用实时荧光定量PCR检测NAT2基因型及其意义

目的 探讨深圳地区汉族人中NAT2基因分布特征,为开展NAT2基因与肿瘤相关性研究和药物代谢性疾病诊治提供依据。方法将DNA浓度为40 ng/μl的标本进行1×100、1×101、1×102、1 ×103、1 ×104倍比梯度稀释,以验证实时荧光定量PCR检测NAT2基因的灵敏度。采用实时荧光定量PCR结合TaqMan探针技术检测554名深圳汉族健康人NAT2基因282、341、481、590和857突变位点,并进行基因分型。同时用直接测序法对47名健康人标本进行平行检测,以验证和评价荧光定量PCR检测NAT2基因的敏感度、特异度和准确性。结果 经倍比梯度稀释试验验证实时荧光定量PCR检测NAT2基因的灵敏度可精确至10-4ng/μl。采用实时荧光定量PCR从554名深圳汉族人中检出NAT2*4、*5、*6、*7、*11等位基因频率分别为64.6％( 358/554)、6.3％( 35/554)、25.3％ (140/554)、30.0％( 166/554)、0.6％( 3/554)。主要基因型NAT2* 4/*6、*6/*7、*13/*13或*12/*12或*4/*4、*4/*7、*7/*13、*12、*6/*13(*12)频率依次为12.3％(68/554)、8.3％ (46/554)、7.6％(42/554)、40.5％(224/554)、8.1％ (45/554)、7.2％ (40/554)、5.6％(31/554),7种基因型约占总基因型的89.6％ (496/554)。深圳地区汉族人中NAT2基因主要等位基因为*4、*6、*7、*13,表型以快乙酰化型和中间型为主,分别占40.5％( 224/554)、46.7％(259/554),慢乙酰化型仅占12.8％(71/554)。用荧光定量PCR和直接测序法平行检测47名健康人NAT2基因,与直接测序法比较,检测282、341、481、590、857位点的敏感度分别为88.2％ (30/34)、87.5％( 7/8)、80.0％ (4/5)、100.0％ (22/22)、93.8％ (15/16),特异度分别为100.0％ (13/13)、94.9％ (37/39)、100.0％ (42/42)、96.0％( 24/25)、96.8％( 30/31),准确性分别为91.5％(43/47)、93.6％( 44/47)、97.6％( 46/47)、97.9％ (46/47)、95.7％ (45/47)。结论实时荧光定量PCR检测NAT2基因的灵敏度、敏感度、特异度高,适用于临床及科学研究,深圳地区汉族人主要NAT2等位基因是*4、*6、*7,最常见慢乙酰化表型为*6/*7,这为与NAT2基因相关的代谢性疾病及肿瘤研究提供了数据。     

