饲养层体系的建立与胚胎干细胞的培养

胚胎于细胞(ES细胞)是南早期胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分离、抑制分化培养获得的多潜能细胞。ES细胞的研究已在多种动物实验中获得了突破性进展。ES细胞在体外培养不仅要保持其增殖能力,而且要维持其未分化的状态。由于饲养层细胞能分泌白血病抑制因子(IAF)等抑制ES细胞分化的凶子,目前,ES细胞的培养主要是以饲养层来维持其干细胞特性。本实验探讨了胎鼠成纤维细胞(MEF)的分离培养、传代及其作为饲养层细胞的处理条件,建立快速稳定的MEF培养体系,并在此基础上探索了小鼠ES细胞的适宜培养、传代条件。     

两株新的鼠抗人OX40L单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究

目的:鼠抗人OX40L分子功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人OX40L分子的基因转染细胞L929/OX40L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,经流式细胞术(FCM)分析和多次克隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人OX40L分子mAb的杂交瘤细胞株;采用Westernblot、Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法和MTT增殖试验等对单抗的生物学特性进行鉴定。结果:获得2株持续、稳定分泌鼠抗人OX40LmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4D6和5C2。对mAb生物学功能的研究结果表明,2株mAb均能识别成熟DC细胞以及Jurkat、SHI-1、U937等白血病细胞株表面的OX40L分子。对其中SHI-1白血病细胞株增殖影响的实验显示,这2株抗体对SHI-1的增殖都具有一定的抑制作用。结论:成功地获得了2株鼠抗人OX40L功能性mAb杂交瘤,其所分泌的抗体能特异地识别人OX40L分子,并影响表达OX40白血病细胞株的体外增殖,为进一步研究OX40/OX40L的生物学功能奠定了基础。     

人共信号分子HVEM在外周血PBMC表达特性及其对T细胞的生物学作用

HVEM既可作为受体与LIGHT作用传递正性共刺激信号,又能作为配体作用于BTLA介导负性共抑制信号。为深入探讨HVEM对T细胞复杂而又独特的调控作用,本文研究了HVEM在免疫细胞上的表达特性,初步探讨了T细胞表达的HVEM分子所介导的生物学作用。采用LPS刺激人新鲜PBMC,以及PHA或PMA/IM刺激活化T细胞;间接免疫荧光标记和流式细胞术检测HVEM表达;MTT法分析T细胞增殖作用。结果显示,HVEM在不同条件刺激活化的T细胞表面均呈现先上调后下调表达;T细胞增殖试验表明,基因转染细胞L929/LIGHT能够明显促进T细胞的增殖及IL-2和IFN-γ的分泌,而以抗人BTLA单抗在一定程度上模拟HVEM所介导的BTLA/HVEM信号能够明显抑制T细胞增殖作用及细胞因子IL-2、IFN-γ和IL-10的产生。     

LDLR基因配体结合区多态性与丙型肝炎病毒易感性的相关研究

目的探讨低密度脂蛋白受体(LDLR)基因是否存在与丙型肝炎病毒(HCV)感染有关的单核苷酸多态性(SNP).方法利用PCR结合DNA自动测序对HCV感染者和正常人的LDLR基因的配体结合区进行分析.结果没有发现与HCV感染相关的多态性位点.结论LDLR基因的配体结合区与(HCV)感染的易感性无关.     

一种改进的从细菌人工染色体中亚克隆DNA片段的方法

目的 运用基于PCR的重叠区延伸法构建缺口修复载体,通过同源重组的方式从细菌人工染色体(BACs)中亚克隆DNA片段.方法 用基于PCR的重叠区延伸法将线性化质粒骨架分子、较长的上游和下游同源臂(200～500bp)串联起来构建成缺口修复载体.将此载体电击转入含有BAC的EL350菌中,经热激诱导Red重组酶瞬时表达,使缺口修复载体与BAC发生同源重组.结果 重叠区延伸法构建的两个缺口修复载体分别成功地从BAC中亚克隆得到目的DNA片断.结论 该方法省去了酶切、连接、转化等繁琐的克隆步骤,大大缩短了实验周期,提高了实验效率,为基因组BAC测序过程中的缺口封闭及复杂的打靶载体构建提供了较为便捷的方法.     

