之间的关系就更加受到人们的关注。因样品中细胞数量的不同会影响检测结果 ,我们在国内首次引入细胞管家基因 β ａｃｔｉｎ作为多重扩增的内参照物 ,达到资料比较的标准化 ,用于研究ｃ ｆｏｓ在甲状腺乳头状癌中的表达。一、材料与方法1 材料 :(1)乳头状癌组 :14例经病理学检验确诊为甲状腺乳头状癌的组织标本。 (2 )正常对照组 :包括 3例…     

高甘油三酯血症患者血清sICAM-1的变化对预测动脉粥样硬化病变的意义

目的探讨单纯高甘油三酯血症患者血清细胞间粘附分子-1（sICAM-1）的变化及其对早期预测动脉粥样硬化的意义.方法利用^125I-sICAM-1放射免疫分析（RIA）方法测定35例单纯高甘油三酯血症患者和33例健康人血清sICAM-1水平.结果单纯高甘油三酯血症患者血清sICAM-1水平高于对照组（P＜0.01）,且血清sICAM-1与甘油三酯呈正相关（P＜0.01）,多元逐步回归显示甘油三酯为影响血清sICAM-1最为显著的因素（R^2=0.53）.结论sICAM-1表达增加可能与高甘油三酯血症相关,有助于早期预测动脉粥样硬化病变的发生.     

人ICAM-1膜外Ⅰ-Ⅲ功能区基因在原核系统中表达,人血清sICAM-1 RIA建立和临床应用

人细胞间粘附分子-1（intracellular adhesion molecule—1,ICAM—1）是一种细胞表面单链跨膜糖蛋白,参与抗原识别、补体结合、细胞粘附功能。其膜外区脱落人血称为可溶性细胞间粘附分子-1（sICAM—1）,在甲状腺滤泡上皮细胞的异常表达与Graves’disease（GD）的发病相关,其血清水平对判断GD的疗效、停药和复发具有重要意义,目前国内尚无重组sICAM—l和sICAM-1 RIA建立的报道,国外仅有sICAM—1酶免试剂盒,但价格较高．不易推广。     

一个新型检测人甲状腺过氧化物酶抗体ELISA技术的临床应用

目的:以重组人甲状腺过氧化物酶(hTPO)为抗原检测人甲状腺过氧化物酶抗体(hTPOAb)的ELISA用于甲状腺疾病临床检测。方法:用该法测定552例正常人,各类甲状腺疾病患者592人次,包括Graves病(GD)364人次(初诊64例及复诊300人次),桥本氏病(HT)142例,单纯甲状腺肿34例,亚急性甲状腺炎23例,结节性甲状腺肿19例,腺瘤10例。结果:确立本法阳性切限为A405值P95为0.74,测定各类甲状腺疾病患者hTPOAbA405值结果以中位数(M)表示,HT为1.19,阳性率87.32%;Graves’病治疗前是0.51,阳性率26.56%,治疗后为0.62,阳性率30.67%;亚急性甲状腺炎为0.48,阳性率为17.39%;单纯甲状腺肿为0.58,阳性率为0;结节性甲状腺肿为0.69,阳性率21.05%;腺瘤为0.68,阳性率20%。HT患者血清hTPOAb阳性率明显高于其他各组(P<0.01)。结论:以重组hTPO为抗原建立的ELISA法特异、稳定、简便,可以常规应用于临床,并可作为HT的特异性诊断手段。     

^131I治疗老年与中青年Graves病患者临床分析

目的：分析老年与中青年Graves病（GD）患者临床特点及^131I治疗效果。方法：726例接受^131I治疗并且随访1年以上的GD患者中,老年组（年龄≥60岁）74例,中青年组（年龄〈60岁）652例,对其临床特点及^131I治疗效果进行对比研究。结果：老年GD患者FT3、FT4、甲状腺重量、甲状腺最高吸^131I率与中青年患者比较其差别有统计学意义（P〈0．05）,而有效半衰期无统计学意义（P〉0．05）;老年患者合并心房颤动、心力衰竭、肝功能损害、白细胞减少症、糖代谢异常等较为常见,结果显示两组比较差别有高度统计学意义（P〈0．001）;^131I治疗后1年老年组与中青年组GD患者临床痊愈率、好转率、无效及甲低发生率分别为66．2％、71．3％;14．9％、21．6％;5．4％、1．7％;13．5％、5．4％,其差别有统计学意义（P〈0．05）。结论：^131I治疗可作为老年GD患者的首选治疗方法。     