重型颅脑损伤患者单核细胞人类白细胞抗原DR表达及意义

目的 研究重型颅脑损伤患者伤后外周血单核细胞人类白细胞抗原DR(HLA-DR)表达变化规律,探讨HLA-DR表达与感染和预后的关系.方法 选取颅脑损伤患者90例(试验组),按入院时格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分将试验组分为试验1组(GCS评分13～15分)、试验2组(GCS评分9～12分)、试验3组(GCS评分3～8分),每组30例,分别为轻、中、重型颅脑损伤患者.选择同期健康体检者30例作为对照组.采用流式细胞仪检测试验各组入院后1、3、7、14d及对照组体检当天外周血单核细胞HLA-DR表达情况,入院后30 d统计试验组患者感染率、治愈率、残疾率、植物状态率、病死率.结果 试验1组、试验2组入院后1、3、7、14d外周血单核细胞HLA-DR表达[分别为(28.11±2.37)、(26.45±1.63)、(27.75±1.83)、(27.15±2.17) MCF,(29.34±2.07)、(27.55±1.63)、(28.42±1.94)、(29.46±2.12) MCF]与对照组体检当天[(29.18±1.91) MCF]比较差异无统计学意义(P＞0.05),试验1组、试验2组入院后1、3、7d及对照组体检当天HLA-DR表达与试验3组入院后1、3、7d[分别为(18.02±1.78)、( 16.05±1.97)、( 20.76±1.65) MCF]比较差异有统计学意义(P＜0.05),但试验1组、试验2组入院后14d及对照组体检当天与试验3组入院后14d[(26.13±2.15) MCF]比较差异无统计学意义(P＞0.05).试验1组、试验2组、试验3组感染率分别为0、3.6％( 1/28)、82.8％(24/29),治愈率分别为100.0％(30/30)、100.0％(28/28)、10.3％(3/29),残疾率分别为0、0、41.4％(12/29),植物状态率分别为0、0、20.7％(6/29),病死率分别为0、0、27.6％(8/29),试验1组与试验2组感染率、治愈率、残疾率、植物状态率、病死率比较差异无统计学意义(P＞0.05),但试验1组、试验2组与试验3组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 轻、中型颅脑损伤患者入院后1、3、7、14d外周血单核细胞HLA-DR表达变化不明显,重型颅脑损伤患者HLA-DR表达伤后1d开始下降、3d明显下降、7d开始升高、14d恢复到正常水平,重型颅脑损伤患者HLA-DR表达下降与感染有相关性,并预示预后不良.     

流式检测C1_q~+的细胞表达及在肺结核诊断中的价值

目的初步建立全血细胞中CD+16CD+68CD+14CD-3C1+q的流式检测方法,评价其在结核病诊断中的价值。方法利用流式细胞技术检测CD+16CD+68CD+14CD-3细胞表面C1+q的表达,比较其在健康照(26例),结核潜伏感染者(12例)、活动性结核患者(19例)的表达情况。结果活动性结核患者组外周血CD+14CD-3细胞显著高于健康对照(P0.05);活动性结核患者组CD+16CD+68CD+14CD-3细胞表面C1+q的表达显著高于结核潜伏感染组和健康对照组(P0.05)。结论在活动性结核病人的外周血中,C1+q在CD+16CD+68CD+14CD-3细胞表面高于潜伏感染者,为活动性肺结核患者与潜伏感染者的临床鉴别诊断技术的研究和开发,提供了一条可行的思路。     

外周血单核细胞miRNA表达谱在肺结核中的诊断价值

目的分析活动性肺结核患者(TB)外周血CD14+单核细胞mi RNA表达谱,筛选一组用于结核诊断及鉴别诊断的分子标志物。方法选取健康对照(HD)、结核菌潜伏感染者(LTBI)、TB各6例,采集外周抗凝血并分离外周单个核细胞(PBMC),再用免疫磁珠技术分选CD14+单核细胞,提取总RNA,利用mi RNA芯片检测CD14+单核细胞中mi RNA表达谱。筛选差异表达的mi RNA分子,利用Taq Man探针q PCR技术在大样本人群中进行验证(HD、LTBI、TB各25例)。结果基因芯片结果显示mi R-487家族可以将三组人群进行有效区分,依据其在不同人群中表达趋势共分为4个基因簇。从每个基因簇中筛选具有代表性的4个mi RNA分子进行Taq Man q PCR验证,包括mi R-487b-3p、mi R-134-5p、mi R-487a-3p、mi R-539-3p,其表达趋势与芯片结果一致。其中TB人群mi R-487b-3p表达量显著低于HD、LTBI,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01);mi R-487a-3p在LTBI、TB人群中表达水平显著低于HD(P<0.01,P<0.05);TB人群mi R-539-3p表达水平显著高于HD、LTBI(P<0.05,P<0.05)。结论 mi R-487家族与结核菌感染、发病的关系密切,其中mi R-487b-3p联合mi R-539-3p可以作为活动性结核诊断标识,而mi R-487a-3p可以作为结核菌感染诊断标识。     