正常人膝关节三维有限元模型的建立

目的 在膝关节MRI基础上建立膝关节三维有限元模型,探讨对半月板及软骨建模的效果.方法 对MRI图像进行处理和转换,在逆向工程理念下,建立膝关节三维有限元模型.结果 建立了包括膝关节所涉及的几乎所有骨骼、软骨、半月板和韧带等基本力学结构的模型,模型形态逼真,能在力学性质上很好地模拟膝关节.结论 MRI基础上建立的有限元模型可较真实地模拟膝关节的几何结构,逆向工程理念在膝关节三维有限元模型建立方面具有可行性和创新性.     

2007年国家自然科学基金流行病学领域评审资助情况

近年来,国家自然科学基金预防医学学科优先资助根据我国公共卫生的实际需要,开展符合医学伦理要求的以人群为基础、现场研究与实验室研究有机结合的项目,同时鼓励开展亟需的人群流行病学基础数据的调查研究[1].在这一方针指导下,流行病学专业的基金申请和资助都得到了长足发展.现就2007年度国家自然科学基金流行病学项目的受理和资助情况作一介绍,通过对该专业面上项目申请和资助项目的评析,反映流行病学领域近年来基础研究的热点、发展方向和存在的问题,为从事流行病学研究工作的科研人员今后申报国家自然科学基金提供参考.     

壳聚糖为载体金属亲和吸附剂的制备及性质

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂、亚氨基二乙酸(IDA)为螯合配基制备分别固载有Cu2+、Zn2+和Mn2+的三种金属螯合亲和吸附剂,其稳定性与机械强度均较好。实验表明,交联反应中戊二醛w=2.5×10-3时制得的上述三种吸附剂对牛血清白蛋白均具有最大吸附量,所得吸附剂膨胀度为8.46mL·g-1,对Cu2+的螯合量为70.61mg·g-1。对螯合配基亚氨基二乙酸与壳聚糖连接反应条件的选择表明:65℃、16h和CIDA=0.32moL·L-1时可获得对Cu2+最大螯合量。     

福氏不完全佐剂与pristane在腹水型单抗制备中的联合应用

为提高腹水型单抗的产量 ,在采用 pristane常规致敏BALB/c小鼠的基础上 ,于注射杂交瘤细胞的同时 ,再少量注入福氏不完全佐剂 (IncompleteFreund’Adjuvant ,IFA) ,7～ 10d后收获腹水 ;ProteinG免疫亲和层析法及紫外分光光度法对腹水型单抗进行纯化及蛋白定量 ;间接免疫荧光法对纯化的抗体蛋白进行效价分析。实验结果表明 :腹水形成的阳性率为 80 % ,腹水的平均收获量为 6.2ml/只小鼠。纯化后腹水中抗体蛋白的含量为 2 .5～ 5mg/ml ,纯化的抗体蛋白用于间接免疫荧光分析的用量为每 5× 10 5 个细胞 0 .5～ 1.0 μg。结果表明 ,pristane联合IFA可促进腹水型单抗的生成     

RNA干扰技术在肥胖研究中的应用

在多种生物细胞中，外源或内源性双链RNA（doublestranded RNA，dsRNA）可触发细胞内同源mRNA的特异性降解，从而使该基因表达沉默，这种现象称为RNA干扰（RNA interference，RNAi）。RNAi现象在生物中普遍存在。首先在线虫中发现了RNAi现象，随后证实在果蝇、涡虫、水螅、锥虫、小鼠胚胎细胞及哺乳动物成体细胞中均存在dsRNA介导的RNAi现象。由于RNAi在动植物抵抗外源病毒、生长发育调控方面起着重要作用。而且在功能基因组研究、基因治疗方面有着广泛的应用前景，所以对其研究较多。现在RNAi已用于在体研究，并在抗病毒、肿瘤、免疫、药理、遗传等方面得到广泛地应用。基因有限公司和宝生物公司等已开发出RNAi试剂盒。目前RNAi数据库与表型blast也已建立。本就RNAi干扰技术在肥胖研究中的应用作一综述。