假病毒技术在抗H5N1禽流感病毒中药筛选中的应用及评价

目的：建立基于假病毒技术的抗H5N1禽流感病毒中药筛选方法,利用血清药理学的方法系统评价攻下方、解毒方、凉血方和扶正方4类中药复方体外对H5N1禽流感病毒活性的影响及其机制。方法：构建整合H5N1禽流感病毒血凝素（hemagglutinin,HA）蛋白的假病毒,雄性Wistar大鼠25只灌胃不同中药制备复方中药血清。采用犬肾（Madin-Darby canine kidney,MDCK）细胞和人胚肾细胞293T为研究对象,将不同浓度药物血清分别与假病毒或靶细胞体外培养后,观察药物血清对假病毒活性的直接抑制作用,通过流式细胞术检测药物血清对H5N1禽流感病毒HA蛋白表达的影响。结果：HA蛋白特异性中和抗体2B4在50μL（抗体总量500μg）、25μL（抗体总量250μg）及12.5μL（抗体总量125μg）的剂量条件下均可以有效抑制假病毒的感染活性,从而证实利用假病毒技术筛选药物的方法的可行性。与对照血清相比,4种复方中药含药血清体外对假病毒均无明显抑制作用（P〉0.05）,也不能有效预防假病毒感染（P〉0.05）,不能抑制H5N1流感病毒HA蛋白的表达。结论：假病毒技术是一种安全、高效、精确的筛选抗H5N1禽流感病毒中药的方法;4类复方中药含药血清并不含有作用于H5N1假病毒HA蛋白及唾液酸α-2,3半乳糖苷受体的有效成分或单体。     

中药正肝化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织胶原代谢的影响

目的:观察正肝化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织胶原代谢的影响。方法:采用四氯化碳+高脂低蛋白饮食制备大鼠肝纤维化模型,治疗组以正肝化瘀方灌胃,正常组、模型组予以等量生理盐水灌胃,6 w后取材检测。用Jamall氏法测定各组大鼠肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,Western blot法检测各组大鼠肝组织α-SMA、Ⅰ型、Ⅳ型胶原蛋白的表达。结果:与模型组比较,治疗组大鼠肝组织Hyp含量及α-SMA、Ⅰ/Ⅳ型胶原蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论:正肝化瘀方的抗肝纤维化机制与减少肝组织胶原合成与沉积有关。     

他汀类降脂药对急慢性脑血管病的远期疗效及卒中再发风险的影响

目的：观察他汀类降脂药对急慢性脑血管病的远期疗效及卒中再发风险的影响。方法选取2009年5月～2010年5月我院就诊的急慢性脑血管病患者215例,随机分为研究组107例及对照组108例,观察IMT及动脉粥样硬化斑块面积的变化及血脂改变、心脑血管不良事件发生情况。结果治疗组患者治疗后与对照组TG、TC、LDL-C及HDL-C比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。两组患者12、18、24个月时两组IMT值比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;对所有患者随访2年,研究组致死性脑卒中、非致死性脑卒中、冠状动脉事件发生率及死亡率皆显著低于对照组,两组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论阿托伐他汀安全、有效、耐受性好,不良反应少,可作为伴有颈动脉粥样硬化患者的常规用药。     

禽流感病毒感染K-562和HL-60肿瘤细胞系的实验研究

目的选择代表不同骨髓细胞分化阶段的血液肿瘤细胞株K-562、HL-60作为研究对象,选取低致病性禽流感病毒H3N2/H4N6作为病原体,探讨禽流感病毒感染骨髓的机制。方法应用流式细胞术检测K562等细胞表面禽流感病毒受体;收集感染病毒的细胞培养上清,红细胞凝集实验检测染毒细胞释放的子代病毒;收集感染病毒的细胞免疫荧光检测病毒NP,判断病毒吸附、进入细胞并在细胞内增殖、复制情况。结果所检测细胞表面均有禽流感病毒SAα2,3-Gal和SAα2,6-Gal连接的唾液酸寡糖受体的表达。在H3N2感染的K-562细胞培养上清中检测到病毒HA,且随培养时间的延长,病毒的血凝滴度增大。在H4N6感染的K-562细胞的培养上清中病毒HA检测阳性,第三天,K-562细胞上清的病毒血凝滴度即达4,第四天达16;HL-60细胞,只在第三、四天达2;随后荧光显微镜下观察可见,染毒细胞培养0h时,胞膜、胞浆内即可见病毒分布,H4N6感染的细胞荧光强度大于H3N2感染的细胞;H3N2和H4N6感染的细胞中,K562细胞的荧光强度大于其他细胞。随着培养时间的延长,K562细胞表面的病毒增多,而HL-60细胞无明显变化。结论 K-562、HL-60细胞表面均表达禽流感病毒SA-α2,3Gal和SA-α2,6Gal连接的唾液酸寡糖受体。同一病毒H3N2或H4N6的吸附、繁殖和复制及释放情况存在较大差异。     