两种HCV RNA定量检测方法的临床对比研究

目的对比分析某国产的丙型肝炎病毒(HCV)核酸定量检测试剂(简国产试剂)和某进口试剂(简称进口试剂),检测其对HCV血清病毒载量的相关性和一致性。方法收集2019年1月至5月期间在深圳市第三人民医院就诊的慢丙肝患者临床检测剩余血清标本132份,采用进口试剂和国产试剂,平行检测HCV感染者血清病毒载量,采用t检验、线性回归和Bland-Altman等方法进行统计分析,评价2种检测试剂检测结果的相关性和一致性。结果国产试剂和进口试剂检测结果均高于或低于检测下限的样本分别为114例和6例,检测结果一致性较高,达到90.91%(120/132)。进口试剂和国产试剂检测结果均高于检测下限的114例样本中,国产和进口试剂检测结果的平均HCV血清病毒载量分别为((2.38×10~4～5.6×10~6)IU/mL,(5.47×10~6～1.39×10~7)IU/mL,差异具有统计学意义(t=-3.32,P=0.001)。2种检测方法在病毒载量>1 000 IU/mL时差异有统计学意义(t=-2.45,P=0.02),在病毒载量<1 000 IU/mL时差异也具有统计学意义(t=-2.30,P=0.03)。相关分析显示,2种方法检测结果具有很强的相关性(r=0.98,P<0.001)。差异性分析显示,进口试剂与国产试剂的2者定量值差异的平均值为-0.33 log10 IU/mL,其95%可信区间为(-0.91～0.25)log10 IU/mL。96%(109/114)的样本检测值在95%的可信区间内。结论进口试剂与国产试剂2种试剂具有较高的相关性和一致性。     

深圳市78例新型冠状病毒肺炎患者外周血实验室检查结果

目的 分析新型冠状病毒患者血液中各指标特点,为临床诊治提供理论依据。方法 以明确诊断为新型冠状病毒肺炎的不同临床分型的78例患者为研究对象,分析其外周血白细胞、血清生化等指标检测结果,并对其中10例痊愈患者和3例死亡患者在病程早期（0~<10 d）、中期（10~<20 d）和后期（≥20 d）的上述各项指标进行动态观察。结果 78例患者中,轻型7例,普通型50例,重型9例,危重型12例。与轻型和普通型患者相比,重型和危重型患者病程早期的淋巴细胞绝对值、T淋巴细胞亚群（CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺）明显降低,而CK显著升高 (P<0.05),危重型患者的PCT、D-二聚体、AST、ALT以及MYO等指标均显著升高 (P<0.05);10例痊愈患者中,部分患者早期（0~<10 d）IL-6和30%的C反应蛋白明显升高,病程中期（10~<20 d）部分患者出现LYM降低,NEUT和D-二聚体升高,病程后期（≥20 d）除C反应蛋白、D-二聚体和IL-6外,其余各项指标逐步恢复至正常水平。CK指标在整个病程过程中无明显变化。3例死亡患者病程早期（0~<10 d）的NEUT、PCT、D-二聚体、IL-6、CK、MYO、C反应蛋白等指标明显高于正常水平,LYM降低,一直到病程晚期（≥20 d）仍远高于正常水平的指标有D-二聚体、PCT、ALT、AST、CK、MYO和IL-6。MYO和IL-6在整个病程中呈进行性升高（(P<0.05)。结论 新型冠状病毒肺炎重型和危重型患者的炎症反应比轻型和普通型患者重,更易出现心肌和肝功能损伤;CK、MYO、IL-6、C反应蛋白等指标在病程早期的持续明显升高,可作为临床上判断患者病情程度,提示预后的重要参考指标。     