Graves病患者治疗前后血清可溶性细胞间黏附分子-1变化的研究

目的:探讨Graves病(GD)患者血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)水平在治疗前后不同时期的变化及临床意义.方法:应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别测定GD患者治疗前和抗甲状腺药物(ATD)治疗后3、6、12、18、24和30个月的血清sICAM-1水平,并与正常对照组相比,同时测定血清游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、超敏促甲状腺素(sTSH)与sICAM-1进行相关分析.结果:116例正常人sICAM-1为(125.27±29.55)μg/L,阳性率3.45%(4/116);初发GD患者295例为(236.68±72.74)μg/L,阳性率为75.59%(223/295),显著高于正常对照组(P<0.01);应用ATD系统治疗后,在3、6、12、18、24和30个月阳性率分别为78.42%(149/190)、63.01%(92/146)、53.91%(62/1151、30%(24/80)、18.52%(10/54)和13.64%(2/22);至30个月时与正常对照组相比较,血清slCAM-1水平及阳性率差异已无统计学意义(均P>0.05);初诊及治疗后各时期GD患者血清sICAM-1与FT3、FT4、sTSH间均无显著相关性(均P>0.05).结论:血清sICAM-1可反映GD患者的免疫损伤状态,其作为1个免疫指标对GD辅助诊断、疗效观察以及停药时机的确定有一定的临床意义.     

NF-κB抑制剂与紫杉烷联合靶向性化疗在未分化甲状腺癌治疗中的应用

目的:研究核因子κB(NF-κB)抑制剂和紫杉烷对未分化甲状腺癌(ATC)的联合治疗机制.方法:应用细胞存活分析法研究单独或联合应用DHMEQ和紫杉烷后ATC细胞的凋亡情况;通过DNA结合实验分析药物作用后核内NF-κB与其特异的寡聚核苷酸探针结合能力的变化;应用Western blot鉴定药物作用后ATC细胞内凋亡关键因子(PARP和Caspase 3)的变化.结果:细胞存活分析法证明联合用药组与单独用药组比较存活的ATC细胞显著减少(P<0.01);紫杉烷诱导ATC细胞NF-κB增高,而预先用NF-κB抑制剂预处理1 h可以有效地抑制这种现象,按时程在紫杉烷作用0、2、4、8、12和24h时间点的差异均有统计意义(P<0.01);Western blot证实联合用药后PARP的失活裂解产物和Capsase 3的活化水解产物明显增多.结论:紫杉烷在诱导ATC凋亡的同时会导致ATC细胞NF-κB的增高从而削弱其疗效,当与NF-κB抑制剂联合使用可以获得协同的疗效.     

^99Tc-亚甲基二磷酸盐对^131Ⅰ治疗后Graves眼病转归的影响

目的观察102例伴有突眼的Graves眼病患者^131Ⅰ治疗后的疗效,探讨^99Tc-亚甲基二磷酸盐（^99Tc-MDP,云克）对^131Ⅰ治疗后Graves眼病转归的影响。方法102例Graves眼病患者随机分成云克治疗组56例和对照组46例,全部病例均按照常规程序接受^131Ⅰ治疗。治疗结束后6个月门诊随访疗效。结果^131Ⅰ治疗后甲状腺功能亢进（甲亢）痊愈及好转的患者中,云克治疗组64.3％（27／42）的患者Graves眼病得到缓解;即使^131Ⅰ治疗后发生甲状腺功能减退（甲低）,云克治疗组Graves眼病的总有效率仍高达66．7％（8／12）,与对照组（O）比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论云克治疗可作为合并有Graves眼病的甲亢患者^131Ⅰ治疗前的一种有效的辅助治疗措施,提高^131Ⅰ治疗后Graves眼病的缓解率,在一定程度上可防止甲低发生时加重突眼。     

人甲状腺钠/碘转运体基因全长的克隆及其重组表达质粒的构建

目的:利用基因工程的方法制备甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)cDNA,为今后的转基因治疗奠定物质基础。方法:采用TRIzol一步法,从甲状腺组织中提取总RNA,再应用RT-PCR扩增出hNIS基因全长,然后采用TOPO克隆技术构建重组表达质粒pcDNA3.1D/FLhNIS,并进行酶切和测序鉴定。结果:成功制备了hNIScDNA并构建了其重组表达质粒。结论:为最终实现131I治疗不摄碘的肿瘤提供了分子生物学基础。