国产HBV DNA荧光定量PCR试剂检测准确性的初步分析

目的 评价国产HBV DNA荧光定量PCR试剂检测结果的准确性.方法 美国Roche公司COBAS TaqMan HBV Test对标本的HBV DNA定量为标准,评价国产HBV荧光定量PCR试剂(PG)对不同滴度的标本的检测准确性.结果 在病毒载量分别为10~1、10~2、10~3、10~4、10~5、10~6、10~7(IU/mL)范围内的标本中,国产试剂检测结果与Roche定量结果的相关性分别为:-0.08011、-0.05056、0.105642、0.312181、0.908046、0.866175、-0.23295;结果为阴性(低于检测范围)的比例分别为:60%、30%、33.3%、8.3%、0、0、0.对于病毒载量高于10~7(IU/ml)的标本,国产试剂检测结果全部低于美国Roche定量结果,至少低一个数量级.结论 国产HBV荧光定量PCR试剂线性范围较窄,仅对病毒载量在10~5～10~6(IU/ml)范围的标本检测结果准确,对于低病毒载量,尤其是低于10~3(IU/ml)的标本,结果不可靠,假阴性率较高.而对于病毒载量高于10~7(IU/ml)的标本检测结果也欠准确.因此,建议对病毒载量低于10~4(IU/ml)的标本采用美国Roche试剂检测,对于高于10~7(IU/ml)建议稀释标本后重新检测.     

儿童肺结核患者支气管肺泡灌洗液免疫细胞检测与分析

目的 采用流式细胞仪检测肺结核患者支气管肺泡灌洗液淋巴细胞亚群,探讨肺结核患者支气管肺泡灌洗液淋巴细胞免疫功能状态的变化。方法 选取19例儿童肺结核患者作为观察组,根据痰涂片结果分为菌阳组(11例)和菌阴组(8例)。同期选取就诊的21例成人肺结核患者作为对照组。通过流式细胞术对其进行检测,检测两组研究对象的支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞、单核细胞和B淋巴细胞比例的变化,并比较其差异性。结果 儿童肺结核患者的支气管肺泡灌洗液中各免疫细胞的比例分别为：T淋巴细胞(54.57±5.28)%、CD4⁺T淋巴细胞(66.14±4.08)%、CD8⁺T淋巴细胞(33.80±4.07)%和B淋巴细胞(13.54±2.53)%与成人肺结核患者的T淋巴细胞(53.30±4.76)%、CD4⁺T淋巴细胞(65.45±3.49)%、CD8⁺T淋巴细胞(34.55±3.49)%和B淋巴细胞(14.70±2.83)%比较,两组差异均无统计学意义(...     

高通量测序筛选结核分枝杆菌耐药株差异基因

目的比较结核分枝杆菌中敏感株、多耐药株、广泛耐药株三者间基因表达的差异,为进一步针对耐药菌株的研究提供方向。方法从深圳市第三人民医院收集敏感株、多耐药株、广泛耐药株各1株,提取菌株RNA,然后构建cDNA文库,使用Genome Analyzer IIx高通量测序仪进行全基因组测序,经过筛选比对后得到测序结果 ,再比较3个菌株间的基因表达差异。结果高通量测序后共得到基因3 968个。将耐药株与敏感株的基因进行比较,选取表达差异高于10倍的基因,筛选得到多耐药株差异基因16个、广泛耐药株差异基因10个。这些表达差异基因大部分与毒素-抗毒素系统、PE/PPE家族蛋白、金属转运蛋白相关。还在多耐药株中发现了一系列高表达的前噬菌体基因及噬菌体整合相关的基因。结论通过高通量测序筛选得到一系列耐药株差异表达基因,为未来对耐药菌株的研究提供依据。     

性别对结核筛查不同抗原酶联免疫斑点检测的影响

目的 比较结核相关抗原结核分枝杆菌早期分泌抗原6 (ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)刺激酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)与性别的关系.方法 应用ESAT-6抗原和CFP-10抗原,刺激男性健康人员951例和女性健康人员318例外周血单个核细胞(PBMC),进行ELISPOT检测计数刺激后斑点形成细胞(SFC)的数量.结果 男性健康人员ESAT-6抗原刺激形成的SFC数量为(6.61±7.64)个,女性为(7.94±8.74)个,女性高于男性,差异有统计学意义(P＜0.05);男性健康人员CFP-10抗原刺激形成的SFC数量为(4.27±5.57)个,女性为(4.45±5.03)个,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 女性健康人员ESAT-6抗原刺激形成的SFC数量高于男性,可能影响结核潜伏感染筛查.     

miR-150-5p/362-5p在结核菌潜伏感染者外周血单核细胞中的表达及诊断价值

目的分析miR-150-5p和miR-362-5p在结核菌潜伏感染者(LTBI)外周血单核细胞中的表达水平,并探讨其诊断价值。方法选取LTBI人群和健康对照(HD)各25例,应用Taq Man q PCR测定其外周血单核细胞中miR-150-5p和miR-362-5p表达水平,以U6 snRNA作为内参。应用ROC曲线评价miR-150-5p和miR-362-5p诊断LTBI的效果。结果 miR-150-5p在LTBI人群中的表达水平为(15.95±1.79),显著高于HD(7.09±0.52),差异有统计学意义(P0.01);miR-362-5p在LTBI人群中的表达水平显著低于HD(2.11±0.19 vs 4.94±0.51),差异有统计学意义(P0.01)。诊断LTBI的ROC曲线分析表明,miR-150-5p的敏感性、特异性分别为0.80、0.80;miR-362-5p的敏感性、特异性为0.88、0.76。结论 miR-150-5p、miR-362-5p在LTBI和HD人群外周血单核细胞中表达存在显著差异,对LTBI辅助诊断具有一定参考价值。