树突状细胞表面特异性非整联蛋白同源物基因多态性与丙型肝炎病毒感染的相关性

目的 研究丙型肝炎患者树突状细胞表面特异性非整联蛋白同源物(DC-SIGNR)外显子4基因颈区重复序列的遗传多态性分布,探讨DC-SIGNR基因多态性与HCV病毒基因分型及HCV载量的关系. 方法采用PCR结合DNA测序对268例丙型肝炎患者DC-SIGNR重复序列多态性进行基因分型和测序分析,同时检测患者的HCV病毒载量及HCV病毒基因分型.组间两两比较用LSD法.结果 DC-SIGNR基因型或等位基因与HCV基因分型的相关性不显著.HCV载量携带7等位基因的患者为(4.6722±1.9766)log10拷贝/ml,携带9等位基因的患者为(5.3073±1.6795)log10拷贝/ml,P=0.036,两组差异有统计学意义.7/7基因型的患者HCV载量水平为(4.5974±2.0067)log10拷贝/ml,9/7基因型的患者组为(5.2771±1.8587)log10拷贝/ml,P=0.025,两组差异有统计学意义.提示HCV更易与携带较长DC-SINGR等位基因的患者结合.结论 DC-SIGNR遗传多态性可能与HCV在个体内的复制有关,但与HCV基因分型不相关.     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在慢性乙型肝炎患者中的作用

目的 探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与乙型肝炎慢性化和病毒清除之间的关系.方法 收集慢性活动性乙型肝炎(CAH)患者19例、HBV携带者(AsC)21例、HBV感染恢复者12例和健康对照者15例.通过流式细胞术分析外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞的表型和频率,磁珠分选(MACS)CD4+CD25+T细胞,实时荧光定量PCR方法 分析Foxp3 mRNA基因在CD4+CD25+T细胞的表达水平.统计学处理采用单因素方差分析或非参数检验.结果CAH或AsC组外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞频率以及CD4+CD25+T细胞中Foxp3 mRNA的表达水平显著高于健康对照组或HBV感染恢复者(F=6.8,F=3.72,均P<0.05).免疫组织化学染色发现,CAH患者肝组织Foxp3'T细胞浸润累积较对照组明显增高,但AsC较CAH减少.HBeAg阳性患者(包括CAH和AsC)CD4'CD25'T细胞频率显著高于HBeAg阴性患者(t=2.3,P<0.05),抗-HBe阴性患者显著高于抗-HBe阳性患者(t=2.4,P<0.05).CD4+CD25+Foxp3+T细胞频率与慢性乙型肝炎患者血清中HBV病毒载量存在正相关(r=0.56,P<0.01).结论 慢性乙型肝炎患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞异常与乙型肝炎慢性化和病毒清除有关.     

甲型H1N1流感肺炎胸部CT表现半定量评分与病毒载量的相关性研究

目的：探讨甲型H1N1流感肺炎的胸部影像表现及HRCT评分与病毒载量的相关性。方法：对21例甲型H1N1流感肺炎核酸检测阳性的患者进行甲型H1N1流感病毒载量测定,并进行胸部CT扫描（含HRCT）检查,同时进行CT评分。观察CT表现及相应病毒载量变化,并进行统计学分析处理。结果：①21例甲型H1N1流感肺炎患者于发病第4天CT评分均值最高为5.9分,以磨玻璃密度及实变影为主,于发病第5天病毒载量最高为5.77copies/ml;②孕产妇及有基础疾病组入院初次病毒载量较无基础疾病组低（分别为3.76copies/ml和5.02copies/ml）,差异具统计学意义（P〈0.05）;③CT评分孕产妇及有基础疾病组高于无基础疾病组（分别为6.13分和3.38分）,但差异无统计学意义（P〉0.05）;④动态观察10例甲型H1N1流感肺炎患者中7例病毒转阴时间快于肺内病灶吸收时间,而3例年幼患者病毒转阴时间明显延长,肺内病灶吸收较快。结论：甲型H1N1流感肺炎的胸部CT表现半定量评分与病毒载量无明显相关性。成年患者临床症状的改善、病毒转阴时间快于肺内病灶的吸收时间,而儿童则相反。临床甲流相关性肺炎肺内病灶的吸收不等于病毒在体内完全消失,尤其是儿童。